Bloggen over Mlabs introduceert realtime PCR voor snellere opsporing van tuberculose

Tuberculose (TB), veroorzaakt door Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC), blijft een van de meest aanhoudende uitdagingen voor de volksgezondheid van de mensheid.Terwijl de behandeling aanzienlijk is gevorderd in het tijdperk van de antibiotica, tijdige en nauwkeurige diagnose, met name in omstandigheden met beperkte middelen, blijft een kritieke belemmering voor een doeltreffende ziektebestrijding.

Traditionele TB-diagnostische methoden hebben aanzienlijke beperkingen:

• Bacteriële cultuur:Hoewel het als de gouden standaard wordt beschouwd, duurt het 2 tot 8 weken voor resultaten, een onaanvaardbare vertraging voor snel vorderende gevallen.
• Sputum smeer microscopie:Snel maar ongevoelig, waarbij alleen gevallen met ≥ 10.000 bacteriën/ml worden gedetecteerd.
• Huidonderzoek op tuberculine/IGRA:Het detecteert infectie, maar kan geen onderscheid maken tussen actieve en latente ziekte.

MLabs' real-time PCR-DNA-test behandelt deze uitdagingen door:

• Snelheid:Resultaten in 2-4 dagen versus weken voor cultuur
• Gevoeligheid:Het detecteert slechts 10-100 DNA-kopieën/reactie
• Specificiteit:Precies gericht op MTBC specifieke sequenties
• Quantitativering:Biedt een geschatte bacteriële lading

De test maakt gebruik van:

1. Specifieke primers/sonden die zich richten op bewaarde MTBC-sequenties
2. Realtime fluorescentiebewaking tijdens PCR-amplificatie
3. Drempelwaarden voor de cyclus (Ct) voor de schatting van de aanvankelijke DNA-hoeveelheid

De test identificeert alle belangrijke MTBC-leden:

• M. tuberculosis (hoofdpathogeen voor de mens)
• M. bovis (inclusief BCG-vaccinstam)
• M. africanum (West-Afrikaanse stammen)
• M. microti (aan knaagdieren aangepaste stammen)
• Andere zeldzame MTBC-varianten

Opmerking:Hoewel alle MTBC-leden worden gedetecteerd, kan de test geen onderscheid maken tussen specifieke soorten binnen het complex.

De test heeft meerdere diagnostische functies:

• Snelle screening van vermoedelijke TB-gevallen
• Test van ademhalingsmonsters (sputum, BAL, bronchiale wasmiddelen)
• Analyse van weefselmonsters (vers of FFPE)
• Complementair gebruik met kweek (voor specialisatie en DST)

Positieve resultatenMTBC-DNA-detectie, maar vereisen een klinische correlatie.Negatieve resultatenniet volledig uitsluiten van tuberculose als gevolg van mogelijke:

• Lage bacteriële lading
• Probleem van bemonstering
• PCR-remmers

De test kankatGgenmutaties die geassocieerd worden met isoniazidresistentie, hoewel:

• Afwezigheid van mutaties garandeert geen gevoeligheid.
• Er bestaan andere weerstandsmechanismen
• De op cultuur gebaseerde DST blijft definitief

Voor optimale resultaten:

• Respiratorische monsters:≥ 1 ml in een steriele verpakking
• Weefselmonsters:≥ 5 mm vers of FFPE
• Vervoer:In de koelkast (2-8°C) binnen 7 dagen

• Testing beschikbaar dagelijks (inclusief weekenden)
• Verwerking: 2-4 werkdagen
• CPT-code: 87556

Deze moleculaire vooruitgang is een belangrijke stap voorwaarts in de diagnose van tuberculose.een vroegere opsporing en behandeling mogelijk te maken en tegelijkertijd traditionele methoden voor een uitgebreid patiëntbeheer aan te vullen;.