El 2 de julio de 2025, un equipo liderado por Zhang Zhidong y Zhou Long de la Facultad de Ciencias Animales y Medicina Veterinaria de la Universidad del Suroeste para Nacionalidades, en colaboración con la Academia de Ciencias Animales de Sichuan, publicó su última investigación en la revista internacional *Frontiers in Veterinary Science*, informando sobre una nueva cepa del virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV), denominada GX2024, resultante de una hibridación de un virus de tipo salvaje y una vacuna de virus vivo modificada (MLV). Esta cepa fue aislada de una granja porcina en la provincia de Sichuan, China, y exhibió una patogenicidad extremadamente alta (100% de mortalidad) en lechones.
Aspectos destacados de la investigación
• Primer descubrimiento de las características altamente virulentas de la cepa recombinante PRRSV tipo L1C.5 RFLP-1-4-4 en China
• Esta cepa se recombinó a partir de tres fuentes: una cepa de tipo salvaje similar a NADC30 (L1C.5) + una cepa altamente patógena similar a JXA1 (L8E) + una cepa de vacuna viva comercial RespPRRS MLV (L5A)
• La infección de los lechones causó fiebre alta (40–42°C), hemorragia pulmonar y edema severos, y todos los lechones murieron en 14 días.
• Esto demuestra que las vacunas MLV actuales plantean un riesgo de recombinación y escape inmunitario en áreas endémicas de tipo salvaje.
En 2024, un equipo de investigación descubrió abortos y mortinatos en cerdas y mortalidad aguda en lechones en una granja porcina en Sichuan. El aislamiento celular y el análisis de secuenciación del genoma completo confirmaron que la nueva cepa GX2024 pertenece al tipo L1C.5 del linaje PRRSV-2.
Un análisis genético adicional reveló que esta cepa es un nuevo virus recombinante múltiple, co-recombinado a partir de una cepa de tipo salvaje similar a NADC30, una cepa altamente patógena similar a JXA1 y una cepa de vacuna de virus vivo modificada (MLV).
Los experimentos de desafío en animales mostraron que GX2024 es altamente patógeno; los lechones infectados murieron en un corto período, exhibiendo neumonía hemorrágica severa y edema pulmonar, ganglios linfáticos significativamente agrandados y hemorrágicos, un rápido aumento de la carga viral y un aumento significativo de los niveles de anticuerpos en suero.
Introducción
El síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRS) es una de las enfermedades virales más destructivas en la industria porcina mundial. En los últimos años, la cepa similar a NADC30 (L1C) se ha convertido gradualmente en la cepa circulante dominante en las granjas porcinas chinas, mientras que la aparición del tipo RFLP 1–4-4 ha atraído la atención mundial.
Debido a la coexistencia de diferentes linajes de cepas y vacunas vivas, los eventos de recombinación genética del PRRSV son frecuentes, lo que lleva a mutaciones virales complejas y dificultades en el control de las vacunas.
Resultados de la investigación
1. Aislamiento e identificación de la nueva cepa GX2024:
· Se recolectó tejido pulmonar de lechones que exhibían síntomas respiratorios severos de una granja porcina en Sichuan que había sido vacunada con la vacuna RespPRRS MLV. La cepa PRRSV GX2024 se aisló utilizando células Marc-145 y macrófagos alveolares porcinos (iPAM), con un genoma completo de 15018 nt (número de acceso GenBank: PV362838).
Figura 1. Aislamiento del virus PRRSV GX2024
(a) iPAM y células Marc-145 se inocularon con PRRSV GX2024 y se detectaron 60 horas después de la infección; (b) El ensayo de placa del aislado GX2024 se realizó utilizando células iPAM con una dilución 10⁻¹⁰ de la solución madre del virus; (c) iPAM y células Marc-145 se infectaron con cultivo de virus de sexta generación durante 48 horas, y se realizó IFA utilizando anticuerpo monoclonal anti-N PRRSV. Los núcleos celulares se tiñeron con DAPI. Barra de escala = 75 μm.
• El gen NSP2 de esta cepa tiene una deleción discontinua de 131 aminoácidos, consistente con la cepa NADC30 (111 aa eliminados en las posiciones 322-432, 1 aa eliminado en la posición 483 y 19 aa eliminados en las posiciones 504-522), y la proteína GP5 tiene mutaciones únicas de aminoácidos (P¹⁵→L¹⁵, F²³→S²³, etc.), que son significativamente diferentes de las cepas L1C en el país y en el extranjero.
