Blog O Reagenty PCR firmy Thermo Fisher usprawniają technologię wykrywania genów

W szybko rozwijającej się dziedzinie badań nauki o życiu,w czasie rzeczywistym ilościowa PCR (qPCR) i cyfrowa PCR (dPCR) stały się niezbędnymi narzędziami dla naukowców borykających się z wyzwaniami w zakresie wrażliwościZa imponującą wydajnością tych technologii leży kluczowe wsparcie wysokiej jakości odczynników i zestawów.światowy lider w dziedzinie nauk o życiu, oferuje kompleksowe rozwiązania PCR w czasie rzeczywistym od badań podstawowych po diagnostykę kliniczną.

Przed zagłębieniem się w konkretne zestawy niezbędne jest rozważenie fizycznego formatu reagentów PCR, ponieważ różne formaty oznaczają różne wymagania magazynowania, łatwość użytkowania i scenariusze zastosowania.Thermo Fisher dostarcza reagenty PCR w czasie rzeczywistym w wielu formach, aby zaspokoić różne potrzeby laboratoryjne:

• Mrożone:Jeden z najczęstszych formatów, zawierający zazwyczaj bardzo aktywne enzymy i kwasy nukleinowe.Zamarznięte odczynniki maksymalnie utrzymują stabilność składników czynnych, ale wymagają ścisłego przechowywania w łańcuchu chłodnym i odpowiedniego rozmrażania, aby zapobiec utracie aktywności.
• Płyn:Najwygodniejszy format, nie wymagający rozpuszczenia i gotowy do natychmiastowego stosowania, znacząco oszczędzający czas eksperymentalny.Reagensy te są często zoptymalizowane w celu utrzymania stabilności w temperaturze pokojowej lub w chłodni.
• Lyofilizowane:Doskonała długotrwała stabilność, łatwe przechowywanie i transport, z minimalną utratą aktywności po odtworzeniu.
• Płynne lub liofilizowane:Zapewnia elastyczność użytkownikom w zakresie wyboru na podstawie preferencji i wymagań eksperymentalnych.
• Pastuj:Rzadziej spotykane, ale potencjalnie korzystne dla zastosowań wymagających precyzyjnej kontroli ilości dodanych.
• Rozwiązanie:Podobny do formatu ciekłego, podkreślający gotowy do użycia stan rozpuszczony.

W eksperymentach PCR koncentracja reagentu ma kluczowe znaczenie, mając bezpośredni wpływ na wydajność reakcji i dokładność wyników.Reagensy PCR w czasie rzeczywistym Thermo Fishera wykazują profesjonalne specyfikacje stężenia:

• Kopie/μl:Jednostka standardowa do pomiaru stężenia kwasu nukleinowego w zakresie od 1 x 10^5 do 1 x 10^9 kopii/μLte precyzyjne gradienty zapewniają dokładne standardy kalibracji dla PCR ilościowej, zapewniając powtarzalne i wiarygodne wyniki.
• Wskaźniki rozcieńczania (X):Na przykład, "2X (Master Mix), 2X, 5X, 5X, 10X, 1X, 2.5X, 20X, 25X, 2X i 5X, zazwyczaj opisujące koncentracje mieszaniny Master Mix lub primer/sonda.10X (Primer/Probe Mix) " oznacza, że mieszanka główna jest dwukrotnie skoncentrowana, podczas gdy mieszanka primer/sonda jest 10-krotnie skoncentrowana, wymaga proporcjonalnego rozcieńczenia przed użyciem.
• Specjalne stężenia:Wykorzystuje się urządzenia, które są wyposażone w urządzenia, o których mowa w pozycji 6A001.a.1.

Technologia PCR w czasie rzeczywistym stale ewoluuje, powodując powstanie wielu metod i platform wykrywania.

• Cyfrowa PCR (dPCR):Zaawansowana wersja qPCR, która osiąga absolutną ilość poprzez podział próbek na jednostki reakcyjne w skali nanolitrów do równoległej wzmocnienia, oferując wyższą czułość i precyzję,w szczególności dla celów o niskim stężeniu i wykrywania mutacji.
• HRM (High Resolution Melting):Szybka, ekonomiczna metoda genotypowania, która odróżnia genotypy poprzez monitorowanie zachowania stopienia dupleksu DNA podczas ogrzewania, szeroko stosowana w badaniach genetycznych i diagnostyce chorób.
• SYBR Zielony:Powszechny barwnik fluorescencyjny, który wiąże się z DNA z podwójnymi niciami, zapewniając prostotę i opłacalność dla szerokich zastosowań qPCR.
• TaqMan:Bazując na fluorescencyjnie oznakowanych sondach, metoda ta zapewnia wyższą specyficzność poprzez uwalnianie sygnałów fluorescencyjnych podczas wzmacniania poprzez aktywność 5' egzonukleazy polimerazy Taq,idealny do analizy ekspresji genów i genotypowania SNP.
• Prymerowa sonda:Podstawa technologii TaqMan, z Thermo Fisher oferujących 195 powiązanych produktów obejmujących różne zastosowania.
• qPCR i RT-PCR:Z bliskimi powiązaniami technologii, w których RT-PCR najpierw odwraca transkrypcję RNA do cDNA przed wzmacnianiem PCR, podczas gdy qPCR dodaje monitorowanie fluorescencji w czasie rzeczywistym do ilościowego określania.

