hakkında şirket haberleri Bir Sichuan ekibi, yeni bir rekombinant PRRSV yüksek patojenik virüs suşu keşfetti: Aşı ve vahşi tipin rekombinasyonu

2 Temmuz 2025'te, Southwest University for Nationalities Hayvan Bilimi ve Veterinerlik Fakültesi'nden Zhang Zhidong ve Zhou Long liderliğindeki bir ekip, Sichuan Eyaleti Hayvan Bilimleri Akademisi ile işbirliği içinde, uluslararası *Frontiers in Veterinary Science* dergisinde en son araştırmalarını yayınladı ve vahşi tip bir virüs ile modifiye canlı virüs aşısının (MLV) hibritleşmesinden kaynaklanan GX2024 adı verilen yeni bir domuz üreme ve solunum sendromu virüsü (PRRSV) suşunu bildirdi. Bu suş, Çin'in Sichuan Eyaleti'ndeki bir domuz çiftliğinden izole edilmiş ve domuz yavrularında son derece yüksek patojenite (%100 ölüm) sergilemiştir.

Araştırmanın Öne Çıkanları

• Çin'de L1C.5 RFLP-1-4-4 tipi PRRSV rekombinant suşunun yüksek virülans özelliklerinin ilk keşfi

• Bu suş, üç kaynaktan rekombine edilmiştir: NADC30 benzeri vahşi tip suş (L1C.5) + yüksek patojeniteli JXA1 benzeri suş (L8E) + ticari canlı aşı suşu RespPRRS MLV (L5A)

• Domuz yavrularının enfeksiyonu yüksek ateşe (40–42°C), şiddetli akciğer kanamasına ve ödeme neden oldu ve tüm domuz yavruları 14 gün içinde öldü.

• Bu, mevcut MLV aşılarının vahşi tip endemik bölgelerde rekombinasyon ve bağışıklıktan kaçış riski oluşturduğunu göstermektedir.

2024 yılında bir araştırma ekibi, Sichuan'daki bir domuz çiftliğinde gebe domuzlarda düşük ve ölü doğumlar ile domuz yavrularında akut ölüm vakaları keşfetti. Hücre izolasyonu ve tüm genom dizileme analizi, yeni GX2024 suşunun PRRSV-2 soyunun L1C.5 tipine ait olduğunu doğrulamıştır.

Daha fazla genetik analiz, bu suşun, NADC30 benzeri vahşi tip suş, yüksek patojeniteli JXA1 benzeri suş ve modifiye canlı virüs aşı suşundan (MLV) ortaklaşa rekombine edilmiş yeni bir çoklu rekombinant virüs olduğunu ortaya koydu.

Hayvan deneme deneyleri, GX2024'ün yüksek patojeniteli olduğunu gösterdi; enfekte domuz yavruları kısa bir süre içinde öldü, şiddetli hemorajik pnömoni ve akciğer ödemi, önemli ölçüde büyümüş ve hemorajik lenf düğümleri, viral yükte hızlı bir artış ve serum antikor seviyelerinde önemli bir artış sergilediler.

Giriş

Domuz üreme ve solunum sendromu (PRRS), küresel domuz endüstrisindeki en yıkıcı viral hastalıklardan biridir. Son yıllarda, NADC30 benzeri (L1C) suşu, Çin domuz çiftliklerinde giderek baskın dolaşımdaki suş haline gelirken, RFLP tipi 1–4-4'ün ortaya çıkışı küresel dikkat çekmiştir.

Farklı suş soylarının ve canlı aşıların bir arada bulunması nedeniyle, PRRSV gen rekombinasyon olayları sıktır ve bu da karmaşık viral mutasyonlara ve aşı kontrolünde zorluklara yol açmaktadır.

Araştırma Sonuçları

1. Yeni GX2024 suşunun izolasyonu ve tanımlanması:

· RespPRRS MLV aşısı ile aşılanmış Sichuan'daki bir domuz çiftliğinden, şiddetli solunum semptomları gösteren domuz yavrularından akciğer dokusu toplandı. PRRSV suşu GX2024, Marc-145 hücreleri ve domuz alveoler makrofajları (iPAM'ler) kullanılarak izole edildi ve 15018 nt'lik (GenBank erişim numarası: PV362838) tam uzunlukta bir genomu vardı.

Şekil 1. PRRSV GX2024'ün virüs izolasyonu

(a) iPAM ve Marc-145 hücreleri PRRSV GX2024 ile aşılandı ve enfeksiyondan 60 saat sonra tespit edildi; (b) GX2024 izolatının plak deneyi, virüs stok solüsyonunun 10⁻¹⁰ seyreltisi ile iPAM hücreleri kullanılarak gerçekleştirildi; (c) iPAM ve Marc-145 hücreleri, altıncı nesil virüs kültürü ile 48 saat boyunca enfekte edildi ve anti-N PRRSV monoklonal antikor kullanılarak IFA gerçekleştirildi. Hücre çekirdekleri DAPI ile boyandı. Ölçek çubuğu = 75 μm.

• Bu suşun NSP2 geni, NADC30 suşu ile uyumlu olarak 131 amino asitlik kesintili bir delesyona sahiptir (322-432 pozisyonlarında 111 aa delesyon, 483 pozisyonunda 1 aa delesyon ve 504-522 pozisyonlarında 19 aa delesyon) ve GP5 proteini, yurt içinde ve yurt dışında L1C suşlarından önemli ölçüde farklı olan benzersiz amino asit mutasyonlarına sahiptir (P¹⁵→L¹⁵, F²³→S²³ vb.).

