บล็อก เกี่ยวกับ รีเอเจนต์ PCR ของ Thermo Fisher ก้าวหน้าเทคโนโลยีการตรวจจับยีน

ในสาขาวิจัยวิทยาศาสตร์ชีวิตที่กําลังพัฒนาอย่างรวดเร็วการทดลอง PCR ปริมาณในเวลาจริง (qPCR) และการทดลอง PCR ดิจิตอล (dPCR) ได้กลายเป็นเครื่องมือที่จําเป็นสําหรับนักวิทยาศาสตร์ที่กําลังเผชิญกับปัญหาด้านความรู้สึกความเฉพาะเจาะจงและประสิทธิภาพของการทดสอบพันธุกรรม หลังผลงานที่น่าประทับใจของเทคโนโลยีเหล่านี้คือการสนับสนุนที่สําคัญของสารปฏิกิริยาและชุดที่มีคุณภาพสูงผู้นําโลกด้านวิทยาศาสตร์ชีวิต, นําเสนอการแก้ไข PCR ในเวลาจริงที่ครบวงจร ตั้งแต่การวิจัยพื้นฐานถึงการวินิจฉัยทางคลินิก

ก่อนที่จะเจาะลึกในชุดเฉพาะเจาะจง มันเป็นสิ่งจําเป็นที่จะพิจารณารูปแบบทางกายภาพของสารปฏิกิริยา PCR เนื่องจากรูปแบบที่แตกต่างกันแสดงให้เห็นถึงความต้องการในการเก็บรักษาที่แตกต่างกัน, ความสะดวกในการใช้งาน และกรณีการใช้งานเทอร์โม ฟิชเชอร์ จําหน่ายสารปฏิกิริยา PCR ในเวลาจริงในรูปแบบหลายรูปแบบ เพื่อตอบสนองความต้องการห้องปฏิบัติการที่หลากหลาย:

• แช่แข็ง:หนึ่งในรูปแบบที่พบบ่อยที่สุด โดยทั่วไปมีเอนไซม์และกรดนิวเคลียนที่ทํางานสูงสารปฏิกิริยาที่แช่แข็งทําให้ส่วนประกอบที่มีผลมีความมั่นคงสูงสุด แต่ต้องการการเก็บรักษาโซ่เย็นอย่างเคร่งครัด และการหยืดที่เหมาะสมเพื่อป้องกันการสูญเสียกิจกรรม.
• น้ําเหลว:รูปแบบที่สะดวกที่สุด ไม่ต้องการการแก้ไข และพร้อมสําหรับการใช้ทันที ช่วยประหยัดเวลาในการทดลองได้อย่างสําคัญภาวะปฏิกิริยาเหล่านี้มักถูกปรับปรุงให้สมบูรณ์แบบเพื่อรักษาความมั่นคงในอุณหภูมิห้องหรือภายใต้การเย็น.
• ลีโอฟิลิซ:มีความมั่นคงระยะยาวที่ดี, การเก็บรักษาและการขนส่งที่ง่าย, กับการสูญเสียกิจกรรมที่น้อยที่สุดเมื่อการแก้ไข. เหมาะสําหรับ reagents ที่ต้องการการเก็บรักษายาวนานหรือใช้ในสภาพไม่มั่นคง
• น้ําเหลวหรือ Lyophilized:ให้ความยืดหยุ่นให้กับผู้ใช้ในการเลือกตามความชอบและความต้องการการทดลอง
• พิมพ์น้อยกว่า แต่มีโอกาสเป็นประโยชน์สําหรับการใช้งานที่ต้องการการควบคุมจํานวนการเพิ่มที่แม่นยํา
• การแก้ไข:คล้ายกับรูปแบบของของเหลว โดยเน้นการใช้ในสภาพละลาย

ความถี่ของสารปฏิกิริยามีความสําคัญในการทดลอง PCR ซึ่งมีผลกระทบตรงต่อประสิทธิภาพการปฏิกิริยาและความแม่นยําของผลเครื่องปฏิกิริยา PCR ในเวลาจริงของ Thermo Fisher แสดงให้เห็นถึงความเข้มข้นอย่างเป็นมืออาชีพ:

• ตัวสําเนา/μL:หน่วยมาตรฐานในการวัดมาตรฐานกรดนิวเคลียนหรือปริมาณความถี่ของรูปแบบคาร์ดิเอ็นท์ที่แม่นยําเหล่านี้ให้มาตรฐานการปรับขนาดที่แม่นยําสําหรับ PCR ปริมาณ, รับประกันผลผลที่สามารถผลิตใหม่ได้และเชื่อถือได้
• ปัจจัยการละลาย (X):เช่น 10X, 1X, 2.5X, 20X, 25X, 2X, และ 5X, โดยทั่วไปอธิบายความเข้มข้นของ Master Mix หรือ Primer/probe mix. ตัวอย่างเช่น "2X (Master Mix),10X (Primer/Probe Mix) "แสดงให้เห็นว่าผสมผสมหลักมีปริมาณปริมาณ 2 เท่า ส่วนผสมพริเมอร์/ซอนด์มีปริมาณปริมาณปริมาณ 10 เท่าจําเป็นต้องปรับน้ําหนักให้สัดส่วนก่อนการใช้
• คอนเซ็นทรัลพิเศษ:เช่น 50 μM โดยปกติจะอธิบาย dNTPs หรือสารปฏิกิริยาเคมีเฉพาะเจาะจง เพื่อให้มาตรฐานสําหรับการเตรียมระบบปฏิกิริยาตามสั่ง

