ブログ について サンガーDNAシーケンシングキットのマスターガイド

ゲノム研究 の 広範囲 の 分野 で は,DNA 配列 化 技術 が 重要な 役割 を 果たし て い ます.その 中 で,サンガー 配列 化 は,信頼性 と 精度 に よっ て 評価 さ れ て いる 礎石 の 方法 と し て い ます.このテクニックの鍵となる要素は サイクルシーケンシングです 繰り返し変性化によって 標的DNA断片の線形増幅が可能になります熱循環器で溶解と拡張反応を行い その後は毛細管電泳分析ですこの堅牢なサイクルシーケンシングフレームワークの上に構築された研究者たちに様々な実験ニーズに合わせた多様なソリューションを提供します

サンガー配列の化学的基礎:染料プリマーと染料終結剤

サンガー配列化は,染料プライマーの化学と染料終結剤の化学という2つの主要な化学的戦略に依存する.最適なシーケンシングキットを選択するには,その違いと利点を理解することが重要です.

• 染料プリマーの化学発光染料は配列プライマーに結合される.DNAポリメラーゼ駆動拡張中に,各製品は終結基に対応する発光信号を運ぶ.このアプローチは,プライマー結合領域の近くで高解像度配列化で優れています.
• 染料ターミネーター化学流光染料をダイデオキシヌクレオチド (ddNTP) に結合するddNTPを組み込むことで,特定の熒光信号を放出しながら,長さを停止する.断片の長さの分析による配列決定を可能にする.

ビッグダイ® 反応剤 キット: 精密調整 さまざまな用途

サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック社のBigDye®シリーズは,さまざまなシーケンシング要求に応える専用のソリューションを提供しています.以下の選択ガイドでは,主要なパフォーマンス指標を強調します.

*POP-6TMポリマーを使用する場合
†PCR増幅中にM13尾型プライマーが必要です.

ユニバーサル・プライマーの戦略的利点

M13 または他のユニバーサル・テイルド・プライマーを組み込むことで,クローンとシーケンシングプロセスを標準化し,手順の変動を減らすことでワークフローを簡素化します.

基本アプリケーションとキットの選択基準

1PCR 製品再配列化

このアプリケーションは,参照配列に対する変異検出に使用され,強力なファーストベースコールとミックスベース検出能力を持つキットから利益を得ています.PCR断片の二方向配列化により高品質なデータが確保される.

2NGS 検証

サンガー配列化は,特にPCR増幅対象領域の検証において,次世代配列検査の結果の確認のための標準となる.

3メチル化分析

ビスルファイト変換は,メチル化されたサイトシン (Cとして保持される) とメチル化されていないサイトシン (Tに変換される) を区別する.効果的なキットは,メチル化状態を決定するために混合信号を正確に解消する必要があります.戦略には,ビサルフィット処理されたPCR製品の直接配列化やクローン断片分析が含まれます..