El blog sobre Lexogen lanza un kit de secuenciación de alto rendimiento para una preparación de bibliotecas más rápida

En el vertiginoso mundo de la investigación en ciencias de la vida, donde la precisión experimental determina directamente el éxito, la optimización del ciclo de PCR ha sido durante mucho tiempo un desafío crítico para los investigadores. La fiabilidad de los datos de secuenciación de alto rendimiento, la piedra angular de la investigación biológica moderna, depende fundamentalmente de la calidad de la preparación de la biblioteca, y la amplificación por PCR sirve como su paso fundamental.

Los investigadores se enfrentan con frecuencia a un dilema persistente al determinar los ciclos de PCR óptimos. La sub-amplificación da como resultado rendimientos de biblioteca insuficientes, lo que resulta particularmente problemático con muestras limitadas o objetivos de baja abundancia, lo que podría causar una pérdida crítica de datos. Por el contrario, la sobre-amplificación introduce productos inespecíficos y artefactos que distorsionan los perfiles de expresión génica, lo que podría llevar a conclusiones erróneas.

Este delicado equilibrio entre la eficiencia de amplificación y la fidelidad ha requerido tradicionalmente extensos enfoques de prueba y error, consumiendo tiempo y recursos valiosos al tiempo que se obtienen resultados inconsistentes.

Abordando estos desafíos en toda la industria, Lexogen presenta su innovador kit de adición de PCR y reamplificación V2 , diseñado para aportar una precisión sin precedentes a la preparación de bibliotecas de ADNc para los sistemas QuantSeq V2, QuantSeq-Pool y CORALL V2.

La revolucionaria capacidad de detección de qPCR del kit, que utiliza el colorante SYBR Green I, permite el monitoreo en tiempo real de la cinética de amplificación. Esto permite a los investigadores:

• Determinar los números de ciclo de PCR de punto final con precisión científica
• Eliminar las conjeturas y las estimaciones empíricas
• Prevenir artefactos de sub-amplificación y sobre-amplificación

La mezcla de PCR optimizada incluye polimerasa de alta fidelidad y cebadores compatibles con Illumina (sin códigos de barras), lo que admite hasta 96 reacciones de qPCR por kit. Notablemente, esta función de qPCR está diseñada específicamente para productos Lexogen de la generación actual y no se recomienda para versiones anteriores de QuantSeq o CORALL.

Más allá de la optimización del ciclo, el kit presenta un sistema especializado de cebadores de reamplificación (RE) que:

• Aumenta los rendimientos de la biblioteca cuando la amplificación inicial resulta insuficiente
• Mejora la detección de transcritos de baja abundancia
• Soporta aplicaciones de paneles de enriquecimiento

Esta función de reamplificación mantiene la compatibilidad en toda la línea de productos de Lexogen, incluidas todas las versiones de CORALL y QuantSeq, preparaciones LUTHOR y bibliotecas de ARN pequeño-Seq.

El kit de doble función proporciona:

• 96 reacciones de qPCR para la optimización del ciclo
• 96 reacciones de reamplificación para la mejora del rendimiento

La compatibilidad incluye:

• CORALL RNA-Seq V2 con UDI (Cat. 171-186)
• QuantSeq V2 con UDI (Cat. 191-196)
• QuantSeq-Pool (Cat. 139)

El kit es específicamente incompatible con los productos TeloPrime (Cat. 013).

El kit V2 de Lexogen representa un salto significativo en la tecnología de preparación de bibliotecas, ofreciendo a los investigadores:

• Determinación del ciclo de PCR basada en datos
• Opciones flexibles de mejora del rendimiento
• Compatibilidad de flujo de trabajo optimizada
• Preparación para la plataforma Illumina

Al eliminar los desafíos tradicionales de optimización de PCR, esta innovación permite a los científicos centrarse en el descubrimiento biológico en lugar de la optimización técnica, acelerando potencialmente los avances en el análisis de la expresión génica y la investigación transcriptómica.