وبلاگ در باره تجهیزات PCR ترموفیشر فناوری تشخیص ژن را پیش می‌برد

در زمینه ی به سرعت در حال تکامل تحقیقات علوم زیستی،PCR کمی در زمان واقعی (qPCR) و PCR دیجیتال (dPCR) ابزاری ضروری برای دانشمندان در حال مقابله با چالش های حساسیت شده اند.، خاصیت و کارایی آزمایش ژنتیکی. پشت عملکرد چشمگیر این فناوری ها، پشتیبانی حیاتی از واکنش ها و کیت های با کیفیت بالا وجود دارد.یک رهبر جهانی در علوم زندگی، راه حل های PCR جامع در زمان واقعی را از تحقیقات اساسی تا تشخیص بالینی ارائه می دهد.

قبل از بررسی کیت های خاص، لازم است که فرمت فیزیکی واکنش دهنده های PCR را در نظر بگیریم، زیرا فرمت های مختلف نیازمندی های مختلف ذخیره سازی، سهولت استفاده و سناریوهای کاربرد را نشان می دهد.ترمو فیشر برای پاسخگویی به نیازهای مختلف آزمایشگاه، واکنش های PCR را در زمان واقعی در فرمت های مختلف ارائه می دهد.:

• منجمد:یکی از رایج ترین فرمت ها، که معمولا حاوی آنزیم های بسیار فعال و اسیدهای نوکلئیک است.واکنش های یخ زده ثبات اجزای فعال را به حداکثر می رسانند اما برای جلوگیری از از دست دادن فعالیت، نیاز به ذخیره سازی زنجیره سرد و ذوب مناسب دارند..
• مایع:مناسب ترین فرمت، بدون نیاز به راه اندازی مجدد و آماده برای استفاده فوری، به طور قابل توجهی زمان آزمایش را صرفه جویی می کند.این واکنش ها اغلب برای حفظ ثبات در دمای اتاق یا زیر یخچال بهینه شده اند.
• لیوفیلیزه شده:ارائه ثبات طولانی مدت عالی، ذخیره سازی آسان و حمل و نقل، با حداقل از دست دادن فعالیت در هنگام راه اندازی مجدد. ایده آل برای واکنش هایی که نیاز به ذخیره سازی طولانی مدت یا استفاده در شرایط ناپایدار دارند.
• مایع یا لیوفیلیزه شده:انعطاف پذیری را برای کاربران فراهم می کند تا بر اساس ترجیحات و الزامات تجربی انتخاب کنند.
• چسب:کمتر رایج اما به طور بالقوه برای کاربردهایی که نیاز به کنترل دقیق مقادیر اضافه دارند مفید است.
• راه حل:شبیه به فرمت مایع، با تاکید بر حالت محلول آماده استفاده.

غلظت واکنش دهنده در آزمایشات PCR بسیار مهم است و به طور مستقیم بر کارایی واکنش و دقت نتایج تأثیر می گذارد.واکنشگرهای PCR در زمان واقعی ترمو فیشر مشخصه های غلظت حرفه ای را نشان می دهند:

• کپی/μL:واحد استاندارد برای اندازه گیری استانداردهای اسید نوکلئیک یا غلظت قالب. از 1 × 10^5 تا 1 × 10^9 کپی/μLاین گرادیانت های دقیق استاندارد های کالیبری دقیق برای PCR کمی را فراهم می کنند.، اطمینان از نتایج قابل تکرار و قابل اعتماد.
• فاکتورهای رقیق کننده (X):مانند 10X، 1X، 2.5X، 20X، 25X، 2X، و 5X، به طور معمول نشان دهنده غلظت مخلوط اصلی یا مخلوط مقدماتی/بررسی است. به عنوان مثال، "2X (Master Mix) ،10X (پرائمر / مخلوط پروب) " نشان می دهد که مخلوط اصلی 2 برابر متمرکز شده است در حالی که مخلوط پرایمر / پروب 10 برابر متمرکز شده است.، نیاز به رقیق کردن متناسب قبل از استفاده.
• غلظت های خاص:مانند 50 μM، که معمولاً dNTP ها یا واکنش های شیمیایی خاص را توصیف می کند و مرجع برای آماده سازی سیستم واکنش سفارشی را فراهم می کند.

فناوری PCR در زمان واقعی همچنان در حال تکامل است و منجر به ایجاد روش ها و سیستم عامل های تشخیص متعدد می شود. خط تولید Thermo Fisher این فناوری های اصلی را پوشش می دهد:

• PCR دیجیتال (dPCR):یک نسخه پیشرفته از qPCR که به اندازه گیری مطلق با تقسیم نمونه ها به واحدهای واکنش در مقیاس نانولیتر برای تقویت موازی، دسترسی به حساسیت و دقت بالاتر را فراهم می کند،به ویژه برای اهداف کم افزایشی و تشخیص جهش.
• HRM (ذوب شدن با وضوح بالا):یک روش ژنوتایپ سریع و اقتصادی که ژنوتایپ ها را با نظارت بر رفتار ذوب دوپلکس DNA در هنگام گرم کردن متمایز می کند، که به طور گسترده در تحقیقات ژنتیکی و تشخیص بیماری استفاده می شود.
• SYBR سبز:یک رنگ فلوروسنت رایج که به DNA دو رشته ای متصل می شود، ساده سازی و مقرون به صرفه بودن را برای کاربردهای گسترده qPCR ارائه می دهد.
• تقمن:بر اساس سُند های برچسب گذاری شده به فلورسنت، این روش با آزاد کردن سیگنال های فلورسنت در طول تقویت از طریق فعالیت 5' exonuclease Taq polymerase، مشخصیت بالاتری را ارائه می دهد.ایده آل برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و ژنوتایپ SNP.
• پروبای پرایمر:پایه و اساس تکنولوژی TaqMan، با Thermo Fisher ارائه 195 محصولات مرتبط با پوشش برنامه های کاربردی مختلف.
• qPCR و RT-PCR:فناوری های مرتبط نزدیک که در آن RT-PCR ابتدا RNA را قبل از تقویت PCR به cDNA منتقل می کند، در حالی که qPCR برای اندازه گیری نظارت فلورسنت در زمان واقعی را اضافه می کند.