Şekil 2. NSP2 ve GP5'in çoklu dizi amino asit hizalaması

(a) GX2024 ve NADC30 benzeri suşların NSP2'sinde 322–432, 483 ve 504–522 amino asit pozisyonlarında üç kesintili delesyon (mavi bölgeler) mevcuttur. Açık kırmızı bölgeler, yüksek patojeniteli domuz üreme ve solunum sendromu virüsünde (HP-PRRSV, JXA1 benzeri suş) amino asit delesyonlarını gösterir. (b) GX2024 suşunun ve Çin ve Amerika Birleşik Devletleri'nden 17 L1C PRRSV referans suşunun GP5 amino asit dizilerinin çoklu dizi hizalaması. Mor kutular sinyal peptit bölgelerini, kırmızı kutular hiperdeğişken bölgeleri (HVR1 ve 2) ve sarı kutular transmembran alanlarını (TM1, 2 ve 3) gösterir.

2. Genomik rekombinasyon analizi, üçlü rekombinasyon kökenini doğrular:

RDP4 ve SimPlot yazılımı kullanılarak yapılan analiz, GX2024 genomunda ORF1a, ORF1b, ORF3 ve ORF4 bölgelerinde bulunan beş rekombinasyon kırılma noktası ortaya koydu:

· ORF1a (1-1868nt) ve ORF1b (3565-9392nt) bölgeleri, JXA1 benzeri (L8E) suşu ile en yüksek homolojiyi gösterdi;

· ORF3 (12688-13172nt) bölgesi, ebeveyni VR-2332 suşundan daha yüksek olan %90,1 homoloji ile RespPRRS MLV aşı suşu ile homoloji gösterdi;

· Kalan bölgeler (1869-3564nt, 9393-12687nt, vb.), NADC30 benzeri (L1C.5) suşu ile yüksek oranda homoloji göstererek, onu üçlü rekombinasyon suşu olarak doğrulamaktadır.

Tablo 1. GX2024 ile 11 PRRSV referans suşu arasındaki nükleotid kimliğinin karşılaştırılması

Tablo 2. GX2024'te tespit edilen rekombinasyon olayı bilgileri

Şekil 3. GX2024 izolatının genomik rekombinasyon analizi

3. Patojenite deneyi: %100 ölüm, yüksek riski vurgular

PRRSV antikorları olmayan 9 adet dört haftalık domuz yavrusu üzerinde bir meydan okuma deneyi yapıldı (5'i meydan okundu, 4'ü kontrol):

· Meydan okunan domuz yavruları, 3. günde 40℃'ün üzerinde yüksek ateş geliştirdi ve 4-14. günlerde solunum sıkıntısı, ataksi ve ishal gibi semptomlar ortaya çıktı. Tüm domuz yavruları 14 gün içinde öldü (%100 ölüm oranı); kontrol grubunda anormallik görülmedi.

Şekil 4. PRRSV izolatı GX2024'ün domuz yavrularındaki patojenite analizi

(a) Bu çalışmanın hayvan deney tasarımı. (b) GX2024 ile aşılanan ve RPMI-1640 ortamı ile enfekte olmayan domuz yavrularının rektal sıcaklığı. Klinik ateş için kesme değeri 40.0℃ olarak ayarlandı. (c) Meydan okuma deneyi sırasında 3, 7, 10 ve 14. günlerdeki klinik semptom skorları. Skorlar klinik semptomları, solunum semptomlarını ve nörolojik semptomları içeriyordu. (d) Aşılanan domuz yavrularının sağkalım ve ölüm eğrileri. (e) Meydan okuma deneyi sırasında aşılanan domuz yavrularının ortalama haftalık kilo alımı.

Patolojik inceleme, meydan okunan domuz yavrularının akciğer dokusunda şiddetli konsolidasyon, ödem ve kanama, alveoler septaların kalınlaşması, epitel hücre nekrozu, lenf düğümlerinin korteks ve medulla sınırlarının bulanıklaşması, lenfositlerde azalma ve kanama gösterdi; immünohistokimya, akciğerlerde ve lenf düğümlerinde büyük miktarda PRRSV antijeninin varlığını doğruladı.

Şekil 5. Aşılanan domuz yavrularında akciğer ve lenf düğümü lezyonlarının gözlemi

• Viral yük tespiti, serum viral yükünün meydan okumadan 7 gün sonra zirveye ulaştığını ve akciğer dokusundaki viral yükün diğer dokulardan önemli ölçüde daha yüksek olduğunu gösterdi. Ayrıca, meydan okunan tüm domuz yavruları 7 gün içinde PRRSV'ye özgü antikorlar üretti (S/P>0.4).

Şekil 6. Serum ve dokulardaki viral yük ve domuz üreme ve solunum sendromu virüsüne (PRRSV) özgü antikorların tespiti

Özet

Bu çalışma, vahşi tip bir suş ve bir aşı suşundan rekombine edilmiş, domuz yavruları için son derece ölümcül olan yüksek patojeniteli bir L1C.5 RFLP-1-4-4 PRRSV suşunu ilk kez bildirmektedir. Bu suşun ortaya çıkışı, mevcut PRRS aşı kontrol stratejileri için ciddi bir zorluk oluşturmakta, güçlendirilmiş virüs gözetimi, optimize edilmiş aşı tasarımı ve biyogüvenlik ve entegre önleme ve kontrol önlemlerine vurgu yapılması ihtiyacını vurgulamaktadır.