Potęga PCR w czasie rzeczywistym polega na jego szerokim zastosowaniu.

• Analiza ekspresji genów:Klasyczne zastosowanie qPCR do badania zmian ekspresji genów w różnych warunkach.
• Wykrywanie patogenów:Istotne dla kontroli chorób zakaźnych, bezpieczeństwa żywności i monitorowania środowiska.
• Wykrywanie bakterii:Służenie badaniom nad mikroorganizmami środowiskowymi i probiotykami poza patogenami.
• Żywność i napoje:W celu wykrywania GMO, testowania alergenów i analizy zanieczyszczeń mikrobiologicznych.
• Zdrowie zwierząt:Wspieranie badań weterynaryjnych i diagnostyki chorób zwierząt.
• Ekstrakcja i oczyszczanie DNA:Zapewnienie wysokiej jakości szablonów DNA niezbędnych do sukcesu PCR.
• Ilość DNA:Umożliwia to dokładne pomiary stężenia DNA.
• Analiza zmienności liczby kopii:Ważne dla badań nad chorobami genetycznymi i rakiem.
• Genotypowanie:Podstawa do badania polimorfizmu genetycznego i podatności na choroby.
• Analiza miRNA:Badanie roli miRNA w regulacji genów i chorób.
• Onkologia:Wykrywanie mutacji genów nowotworowych i monitorowanie odpowiedzi na leczenie.

Poza platformami technologicznymi i zastosowaniami, wskaźniki wydajności odczynników są kluczowymi czynnikami wyboru.

• Wskaźnik czułości (wysoki/średni/niżki):Reagensy o wysokiej wrażliwości wykrywają cele o bardzo niskim stężeniu, które są kluczowe dla niskiej ekspresji genów lub wykrywania śladów patogenów.
• Farby fluorescencyjne i reportowanie:W tym FAM, SYBR Green, VIC, ROX oraz kombinacje takie jak FAM+VIC, kompatybilne z różnymi platformami instrumentów.
• Rodzaje reakcji:
  • RT-PCR/RT-qPCR 1-stopniowe: połączenie odwrotnej transkrypcji i PCR w jednej rurce dla uproszczenia i wydajności.
  • RT-qPCR w dwóch etapach: Procesy oddzielone w celu dokładniejszej kontroli lub analizy wielu celów.
  • Wielokrotna qPCR: jednoczesne wykrywanie wielu celów w jednej reakcji.
  • Cyfrowa PCR (dPCR): zapewnienie bezwzględnej ilości.
• Czas reakcji:Oferowanie serii "Szybkich" i zoptymalizowanych opcji (np. < 2 godziny, 10 minut, 30-60 minut) w celu przyspieszenia cykli badawczych.

Reprezentatywne produkty Thermo Fisher pokazują innowacyjność firmy w technologii PCR w czasie rzeczywistym:

• SuperScriptTM III PlatinumTM One-Step qRT-PCR Kit:Łączy w sobie transkryptazę odwrotną SuperScriptTM III i polimerazę DNA PlatinumTM w celu wykrywania wrażliwych, specyficznych objawów za pomocą prob fluorescencyjnych i opcji SYBRTM Green.
• Zestaw do odwrotnej transkrypcji mikroRNA TaqManTM:Specyficznie ilościowo określa dojrzałe miRNA (nie prekursory) o wysokiej wrażliwości (1-10 ng całkowitego wkładu RNA) i szybkim przetwarzaniu.
• Power SYBRTM Green RNA-to-C_TZestaw TM 1-krok:Innowacyjna formuła zmniejsza ilość artefaktów dimerowych i niezawodnie wykrywa cele o niskim zawartości.
• Zestawy do wykrywania MycoSEQTM Plus MycoplasmaZestawy qPCR oparte na technologii TaqManTM zaprojektowane do szybkiego testowania mikoplazmy przez przemysł biofarmaceutyczny w partiach kultur komórkowych.
• resDNASEQTM dPCR E. coli DNA Kit:Roztwór dPCR do wykrywania DNA komórek gospodarza w produkcji białek rekombinowanych i plazmidów przy użyciu systemów ekspresji E. coli, kluczowy dla kontroli jakości biopharmaceutyków.
• TaqManTM Oncology dPCR Multiplex Kit, BRAF V600:Wielokrotny zestaw dPCR do absolutnej ilościowej oceny biomarkerów BRAF V600 w precyzyjnych badaniach onkologicznych.

Przykłady te pokazują szeroką wiedzę fachową i innowacyjność Thermo Fisher w zakresie technologii PCR w czasie rzeczywistym, zapewniając naukowcom efektywne,dokładne narzędzia do badań genetycznych w celu przyspieszenia odkryć naukowych.