เทคโนโลยี PCR ในเวลาจริงยังคงพัฒนาต่อไป ทําให้เกิดวิธีการและแพลตฟอร์มการตรวจจับหลายอย่าง เส้นทางสินค้าของ Thermo Fisher ครอบคลุมเทคโนโลยีหลัก ๆ เหล่านี้:

• PCR ดิจิตอล (dPCR):รูปแบบที่พัฒนาของ qPCR ที่สามารถปรับปริมาณอย่างสมบูรณ์แบบ โดยการแบ่งตัวอย่างเป็นหน่วยปฏิกิริยาขนาดนาโนลิตร เพื่อการขยายความเข้มข้นในระยะ paralel ให้ความรู้สึกและความแม่นยําสูงขึ้นโดยเฉพาะสําหรับเป้าหมายที่มีอุดมสมบูรณ์ต่ําและการตรวจหาการกลายพันธุ์.
• HRM (การละลายความละเอียดสูง)วิธีการกําหนดพันธุกรรมที่รวดเร็วและประหยัด ที่แยกพันธุกรรมโดยการติดตามพฤติกรรมการละลายของ DNA duplex ระหว่างการทําความร้อน ใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยพันธุกรรมและการวินิจฉัยโรค
• SYBR สีเขียวสีหลอดไฟที่ใช้กันทั่วไปที่ผูกกับ DNA สายสอง ซึ่งทําให้ง่ายและมีประสิทธิภาพต่อราคา สําหรับการใช้งาน qPCR ที่กว้างขวาง
• ทักแมนโดยใช้ซอนด์ที่ติดป้ายด้วยแสงสว่าง วิธีนี้ให้ความเฉพาะเจาะจงสูงขึ้น โดยปล่อยสัญญาณแสงสว่างระหว่างการขยายผ่านกิจกรรม 5' exonuclease ของ Taq polymeraseเหมาะสําหรับการวิเคราะห์การแสดงพันธุกรรมและการสร้างพันธุกรรม SNP.
• เครื่องตรวจสอบพิมพ์:รากฐานของเทคโนโลยี TaqMan โดย Thermo Fisher ให้บริการสินค้าที่เกี่ยวข้อง 195 รายการ ครอบคลุมการใช้งานต่าง ๆ
• qPCR และ RT-PCR:เทคโนโลยีที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดที่ RT-PCR แรกเปลี่ยนการถ่ายทอด RNA เป็น cDNA ก่อนการขยาย PCR ขณะที่ qPCR เพิ่มการติดตามแสงสว่างในเวลาจริงเพื่อการปรับปริมาณ

พลังของ PCR ในเวลาจริงอยู่ที่ความสามารถในการใช้งานที่กว้างขวางของมัน คีตและสารปฏิกิริยาของ Thermo Fisher ให้บริการด้านวิจัยวิทยาศาสตร์ชีวิตที่หลากหลาย

• การวิเคราะห์การแสดงออกของพันธุกรรมการใช้ qPCR คลาสสิกในการศึกษาการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของพันธุกรรมภายใต้สภาพต่าง ๆ
• การตรวจพบเชื้อโรค:สําคัญสําหรับการควบคุมโรคติดต่อ ความปลอดภัยของอาหาร และการติดตามสิ่งแวดล้อม
• การตรวจพบเชื้อไวรัสให้บริการการวิจัยเกี่ยวกับจุลินทรีย์สิ่งแวดล้อมและโปรบิโอติก นอกเหนือจากเชื้อโรค
• อาหารและเครื่องดื่ม:สําหรับการตรวจหา GMO การทดสอบสารภูมิแพ้ และการวิเคราะห์การปนเปื้อนด้วยจุลินทรีย์
• สุขภาพสัตว์:การสนับสนุนการวิจัยทางสัตวแพทย์และการวินิจฉัยโรคสัตว์
• การสกัด DNA และการทําความสะอาดการให้รูปแบบดีเอ็นเอที่มีคุณภาพสูง ที่จําเป็นสําหรับความสําเร็จของ PCR
• DNA Quantitation:ทําให้การวัดความถี่ของ DNA ได้ถูกต้อง
• การวิเคราะห์ความแตกต่างของจํานวนสําเนาสําคัญสําหรับการวิจัยโรคพันธุกรรมและมะเร็ง
• การสร้างพันธุกรรม:หลักฐานในการศึกษาพันธุกรรมพอลิมอร์ฟิสมและความเปราะบางต่อโรค
• การวิเคราะห์ miRNA:การวิจัยบทบาทของ miRNA ในการควบคุมพันธุกรรมและโรค
• โรคมะเร็ง:การตรวจพบการกลายพันธุ์พันธุกรรมของมะเร็ง และการติดตามการตอบสนองการรักษา

