ブログ について Thermo FisherのPCR試薬、遺伝子検出技術を前進させる

生命科学の研究が急速に発展していますリアルタイムの定量PCR (qPCR) とデジタルPCR (dPCR) は 感度に関する課題に取り組む科学者にとって不可欠なツールとなっています遺伝子検査の特異性と効率性. これらの技術の印象的な性能の裏には,高品質の試料とキットが不可欠なサポートにあります.生命科学の世界的リーダー基礎研究から臨床診断まで リアルタイムPCRソリューションを 提供しています

特定のキットについて調べる前に PCR反応剤の物理形式を考慮することが重要です 異なるフォーマットには 異なる貯蔵要件,使いやすさ,アプリケーションシナリオが含まれておりテルモ・フィッシャー社は,様々な研究室のニーズを満たすために,複数のフォーマットでリアルタイムPCR試薬を提供しています:

• 冷凍:最も一般的な形式の1つで,典型的には高活性酵素と核酸を含んでいる.冷凍反応剤は活性成分の安定性を最大化するが,活性性の喪失を防ぐために厳格な冷蔵庫と適切な解凍を必要とする..
• 液体:最も便利な形式で,再調製を必要とせず,すぐに使用可能で,実験時間を大幅に節約します.これらの試料は,通常,室温または冷却下で安定性を維持するために最適化されています.
• 溶解液化:長期にわたって安定性があり,保存や輸送が容易で,溶解時に活性度が最小限に低下します.長期にわたって保存または不安定な条件下で使用を必要とする試薬剤に最適です.
• 液体または冷凍:ユーザが好みや実験要件に基づいて選択する柔軟性を提供します.
• パスト:追加量の正確な制御を必要とするアプリケーションでは,あまり一般的ではありませんが,潜在的に有利です.
• 解決策:液体形式に似ているが,使用準備中の溶解状態を強調する.

PCR実験では反応剤濃度が極めて重要で,反応効率と結果の正確さに直接影響します.サーモ・フィッシャーのリアルタイムPCR試料は プロレベルの濃度仕様を示しています:

• コピー/μL:核酸基準またはテンプレート濃度を測定するための標準単位である. 1 x 10^5 から 1 x 10^9 コピー/μL,これらの正確なグラディエントは定量的なPCRの正確な校正基準を提供します.複製可能で信頼性の高い結果を保証します.
• 希釈因数 (X):10X,1X,2.5X,20X,25X,2X,および5Xなど,通常はマスターミックスまたはプライマー/プロブ混合物の濃度を記述する.例えば,2X (マスターミックス),10X (プライマー/プロブミックス) "は,マスターミックスが2倍濃縮され,プライマー/プロブミックスが10倍濃縮されていることを示します.使用前に比例的に稀释する必要があります.
• 特殊濃度:50μMなど,通常dNTPまたは特定の化学反応剤を記述し,カスタム反応システム準備のための参照を提供する.

リアルタイムPCR技術は進化を続け,複数の検出方法とプラットフォームが生み出しています. Thermo Fisherの製品ラインは以下の主流技術をカバーしています.

• デジタルPCR (dPCR):qPCRの高度なバージョンで 検体をナノリッター規模の反応単位に分割して 絶対量化を実現し より高い感度と精度を 提供します特に低濃度標的と変異検出には.
• HRM (高解像度メルト)熱化中にDNA複合体溶解行動をモニターすることによって遺伝子型を区別する迅速で経済的な遺伝子型化方法. 遺伝学研究と疾患診断に広く使用されています.
• SYBR グリーン複線DNAに結合する一般的な熒光染料で, qPCRの広範な応用に シンプルさとコスト効率性を提供します
• タクマン:この方法は,Taqポリマレーゼの5'外核酶活性を通して増幅中に,反光信号を放出することで,より高い特異性を提供します.遺伝子発現分析とSNPゲノタイプ化に最適.
• 試料探査機タクマンの技術が基礎となり,Thermo Fisherは様々なアプリケーションをカバーする195の関連製品を提供しています.
• qPCRとRT-PCR:密接に関連した技術では,RT-PCRはPCR増幅の前にRNAをcDNAに逆転転写し,qPCRは定量化のためにリアルタイム・フローレスセンスのモニタリングを追加します.

