ιστολόγιο περίπου Guía para dominar los kits de secuenciación de ADN Sanger

Στο τεράστιο τοπίο της γονιδιωματικής έρευνας, οι τεχνολογίες αλληλουχίας DNA παίζουν ένα pivotal ρόλο.Ένα βασικό συστατικό αυτής της τεχνικής είναι η αλληλουχία κύκλου που επιτρέπει τον γραμμικό ενισχυμό των στόχων DNA μέσω επαναλαμβανόμενης αποδυνάμωσης.Η ανάλυση αυτή πραγματοποιήθηκε με τη βοήθεια του Thermo Fisher Scientific's DNA sequencing kits.Χτισμένο πάνω σε αυτό το robust cycle sequencing frameworkΗ εταιρεία προσφέρει στους ερευνητές ποικίλες λύσεις προσαρμοσμένες σε διάφορες πειραματικές ανάγκες.

Χημικά Θεμέλια της Διαλογής Sanger: Dye Primer vs. Dye Terminator

Η αλληλουχία Sanger βασίζεται σε δύο κύριες χημικές στρατηγικές: χημεία πρώτης χρωστικής και χημεία τερματιστή χρωστικής.Η κατανόηση των διακρίσεων και των πλεονεκτημάτων τους είναι κρίσιμη για την επιλογή του βέλτιστου κιτ αλληλουχίας.

• Η χημεία του Dye Primer:Κατά τη διάρκεια της DNA polymerase-driven επέκτασης, κάθε προϊόν μεταφέρει ένα φθοριστικό σήμα που αντιστοιχεί στην τερματική βάση του.Αυτή η προσέγγιση υπερέχει στην υψηλής ανάλυσης αλληλουχία κοντά σε περιοχές δέσμευσης πρωτογενών..
• Το Dye Terminator: ΧημείαΗ κυρίαρχη σύγχρονη μέθοδος, όπου οι φθοριούμενες χρωστικές ύλες συνδυάζονται σε dideoxynucleotides (ddNTPs) αλυσίδα-τελείωσης πράκτορες.Η ενσωμάτωση ενός ddNTP σταματά την επιμήκυνση ενώ εκπέμπει ένα συγκεκριμένο φθοριστικό σήμα, επιτρέποντας τον προσδιορισμό της αλληλουχίας μέσω ανάλυσης μήκους θραύσματος.

BigDye® Reagent Kits: Precision-Tuned for Diverse Applications (Μεγάλο χρώμα® Κιτ αντιδραστήρων: Προσαρμοσμένα για διάφορες εφαρμογές)

Η σειρά BigDye® της Thermo Fisher Scientific παρέχει εξειδικευμένες λύσεις για διάφορες απαιτήσεις αλληλουχίας.

*When using POP-6TM polymer (Όταν χρησιμοποιείτε πολυμερές POP-6TM)
†Requires M13-tailed primers during PCR amplification (Χρειάζεται M13-χονδρικά primers κατά τη διάρκεια της PCR ενίσχυσης)

Στρατηγικά πλεονεκτήματα των Universal Primers

Η ενσωμάτωση M13 ή άλλων universal tailed primers εξορθολογίζει τα workflows με την τυποποίηση των διαδικασιών κλωνοποίησης και αλληλουχίας, μειώνοντας τη διαδικαστική μεταβλητότητα.

Βασικές εφαρμογές και κριτήρια επιλογής κιτ

1Εξερεύνηση προϊόντων PCR.

Χρησιμοποιείται για την ανακάλυψη παραλλαγών ενάντια σε ακολουθίες αναφοράς, αυτή η εφαρμογή επωφελείται από κιτ με ισχυρές δυνατότητες κάλεσης πρώτης βάσης και ανίχνευσης μικτής βάσης.Η διμερή αλληλουχία των αποσπασμάτων PCR εξασφαλίζει υψηλής ποιότητας δεδομένα..

2Επικύρωση NGS.

Η αλληλουχία Sanger χρησιμεύει ως το χρυσό πρότυπο για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων της επόμενης γενιάς αλληλουχίας, ιδιαίτερα για την επαλήθευση των στόχων περιοχών που ενισχύονται από την PCR.

3Μεθυλίωση ανάλυση.

Το bisulfite conversion διακρίνει τις μεθυλιωμένες κυτοσίνες (που διατηρούνται ως C) από τις μη μεθυλιωμένες (που μετατρέπονται σε T).Οι στρατηγικές περιλαμβάνουν την άμεση αλληλουχία προϊόντων PCR που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία με βησουλφίτη ή κλωνοποιημένη ανάλυση θραύσματος..