أخبار الشركة عن اكتشف فريق من سيتشوان سلالة فيروس PRRSV مؤتلف جديد شديد الإمراض: إعادة تركيب اللقاح والنوع البري

في 2 يوليو 2025، نشر فريق بقيادة تشانغ زيدونغ وتشاو لونغ من كلية علوم الحيوان والطب البيطري بجامعة ساوث ويست للأقليات القومية، بالتعاون مع أكاديمية سيتشوان لعلوم الحيوان، أحدث أبحاثهم في المجلة الدولية *Frontiers in Veterinary Science*، حيث أبلغوا عن سلالة جديدة من فيروس متلازمة الجهاز التنفسي والتناسلي للخنازير (PRRSV)، سميت GX2024، نتجت عن تهجين فيروس من النوع البري ولقاح فيروس حي معدل (MLV). تم عزل هذه السلالة من مزرعة خنازير في مقاطعة سيتشوان، الصين، وأظهرت فوعة عالية للغاية (معدل وفيات 100٪) في الخنازير الصغيرة.

أبرز الأبحاث

• أول اكتشاف للخصائص الشديدة الضراوة لسلالة PRRSV المؤتلفة من النوع L1C.5 RFLP-1-4-4 في الصين

• تم إعادة تركيب هذه السلالة من ثلاثة مصادر: سلالة من النوع البري تشبه NADC30 (L1C.5) + سلالة شديدة الإمراضية تشبه JXA1 (L8E) + سلالة لقاح حي تجاري RespPRRS MLV (L5A)

• تسببت العدوى في الخنازير الصغيرة في ارتفاع درجة الحرارة (40–42 درجة مئوية)، ونزيف رئوي شديد، ووذمة، وماتت جميع الخنازير الصغيرة في غضون 14 يومًا.

• يوضح هذا أن لقاحات MLV الحالية تشكل خطرًا لإعادة التركيب والهروب المناعي في المناطق المتوطنة من النوع البري.

في عام 2024، اكتشف فريق بحثي حالات إجهاض وولادة جنين ميت في الخنازير الأم ووفيات حادة في الخنازير الصغيرة في مزرعة خنازير في سيتشوان. أكد عزل الخلايا وتحليل تسلسل الجينوم بأكمله أن السلالة الجديدة GX2024 تنتمي إلى النوع L1C.5 من سلالة PRRSV-2.

كشف التحليل الجيني الإضافي أن هذه السلالة هي فيروس مؤتلف جديد متعدد، أعيد تركيبه من سلالة من النوع البري تشبه NADC30، وسلالة شديدة الإمراضية تشبه JXA1، وسلالة لقاح فيروس حي معدل (MLV).

أظهرت تجارب تحدي الحيوانات أن GX2024 شديد الإمراضية؛ ماتت الخنازير الصغيرة المصابة في غضون فترة قصيرة، مما أظهر التهابًا رئويًا نزفيًا شديدًا ووذمة رئوية، وتضخمًا كبيرًا وعقدًا لمفاوية نزفية، وزيادة سريعة في الحمل الفيروسي، وزيادة كبيرة في مستويات الأجسام المضادة في المصل.

مقدمة

متلازمة الجهاز التنفسي والتناسلي للخنازير (PRRS) هي واحدة من أكثر الأمراض الفيروسية المدمرة في صناعة الخنازير العالمية. في السنوات الأخيرة، أصبحت السلالة التي تشبه NADC30 (L1C) السلالة السائدة المتداولة تدريجياً في مزارع الخنازير الصينية، في حين أن ظهور النوع RFLP 1–4-4 قد جذب اهتمامًا عالميًا.

نظرًا لوجود سلالات مختلفة من السلالات واللقاحات الحية، فإن أحداث إعادة تركيب جينات PRRSV متكررة، مما يؤدي إلى طفرات فيروسية معقدة وصعوبات في السيطرة على اللقاح.