Figura 2. Alineación múltiple de la secuencia de aminoácidos de NSP2 y GP5
(a) Existen tres deleciones discontinuas (regiones azules) en las posiciones de aminoácidos 322–432, 483 y 504–522 en NSP2 de GX2024 y cepas similares a NADC30. Las regiones de color rojo claro indican deleciones de aminoácidos en el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino altamente patógeno (HP-PRRSV, cepa similar a JXA1). (b) Alineación múltiple de la secuencia de aminoácidos GP5 de la cepa GX2024 y 17 cepas de referencia PRRSV L1C de China y Estados Unidos. Las cajas moradas indican regiones de péptidos señal, las cajas rojas indican regiones hipervariables (HVR1 y 2) y las cajas amarillas indican dominios transmembrana (TM1, 2 y 3).
2. El análisis de recombinación genómica confirma el origen de la triple recombinación:
El análisis utilizando el software RDP4 y SimPlot reveló cinco puntos de ruptura de recombinación en el genoma GX2024, ubicados en las regiones ORF1a, ORF1b, ORF3 y ORF4:
· Las regiones ORF1a (1-1868nt) y ORF1b (3565-9392nt) mostraron la mayor homología con la cepa similar a JXA1 (L8E);
· La región ORF3 (12688-13172nt) mostró un 90,1% de homología con la cepa de vacuna RespPRRS MLV, superior a su cepa parental VR-2332;
· Las regiones restantes (1869-3564nt, 9393-12687nt, etc.) fueron altamente homólogas con la cepa similar a NADC30 (L1C.5), lo que confirma que se trata de una cepa de triple recombinación.
Tabla 1. Comparación de la identidad de nucleótidos entre GX2024 y 11 cepas de referencia PRRSV
Tabla 2. Información del evento de recombinación detectada en GX2024
Figura 3. Análisis de recombinación genómica del aislado GX2024
3. Experimento de patogenicidad: el 100% de letalidad destaca el alto riesgo
Se realizó un experimento de desafío en 9 lechones de cuatro semanas de edad sin anticuerpos PRRSV (5 desafiados, 4 controles):
· Los lechones desafiados desarrollaron fiebre alta por encima de 40℃ el día 3, y los síntomas como dificultad respiratoria, ataxia y diarrea aparecieron entre los días 4 y 14. Todos los lechones murieron en 14 días (tasa de mortalidad del 100%); el grupo control no mostró anomalías.
Figura 4. Análisis de patogenicidad del aislado PRRSV GX2024 en lechones
(a) Diseño experimental animal de este estudio. (b) Temperatura rectal de lechones inoculados con GX2024 y no infectados con medio RPMI-1640. El valor de corte para la fiebre clínica se estableció en 40,0℃. (c) Puntuaciones de los síntomas clínicos en los días 3, 7, 10 y 14 durante el experimento de desafío. Las puntuaciones incluyeron síntomas clínicos, síntomas respiratorios y síntomas neurológicos. (d) Curvas de supervivencia y mortalidad de los lechones inoculados. (e) Ganancia de peso semanal media de los lechones inoculados durante el experimento de desafío.
El examen patológico mostró consolidación severa, edema y hemorragia en el tejido pulmonar de los lechones desafiados, engrosamiento de los septos alveolares, necrosis de las células epiteliales, límites borrosos entre la corteza y la médula de los ganglios linfáticos, disminución de los linfocitos y hemorragia; la inmunohistoquímica confirmó la presencia de grandes cantidades de antígeno PRRSV en los pulmones y los ganglios linfáticos.
Figura 5. Observación de lesiones pulmonares y de ganglios linfáticos en lechones inoculados
• La detección de la carga viral mostró que la carga viral en suero alcanzó su punto máximo 7 días después del desafío, y la carga viral en el tejido pulmonar fue significativamente mayor que en otros tejidos. Además, todos los lechones desafiados produjeron anticuerpos específicos contra el PRRSV en 7 días (S/P>0,4).
Figura 6. Carga viral en suero y tejidos y detección de anticuerpos específicos contra el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV)
Resumen
Este estudio informa por primera vez sobre una cepa PRRSV L1C.5 RFLP-1-4-4 altamente patógena recombinada a partir de una cepa de tipo salvaje y una cepa de vacuna, que es extremadamente letal para los lechones. La aparición de esta cepa plantea un serio desafío a las estrategias actuales de control de la vacuna contra el PRRS, lo que destaca la necesidad de una vigilancia viral reforzada, un diseño de vacunas optimizado y el énfasis en la bioseguridad y las medidas integradas de prevención y control.
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