บล็อก เกี่ยวกับ แนวทางใหม่สำหรับการทดสอบและการวินิจฉัยไข้หวัดนก

เมื่อภัยคุกคามจากไวรัสไข้หวัดนก (AIV) ทวีความรุนแรงขึ้นทั่วโลก การวินิจฉัยที่ทันท่วงทีและแม่นยำได้กลายเป็นสิ่งสำคัญยิ่งสำหรับการควบคุมโรคที่มีประสิทธิภาพ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับไข้หวัดนกชนิดรุนแรง (HPAI) ศักยภาพในการแพร่กระจายอย่างรวดเร็วและความเสี่ยงในการติดเชื้อข้ามสายพันธุ์ทำให้การตรวจจับตั้งแต่เนิ่นๆ เป็นสิ่งจำเป็น เทคโนโลยี Real-time quantitative polymerase chain reaction (Real-time PCR) ด้วยความไวสูง ความจำเพาะสูง และความสามารถในการตอบสนองที่รวดเร็ว ได้กลายเป็นมาตรฐานทองคำสำหรับการตรวจจับ RNA ของ AIV คู่มือฉบับสมบูรณ์นี้จะอธิบายรายละเอียดเกี่ยวกับโปรโตคอลการทดสอบ avian influenza PCR (AIPCR) ขั้นตอนการเก็บตัวอย่าง และแนวทางการส่งตัวอย่างเพื่อสนับสนุนสถาบันวิจัย ห้องปฏิบัติการวินิจฉัยสัตว์ และผู้เชี่ยวชาญด้านปศุสัตว์

AIPCR ใช้เทคนิค Real-time fluorescence quantitative PCR เพื่อเพิ่มจำนวนและติดตามลำดับจีโนมของ AIV ที่จำเพาะผ่านไพรเมอร์และโพรบที่กำหนดเป้าหมาย โดยการวัดสัญญาณฟลูออเรสเซนส์ที่สะสม การทดสอบจะระบุการมีอยู่ของ RNA ไวรัสทั้งในเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ ข้อได้เปรียบที่สำคัญ ได้แก่:

• ความไวสูง: ตรวจจับความเข้มข้นของ RNA ไวรัสในปริมาณน้อยสำหรับการวินิจฉัยการติดเชื้อระยะเริ่มต้น
• ความจำเพาะสูงเป็นพิเศษ: แยกความแตกต่างระหว่างชนิดย่อย/สายพันธุ์ของ AIV ผ่านโพรบที่จำเพาะต่อลำดับ
• การประมวลผลที่รวดเร็ว: ให้ผลลัพธ์ภายในไม่กี่ชั่วโมงสำหรับการตอบสนองต่อการระบาดที่ทันท่วงที
• ความสามารถในการวัดปริมาณ: สัมพันธ์ความเข้มของฟลูออเรสเซนส์กับปริมาณไวรัสสำหรับการประเมินความรุนแรง

การประยุกต์ใช้เทคโนโลยีนี้ขยายไปไกลกว่าสัตว์ปีกไปยังสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ไวต่อการติดเชื้อ AIV รวมถึงการตรวจพบ HPAI ล่าสุดในประชากรสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่ง AIPCR มีบทบาทสำคัญในการควบคุม การเฝ้าระวังสิ่งแวดล้อมก็อาจใช้วิธีนี้ได้เช่นกันเมื่อจำเป็น

การทดสอบ AIPCR มาตรฐานโดยทั่วไปจะให้ผลลัพธ์ภายใน1-3 วันทำการ หลังจากได้รับตัวอย่าง สำหรับกรณีเร่งด่วน:

• การประมวลผลภายในวันเดียวกัน (ตัวอย่างที่ไม่ใช่โค): ต้องส่งแบบฟอร์มและหมายเลขติดตามทางอิเล็กทรอนิกส์ก่อนที่สินค้าจะมาถึง ตัวอย่างต้องถึงห้องปฏิบัติการภายในเวลา 11:00 น. ตามเวลาตะวันออกในวันทดสอบ โดยมีด้านของภาชนะขนส่งทั้งหมดมีเครื่องหมาย "X" ขนาดใหญ่ด้วยปากกามาร์กเกอร์สีดำอย่างชัดเจน
• การรายงานผลช่วงสุดสัปดาห์: มีให้บริการสำหรับกรณีที่มีความเสี่ยงสูงและมีผลกระทบต่อสาธารณสุขอย่างมีนัยสำคัญ

การจัดการตัวอย่างที่เหมาะสมช่วยให้มั่นใจได้ถึงผลการทดสอบที่เชื่อถือได้:

• ไม้พันสำลี: ใช้หลอดขนส่งไวรัสที่ปลอดเชื้อและปิดสนิทพร้อมน้ำเกลือเล็กน้อยหากไม่มีสารละลายพิเศษ ห้ามใช้สารละลายขนส่งเจลแบคทีเรียโดยเด็ดขาด
• เนื้อเยื่อทางเดินหายใจ: ใส่ในภาชนะปลอดเชื้อที่ป้องกันการรั่วซึมและแตกหักได้

• ไม้พันสำลี: สารละลายขนส่ง 3-5.5 มล.
• เนื้อเยื่อ: วัสดุเพียงพอสำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกทั้งหมด

• รักษาความสมบูรณ์ของ RNA ผ่านการขนส่งแบบควบคุมอุณหภูมิ (แพ็คน้ำแข็งหรือน้ำแข็งแห้ง)
• เร่งการจัดส่งเพื่อรักษาสมบัติของกรดนิวคลีอิก

• ติดฉลากภาชนะทั้งหมดด้วยแหล่งที่มา วันที่เก็บ และข้อมูลสัตว์
• กรอกแบบฟอร์มการส่งพร้อมรายละเอียดทางคลินิกและข้อมูลติดต่อ
• ตัวอย่างที่ไม่เป็นไปตามข้อกำหนดอาจทำให้เกิดความล่าช้าในการประมวลผลและมีค่าธรรมเนียมเพิ่มเติม

สำหรับการส่งจำนวนมาก ห้องปฏิบัติการแนะนำให้ประสานงานล่วงหน้าเพื่อให้แน่ใจว่ามีการจัดสรรทรัพยากรเพียงพอ

ผลบวกทั้งหมดจะได้รับการทดสอบยืนยันที่ห้องปฏิบัติการอ้างอิงที่กำหนด วิธีการกำหนดเป้าหมายกรดนิวคลีอิกใช้เทคโนโลยี Real-time PCR เท่านั้น

การทดสอบ AIPCR เป็นเครื่องมือสำคัญในการเฝ้าระวังไข้หวัดนก โดยผสมผสานความแม่นยำระดับโมเลกุลกับประสิทธิภาพในการดำเนินงาน การปฏิบัติตามโปรโตคอลการเก็บ การขนส่ง และการส่งตัวอย่างที่เป็นมาตรฐานจะช่วยเพิ่มความแม่นยำในการวินิจฉัย ซึ่งเป็นรากฐานสำหรับการควบคุมการระบาดและการปกป้องสุขภาพสัตว์ที่ทันท่วงที การสื่อสารเชิงรุกกับสถานทดสอบจะช่วยให้มั่นใจได้ถึงการใช้ทรัพยากรที่เหมาะสม โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับความต้องการการทดสอบปริมาณมากหรือเฉพาะทาง