Blog über Lexogen startet Hochdurchsatz-Sequenzierungs-Kit für schnellere Bibliotheksvorbereitung

In der schnelllebigen Welt der biowissenschaftlichen Forschung, in der die experimentelle Präzision direkt über den Erfolg entscheidet, stellt die Optimierung von PCR-Zyklen seit langem eine kritische Herausforderung für Forscher dar. Die Zuverlässigkeit von Hochdurchsatz-Sequenzierungsdaten – dem Eckpfeiler der modernen biologischen Forschung – hängt grundlegend von der Qualität der Bibliothekspräparation ab, wobei die PCR-Amplifikation ein entscheidender Schritt ist.

Forscher stehen häufig vor einem anhaltenden Dilemma bei der Bestimmung optimaler PCR-Zyklen. Unterzyklisierung führt zu unzureichenden Bibliotheksausbeuten, was besonders bei begrenzten Proben oder Zielmolekülen mit geringer Abundanz problematisch ist und zu kritischem Datenverlust führen kann. Umgekehrt führt eine Überzyklisierung zu unspezifischen Produkten und Artefakten, die Genexpressionsprofile verzerren und potenziell zu fehlerhaften Schlussfolgerungen führen können.

Dieses empfindliche Gleichgewicht zwischen Amplifikationseffizienz und Wiedergabetreue erforderte traditionell umfangreiche Versuch-und-Irrtum-Ansätze, die wertvolle Zeit und Ressourcen verbrauchten und gleichzeitig inkonsistente Ergebnisse lieferten.

Um diese branchenweiten Herausforderungen zu bewältigen, stellt Lexogen sein bahnbrechendes PCR Add-on und Reamplification Kit V2 vor, das entwickelt wurde, um der cDNA-Bibliothekspräparation für QuantSeq V2, QuantSeq-Pool und CORALL V2-Systeme beispiellose Präzision zu verleihen.

Die revolutionäre qPCR-Detektionsfähigkeit des Kits, die den SYBR Green I-Farbstoff nutzt, ermöglicht die Echtzeitüberwachung der Amplifikationskinetik. Dies ermöglicht es Forschern:

• Endpunkt-PCR-Zykluszahlen mit wissenschaftlicher Präzision zu bestimmen
• Raten und empirische Schätzungen zu eliminieren
• Artefakte sowohl bei Unter- als auch bei Überamplifikation zu verhindern

Die optimierte PCR-Mischung enthält hochfidele Polymerase und Illumina-kompatible Primer (ohne Barcodes) und unterstützt bis zu 96 qPCR-Reaktionen pro Kit. Bemerkenswerterweise ist diese qPCR-Funktion speziell für Lexogen-Produkte der aktuellen Generation konzipiert und wird für frühere QuantSeq- oder CORALL-Versionen nicht empfohlen.

Über die Zyklusoptimierung hinaus verfügt das Kit über ein spezialisiertes Reamplifikations-Primer-System (RE), das:

• Bibliotheksausbeuten steigert, wenn die anfängliche Amplifikation unzureichend ist
• die Detektion von Transkripten mit geringer Abundanz verbessert
• Anwendungen für Anreicherungspanels unterstützt

Diese Reamplifikationsfunktion bleibt mit der gesamten Produktlinie von Lexogen kompatibel, einschließlich aller CORALL- und QuantSeq-Versionen, LUTHOR-Präparationen und Small-RNA-Seq-Bibliotheken.

Das Dual-Funktions-Kit bietet:

• 96 qPCR-Reaktionen für die Zyklusoptimierung
• 96 Reamplifikationsreaktionen zur Ertragssteigerung

Die Kompatibilität umfasst:

• CORALL RNA-Seq V2 mit UDI (Kat. 171-186)
• QuantSeq V2 mit UDI (Kat. 191-196)
• QuantSeq-Pool (Kat. 139)

Das Kit ist spezifisch inkompatibel mit TeloPrime (Kat. 013) Produkten.

Lexogens V2-Kit stellt einen bedeutenden Fortschritt in der Bibliothekspräparationstechnologie dar und bietet Forschern:

• Datengetriebene Bestimmung von PCR-Zyklen
• Flexible Optionen zur Ertragssteigerung
• Optimierte Workflow-Kompatibilität
• Bereitschaft für die Illumina-Plattform

Durch die Eliminierung traditioneller Herausforderungen bei der PCR-Optimierung ermöglicht diese Innovation Wissenschaftlern, sich auf biologische Entdeckungen statt auf technische Optimierung zu konzentrieren, was potenziell Durchbrüche in der Genexpressionsanalyse und der Transkriptomikforschung beschleunigt.