บล็อก เกี่ยวกับ นักวิทยาศาสตร์ ปรับปรุงเทคนิค PCR เพื่อป้องกันการติดเชื้อ

คุณเคยรู้สึกผิดหวังกับผลการทดลอง PCR ที่ไม่สามารถอธิบายได้บ้างไหม? แม้ว่าจะปฏิบัติตามโปรโตคอลอย่างละเอียด แต่ก็มีช่วงที่ไม่เฉพาะเจาะจงปรากฏขึ้น หรือเกิดปฏิกิริยาที่หนักเกินผู้กระทําผิดอาจเป็นการปนเปื้อนด้วย PCR ผ่าตัดที่เงียบเงียบของชีววิทยาโมเลกุลศัตรูที่มองไม่เห็นนี้ สามารถทําลายการทดลองโดยไม่ต้องเตือน ทําให้การทํางานอย่างละเอียดหลายชั่วโมงกลายเป็นข้อมูลที่ไม่น่าเชื่อถือแต่การเข้าใจและป้องกันการปนเปื้อน สามารถคืนความแม่นยําของผลงานของคุณ.

การปนเปื้อนด้วย PCR เกิดขึ้นเมื่อ DNA ต่างประเทศเข้าสู่กระบวนการกระตุ้นโดยไม่ตั้งใจหรือแม้แต่นักวิจัยเอง (ผ่านเซลล์ผิวหนังหรือเซลล์เยื่อ)เมื่อนําเข้าแล้ว ซีควีนดีเอ็นเอต่างชาติเหล่านี้ จะกลายเป็นเป้าหมายในการขยายผล สร้างผลที่เป็นบวกเท็จ ที่ทําให้ความเป็นจริงของการทดลองเสี่ยง

การควบคุมการปนเปื้อนอย่างมีประสิทธิภาพ ต้องการมาตรการที่เป็นระบบตลอดกระบวนการทํางานการทดลอง

• การดําเนินงานในเขต:กําหนดพื้นที่ทํางานที่แยกแยกอย่างชัดเจน: "บริเวณที่สะอาด" สําหรับการเตรียมสารปฏิกิริยา, "บริเวณที่ติดเชื้อครึ่ง" สําหรับการจัดการตัวอย่าง, และ "บริเวณที่ติดเชื้อ" สําหรับการขยาย.อุปกรณ์และบุคลากรไม่ควรข้ามระหว่างโซน.
• การฆ่าเชื้อ UV:ให้ฉายแสงด้วยแสง UV ต่อพื้นที่ทํางาน, เซนทริฟิวเจอร์, ปิปเป็ต และเครื่องมือ PCR เพื่อทําลาย DNA ที่เหลือ
• ความดันอากาศบวก:ให้การไหลของอากาศห้องทดลองเคลื่อนย้ายออกไป เพื่อป้องกันสารปนเปื้อนจากสิ่งแวดล้อมจากการเข้า
• การป้องกันตัวตนแต่งเสื้อแล็บ, ถุงมือ, และหน้ากาก. เปลี่ยนถุงมือบ่อย, โดยเฉพาะระหว่างการจับตัวอย่างหรือสารปฏิกิริยาที่แตกต่างกัน.

• เครื่องปฏิกิริยาที่ควบคุมคุณภาพ:ใช้คิท PCR ทางการค้าที่ได้รับการรับรองว่าไม่มี DNase สําหรับการเตรียมตัวในบ้าน ใช้เทคนิคการฆ่าเชื้อและรักษาด้วย DNase
• สินค้าใช้เฉพาะ:ใช้ท่อ, ปลายและแผ่นที่ได้รับการรับรองว่าไม่มี DNase / RNase เท่านั้น ไม่ควรเปลี่ยนด้วยของพลาสติกมาตรฐาน
• สถิติของ Aliquot:แบ่งสารปฏิกิริยาจํานวนมากเป็นส่วนที่ใช้ครั้งเดียว ภายใต้สภาพที่ไร้เชื้อเพลิง เพื่อลดโอกาสการติดเชื้อให้น้อยที่สุด

• การปิปปิปต์ด้านหน้า:ให้ปลาย pipette มักมีมุมขึ้นในระหว่างการโอน เพื่อป้องกันการถอนของของเหลวเข้าไปในกระบอก pipette
• เคล็ดลับที่กรอง:ใช้ปลาย pipette ที่ทนต่อระบายอากาศ เพื่อป้องกันการแพร่ระบาดของสารพิษ
• ปฏิกิริยาควบคุม:รวมทั้งคอนโทรลบวก (ที่มี DNA เป้าหมายที่ทราบ) และคอนโทรลลบ (ไม่มีแบบจําลอง) ในทุกการทํางาน การขยายคอนโทรลลบเป็นสัญญาณการติดเชื้อที่ต้องการการสืบสวนทันที

• การล้างระบบ:ปรสิตทุกพื้นที่ทํางาน อุปกรณ์และพื้นด้วยสารแก้ไขที่เหมาะสม
• การทําความสะอาดด้วยเอ็นไซม์รักษาวัสดุที่มีการคาดเดาว่าติดเชื้อด้วย DNase I เพื่อทําลาย DNA ที่ไม่ต้องการ

การติดเชื้อด้วย PCR แม้ว่ามันจะน่ากลัว แต่มันไม่น่าพ่ายแพ้ โดยการควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวด เทคนิคที่มีวินัย และการเฝ้าระวังอย่างต่อเนื่อง นักวิจัยสามารถทําให้ภัยคุกคามที่มองไม่เห็นนี้หายไปการนํามาใช้มาตรการเหล่านี้จะทําให้ผลการขยายที่น่าเชื่อถือได้, สร้างพื้นฐานให้กับข้อสรุปทางวิทยาศาสตร์ที่มั่นคง