نتائج البحث

1. عزل وتحديد السلالة الجديدة GX2024:

· تم جمع أنسجة الرئة من الخنازير الصغيرة التي تظهر عليها أعراض تنفسية شديدة من مزرعة خنازير في سيتشوان والتي تم تطعيمها بلقاح RespPRRS MLV. تم عزل سلالة PRRSV GX2024 باستخدام خلايا Marc-145 والضامة السنخية للخنازير (iPAMs)، مع جينوم كامل الطول يبلغ 15018 نيوكليوتيد (رقم الإيداع في GenBank: PV362838).

الشكل 1. عزل فيروس PRRSV GX2024

(أ) تم تلقيح خلايا iPAM و Marc-145 بـ PRRSV GX2024 وتم الكشف عنها بعد 60 ساعة من الإصابة؛ (ب) تم إجراء فحص اللويحات لعزل GX2024 باستخدام خلايا iPAM مع تخفيف 10⁻⁹⁰ من محلول الفيروس؛ (ج) تم إصابة خلايا iPAM و Marc-145 بثقافة فيروس من الجيل السادس لمدة 48 ساعة، وتم إجراء IFA باستخدام جسم مضاد وحيد النسيلة مضاد لـ N PRRSV. تم تلطيخ نوى الخلايا بـ DAPI. مقياس الرسم = 75 ميكرومتر.

• يحتوي جين NSP2 لهذه السلالة على حذف غير مستمر لـ 131 حمضًا أمينيًا، بما يتوافق مع سلالة NADC30 (111 حمضًا أمينيًا محذوفًا في المواضع 322-432، وحمض أميني واحد محذوف في الموضع 483، و 19 حمضًا أمينيًا محذوفًا في المواضع 504-522)، ويحتوي بروتين GP5 على طفرات فريدة من الأحماض الأمينية (Pⁱ⁵→Lⁱ⁵، F²³→S²³، إلخ)، والتي تختلف اختلافًا كبيرًا عن سلالات L1C في الداخل والخارج.

الشكل 2. محاذاة الأحماض الأمينية متعددة التسلسل لـ NSP2 و GP5

(أ) توجد ثلاثة حذف غير مستمر (مناطق زرقاء) في مواضع الأحماض الأمينية 322–432 و 483 و 504–522 في NSP2 من GX2024 وسلالات تشبه NADC30. تشير المناطق ذات اللون الأحمر الفاتح إلى حذف الأحماض الأمينية في فيروس متلازمة الجهاز التنفسي والتناسلي للخنازير شديد الإمراضية (HP-PRRSV، سلالة تشبه JXA1). (ب) محاذاة تسلسل متعددة لمتواليات الأحماض الأمينية GP5 لسلالة GX2024 و 17 سلالة مرجعية PRRSV L1C من الصين والولايات المتحدة. تشير المربعات الأرجوانية إلى مناطق الببتيد الإشاري، وتشير المربعات الحمراء إلى المناطق شديدة التغير (HVR1 و 2)، وتشير المربعات الصفراء إلى مجالات عبر الغشاء (TM1 و 2 و 3).

2. يؤكد تحليل إعادة التركيب الجيني أصل إعادة التركيب الثلاثي:

كشف التحليل باستخدام برنامج RDP4 و SimPlot عن خمس نقاط توقف لإعادة التركيب في جينوم GX2024، وتقع في مناطق ORF1a و ORF1b و ORF3 و ORF4:

· أظهرت مناطق ORF1a (1-1868nt) و ORF1b (3565-9392nt) أعلى تجانس مع السلالة التي تشبه JXA1 (L8E)؛

· أظهرت منطقة ORF3 (12688-13172nt) تجانسًا بنسبة 90.1٪ مع سلالة لقاح RespPRRS MLV، وهي أعلى من السلالة الأم VR-2332؛

· كانت المناطق المتبقية (1869-3564nt، 9393-12687nt، إلخ) متجانسة للغاية مع السلالة التي تشبه NADC30 (L1C.5)، مما يؤكد أنها سلالة إعادة تركيب ثلاثية.