قدرت پی سی آر در زمان واقعی در کاربرد گسترده آن است. واکنش ها و کیت های ترمو فیشر در زمینه های مختلف تحقیقات علوم زندگی خدمت می کنند:

• تجزیه و تحلیل بیان ژنکاربرد کلاسیک qPCR برای مطالعه تغییرات بیان ژن در شرایط مختلف.
• تشخیص عوامل بیماری زا:برای کنترل بیماری های عفونی، ایمنی مواد غذایی و نظارت بر محیط زیست حیاتی است.
• تشخیص میکروبی:خدمت به تحقیق در مورد میکروب های محیطی و پروبیوتیک ها فراتر از بیماری زا.
• مواد غذایی و نوشیدنی:برای تشخیص GMO، آزمایش آلرژن و تجزیه و تحلیل آلودگی میکروبی.
• سلامت حیوانات:حمایت از تحقیقات دامپزشکی و تشخیص بیماری های حیوانات
• استخراج و تصفیه DNA:ارائه الگوهای DNA با کیفیت بالا برای موفقیت PCR ضروری است.
• اندازه گيري DNA:که امکان اندازه گیری دقیق غلظت DNA را فراهم می کند.
• تجزیه و تحلیل تغییرات تعداد کپی:مهم برای بیماری های ژنتیکی و تحقیقات سرطان.
• ژنوتایپ:اساس مطالعه پليمورفيزم هاي ژناتيکي و حساسيت به بيماري
• تحلیل miRNA:بررسی نقش miRNA در تنظیم ژن و بیماری
• سرطان شناسی:تشخیص جهش ژن سرطان و نظارت بر پاسخ درمان.

فراتر از سیستم عامل های فناوری و برنامه های کاربردی، معیارهای عملکرد واکنشگر عوامل انتخاب حیاتی هستند.

• حساسیت (بالا/متوسطه/کم):واکنشگرهای حساسیت بالا اهداف بسیار کم غلظت را تشخیص می دهند، که برای بیان ژن کم افزایشی یا تشخیص پتوجن ردیابی حیاتی است.
• رنگ های فلورسنت و گزارشگرها:از جمله FAM، SYBR Green، VIC، ROX، و ترکیبی مانند FAM + VIC، سازگار با سیستم عامل های مختلف ابزار.
• انواع واکنش:
  • RT-PCR/RT-qPCR یک مرحله ای: ترکیب ترانسکرپشن معکوس و PCR در یک لوله برای سادگی و کارایی.
  • RT-qPCR دو مرحله ای: فرآیند های جداسازی برای کنترل دقیق تر یا تجزیه و تحلیل چندین هدف.
  • qPCR چندگانه: تشخیص همزمان چندین هدف در یک واکنش.
  • PCR دیجیتال (dPCR): ارائه کمیت مطلق.
• زمان واکنش:ارائه سری "سریع" و گزینه های بهینه (به عنوان مثال، <2 ساعت، 10 دقیقه، 30-60 دقیقه) برای تسریع چرخه های تحقیق.

محصولات نماینده ترمو فیشر نوآوری شرکت را در فناوری PCR در زمان واقعی نشان می دهند:

• کیت SuperScriptTM III PlatinumTM One-Step qRT-PCR:ترکیبی از SuperScriptTM III رورس ترانسکرپتاز و پلیتم TM DNA پلیمراز برای حساس، تشخیص خاص با هر دو کاوشگر فلورسنت و SYBRTM گزینه های سبز.
• کیت نسخه معکوس TaqManTM MicroRNA:به طور خاص miRNAهای بالغ (نه پیشگامان) را با حساسیت بالا (1-10 ng کل ورودی RNA) و پردازش سریع اندازه گیری می کند.
• قدرت SYBRTM RNA سبز به C_Tکیت یک مرحله ای:فرمولاسیون نوآورانه باعث کاهش آثار اولیه دیمر می شود و به طور قابل اعتماد اهداف کم افزایشی را تشخیص می دهد.
• کیت های تشخیص MycoSEQTM Plus Mycoplasma:کیت های qPCR مبتنی بر TaqMan TM برای آزمایش سریع مایکوپلازما در صنایع بیوفارماسیوتیک در دسته های کشت سلولی طراحی شده است.
• resDNASEQTM dPCR E. coli DNA Kit:راه حل dPCR برای تشخیص DNA سلول میزبان در تولید پروتئین و پلاسمید ترکیب شده با استفاده از سیستم های بیان E. coli، که برای کنترل کیفیت بیوفارماسیوتیک بسیار مهم است.
• کیت تکمن TM Oncology dPCR Multiplex، BRAF V600:کیت dPCR چندگانه برای کمیت مطلق بیومارکرهای قابل عمل BRAF V600 در تحقیقات دقیق سرطان شناسی.

این نمونه ها تخصص گسترده و نوآوری Thermo Fisher در فناوری PCR در زمان واقعی را نشان می دهد، محققان را با کارایی،ابزار دقیق آزمایش ژنتیکی برای تسریع کشف علمی.