リアルタイムのPCRの強みは,その幅広い応用性にある.サーモ・フィッシャー社の試料とキットは,様々な生命科学研究分野に役立つ:

• 遺伝子発現分析遺伝子発現の変化を研究するための古典的な qPCR 応用は様々な条件下で行われます
• 病原体検出:感染症対策,食品安全,環境モニタリングに不可欠です
• 微生物検出:病原体以外にも 環境微生物とプロバイオティクスに関する研究を目的としています
• 食品と飲料:遺伝子組み換え物の検出,アレルゲン検査,微生物汚染の分析
• 動物の健康獣医学研究と動物疾患診断の支援
• DNA抽出と浄化PCRの成功に不可欠な高品質のDNAテンプレートを提供する.
• DNA 量化DNA濃度を正確に測定できる
• コピー数変異分析:遺伝子疾患やがんの研究にとって重要です
• ゲノタイプ:遺伝的多形態性と病気への易感性を研究するための基礎
• ミRNA 解析遺伝子調節と病気における miRNAの役割を調査する
• 腫瘍学ガン遺伝子の変異を検出し 治療への反応を監視する

テクノロジー・プラットフォームとアプリケーションを超えて,反応剤性能指標は決定的な選択要因である.

• 感度 (高い/中等/低い):高感度反応剤は,低濃度の遺伝子発現や微量病原体検出に不可欠な極低濃度の標的を検出する.
• 発光染料とリポーター:FAM,SYBR Green,VIC,ROX,FAM+VICのような組み合わせを含む.様々な楽器プラットフォームと互換性がある.
• 反応タイプ:
  • 1段階RT-PCR/RT-qPCR: リバーストランスクリプションとPCRを1つのチューブで組み合わせることで,簡便性と効率性を高めます.
  • 2段階RT-qPCR:より精密な制御または複数の標的分析のための分離プロセス.
  • マルチプレックス qPCR: 一つの反応で複数の標的を同時に検出する.
  • デジタルPCR (dPCR):絶対量化を提供する.
• 反応時間:"Fast"シリーズと最適化されたオプション (例えば<2時間,10分,30~60分) を提供して研究サイクルを加速します.

代表的なサーモ・フィッシャー製品が リアルタイムPCR技術における 企業の革新性を示しています

• スーパースクリプトTMIIIプラチナTMワンステップqRT-PCRキット:超スクリプトTMIIIリバーストランスクリプターゼとプラチナTMDNAポリマレーズを組み合わせて,繊細で特異的な検出をフルオレッセンスの探査機とSYBRTMグリーンオプションの両方で行う.
• TaqManTM マイクロRNA リバーストランスクリプションキット:具体的には,高度な敏感性 (1-10 ng の総RNA 入力) と急速な処理を伴う成熟したmiRNA (前体ではない) を定量化する.
• パワー SYBRTM グリーン RNA-to-C_TTM 1 ステップキット:革新的な製法により プライマーダイマー・アーティファクトが減少し 低濃度標的を 確実に検出できます
• MycoSEQTM Plus マイコプラズマ検出キット:TaqManTM ベースの qPCR キットは,バイオ医薬品産業の細胞培養バッチにおけるマイコプラズマの急速検査のために設計されています.
• resDNASEQTM dPCR E. coli DNA キット:バイオ医薬品の品質管理に不可欠な E. coli発現システムを用いて再結合タンパク質とプラズミド生産における宿主細胞DNAを検出するための dPCR溶液.
• TaqManTM オンコロジー dPCR マルチプレックスキット,BRAF V600:マルチプレックス dPCR キット 精密腫瘍研究における BRAF V600 バイオマーカーの絶対定量化

リアルタイムPCR技術における Thermo Fisherの幅広い専門知識と革新性を示しています科学的発見を加速させるための正確な遺伝子検査ツール.