الجدول 1. مقارنة هوية النيوكليوتيدات بين GX2024 و 11 سلالة مرجعية PRRSV

الجدول 2. معلومات حدث إعادة التركيب المكتشفة في GX2024

الشكل 3. تحليل إعادة التركيب الجيني لعزل GX2024

3. تجربة الإمراضية: إبراز خطر كبير لوفاة 100٪

أجريت تجربة تحدي على 9 خنازير صغيرة تبلغ من العمر أربعة أسابيع بدون أجسام مضادة لـ PRRSV (5 تحدوا، 4 ضوابط):

· أصيبت الخنازير الصغيرة التي تم تحديها بحمى شديدة فوق 40 درجة مئوية في اليوم الثالث، وظهرت أعراض مثل ضيق التنفس، والترنح، والإسهال في الأيام 4-14. ماتت جميع الخنازير الصغيرة في غضون 14 يومًا (معدل الوفيات 100٪)؛ لم تظهر المجموعة الضابطة أي تشوهات.

الشكل 4. تحليل الإمراضية لعزل PRRSV GX2024 في الخنازير الصغيرة

(أ) تصميم التجربة الحيوانية لهذه الدراسة. (ب) درجة حرارة المستقيم للخنازير الصغيرة التي تم تلقيحها بـ GX2024 وغير المصابة بوسط RPMI-1640. تم تحديد قيمة القطع للحمى السريرية عند 40.0 درجة مئوية. (ج) درجات الأعراض السريرية في الأيام 3 و 7 و 10 و 14 أثناء تجربة التحدي. تضمنت الدرجات الأعراض السريرية وأعراض الجهاز التنفسي والأعراض العصبية. (د) منحنيات البقاء والوفيات للخنازير الصغيرة الملقحة. (هـ) متوسط ​​الزيادة الأسبوعية في وزن الخنازير الصغيرة الملقحة أثناء تجربة التحدي.

أظهر الفحص المرضي توطيدًا شديدًا، ووذمة، ونزيفًا في أنسجة الرئة للخنازير الصغيرة التي تم تحديها، وتسمك الحواجز السنخية، ونخر الخلايا الظهارية، وحدود غير واضحة بين القشرة والنخاع في العقد الليمفاوية، وانخفاض الخلايا الليمفاوية، والنزيف؛ أكدت الكيمياء المناعية وجود كميات كبيرة من مستضد PRRSV في الرئتين والعقد الليمفاوية.

الشكل 5. ملاحظة آفات الرئة والعقد الليمفاوية في الخنازير الصغيرة الملقحة

• أظهر اكتشاف الحمل الفيروسي أن الحمل الفيروسي في المصل وصل إلى ذروته بعد 7 أيام من التحدي، وكان الحمل الفيروسي في أنسجة الرئة أعلى بكثير من الحمل الفيروسي في الأنسجة الأخرى. علاوة على ذلك، أنتجت جميع الخنازير الصغيرة التي تم تحديها أجسامًا مضادة خاصة بـ PRRSV في غضون 7 أيام (S/P>0.4).

الشكل 6. الحمل الفيروسي في المصل والأنسجة واكتشاف الأجسام المضادة الخاصة بفيروس متلازمة الجهاز التنفسي والتناسلي للخنازير (PRRSV)

ملخص

تُبلغ هذه الدراسة لأول مرة عن سلالة PRRSV L1C.5 RFLP-1-4-4 شديدة الإمراضية والتي أعيد تركيبها من سلالة من النوع البري وسلالة لقاح، وهي قاتلة للغاية للخنازير الصغيرة. يمثل ظهور هذه السلالة تحديًا خطيرًا لاستراتيجيات مكافحة لقاح PRRS الحالية، مما يسلط الضوء على الحاجة إلى تعزيز مراقبة الفيروس، وتحسين تصميم اللقاح، والتركيز على السلامة البيولوجية وتدابير الوقاية والسيطرة المتكاملة.