นอกเหนือจากแพลตฟอร์มและการใช้งานของเทคโนโลยี, เมตรการประสิทธิภาพของสารปฏิกิริยาเป็นปัจจัยการเลือกที่สําคัญ

• ความรู้สึก (สูง/ปานกลาง/ต่ํา)รีเจนต์ความรู้สึกสูงตรวจจับเป้าหมายที่มีปริมาณความเข้มข้นต่ํามาก ซึ่งมีความสําคัญสําหรับการแสดงออกของยีนที่มีจํานวนน้อยหรือการตรวจหาเชื้อรุนแรง
• สารสีและสารสื่อสารแสงสว่าง:รวมถึง FAM, SYBR Green, VIC, ROX, และการผสมผสานเช่น FAM + VIC ซึ่งเข้ากันได้กับแพลตฟอร์มเครื่องมือต่างๆ
• ประเภทปฏิกิริยา:
  • RT-PCR/RT-qPCR 1 ขั้นตอน: การรวมการถ่ายทอดกลับและ PCR ในท่อเดียวเพื่อความง่ายและมีประสิทธิภาพ
  • RT-qPCR 2 ขั้นตอน: การแยกกระบวนการสําหรับการควบคุมที่ละเอียดหรือการวิเคราะห์เป้าหมายหลายตัว
  • qPCR หลายแบบ: การตรวจจับเป้าหมายหลายอย่างในเวลาเดียวกันในปฏิกิริยาหนึ่ง
  • PCR ดิจิตอล (dPCR): การให้บริการคณิตศาสตร์ที่สมบูรณ์แบบ
• เวลาปฏิกิริยา:การนําเสนอชุด "รวดเร็ว" และตัวเลือกที่ปรับปรุง (เช่น < 2 ชั่วโมง, 10 นาที, 30-60 นาที) เพื่อเร่งวงจรการวิจัย

ผลิตภัณฑ์ตัวแทนของ Thermo Fisher แสดงถึงนวัตกรรมของบริษัทในเทคโนโลยี PCR ในเวลาจริง:

• ซุปเปอร์สคริปต์TM III แพลตินัมTM คิต qRT-PCR ขั้นตอนเดียว:ผสมผสาน SuperScriptTM III reverse transcriptase และ PlatinumTM DNA polymerase สําหรับการตรวจจับที่มีความรู้สึกและเฉพาะเจาะจงด้วยทั้งเครื่องตรวจสอบแสงสว่างและตัวเลือก SYBRTM Green
• TaqManTM MicroRNA Reverse Transcription Kit ชุดการถ่ายทอดที่กลับกันโดยเฉพาะจะระบุปริมาณของ miRNAs ที่โตแล้ว (ไม่ใช่ตัวนํา) ด้วยความรู้สึกสูง (1-10 ng รวมการเข้า RNA) และการประมวลผลอย่างรวดเร็ว
• พลังงาน SYBRTM สีเขียว RNA-C_TTM 1 ขั้นตอน:การประกอบแบบนวัตกรรม ลดผลิตภัณฑ์ของไพรเมอร์ไดเมอร์ และตรวจจับเป้าหมายที่มีจํานวนน้อยอย่างน่าเชื่อถือ
• MycoSEQTM Plus Mycoplasma Detection Kits: เครื่องตรวจพบ MycoSEQTM บวก Mycoplasma:คิต qPCR ที่ใช้ TaqManTM ออกแบบมาเพื่อการทดสอบไมโคพลาสมาอย่างรวดเร็วของอุตสาหกรรมยาชีวภาพในชุดปลูกเซลล์
• resDNASEQTM dPCR E. coli DNA Kit:โซลูชั่น dPCR สําหรับการตรวจหา DNA ของเซลล์เจ้าภาพในการผลิตโปรตีนและพลาสมิดแบบสลับกัน โดยใช้ระบบการแสดงอาการของเชื้อ E. coli ที่สําคัญสําหรับการควบคุมคุณภาพของยาชีวภาพ
• TaqManTM ออนโคโลจี dPCR คิต มัลติเพล็กซ์ BRAF V600:ชุด dPCR หลายแบบสําหรับการปรับปริมาณสมบูรณ์แบบของเครื่องหมายชีวภาพ BRAF V600 ที่สามารถดําเนินการได้ในการวิจัยโรคสะเก็ดเงินแม่นยํา

ตัวอย่างเหล่านี้แสดงถึงความเชี่ยวชาญและนวัตกรรมที่กว้างขวางของ Thermo Fisher ในเทคโนโลยี PCR ในเวลาจริงเครื่องมือการทดสอบพันธุกรรมที่แม่นยํา เพื่อเร่งการค้นพบทางวิทยาศาสตร์.