новости компании о Команда из Сычуани обнаружила новый рекомбинантный штамм вируса PRRSV высокой патогенности: Рекомбинация вакцинного и дикого типов.

2 июля 2025 года группа под руководством Чжан Чжидуна и Чжоу Луна из Колледжа ветеринарной медицины Юго-Западного университета национальностей в сотрудничестве с Сычуаньской академией сельскохозяйственных наук опубликовала свое последнее исследование в международном журнале *Frontiers in Veterinary Science*, сообщив о новом штамме вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), названном GX2024, который является результатом гибридизации вируса дикого типа и модифицированной живой вакцины (MLV). Этот штамм был выделен на свиноферме в провинции Сычуань, Китай, и продемонстрировал чрезвычайно высокую патогенность (100% смертность) у поросят.

Основные моменты исследования

• Первое обнаружение высоко вирулентных характеристик рекомбинантного штамма PRRSV типа L1C.5 RFLP-1-4-4 в Китае

• Этот штамм был рекомбинирован из трех источников: штамма дикого типа, подобного NADC30 (L1C.5) + высокопатогенного штамма, подобного JXA1 (L8E) + коммерческого штамма живой вакцины RespPRRS MLV (L5A)

• Инфекция поросят вызвала высокую температуру (40–42°C), тяжелые легочные кровоизлияния и отек, и все поросята погибли в течение 14 дней.

• Это демонстрирует, что существующие вакцины MLV представляют риск рекомбинации и иммунного уклонения в эндемичных районах дикого типа.

В 2024 году исследовательская группа обнаружила аборты и мертворождения у свиноматок и острую смертность у поросят на свиноферме в Сычуани. Анализ выделения клеток и секвенирования всего генома подтвердил, что новый штамм GX2024 относится к типу L1C.5 родословной PRRSV-2.

Дальнейший генетический анализ показал, что этот штамм является новым мультиплексным рекомбинантным вирусом, совместно рекомбинированным из штамма дикого типа, подобного NADC30, высокопатогенного штамма, подобного JXA1, и штамма модифицированной живой вакцины (MLV).

Эксперименты на животных показали, что GX2024 обладает высокой патогенностью; зараженные поросята погибали в течение короткого периода времени, демонстрируя тяжелую геморрагическую пневмонию и отек легких, значительно увеличенные и геморрагические лимфатические узлы, быстрое увеличение вирусной нагрузки и значительное увеличение уровня антител в сыворотке.

Введение

Репродуктивно-респираторный синдром свиней (PRRS) является одним из самых разрушительных вирусных заболеваний в мировой свиноводческой промышленности. В последние годы штамм, подобный NADC30 (L1C), постепенно становится доминирующим циркулирующим штаммом на китайских свинофермах, в то время как появление типа RFLP 1–4-4 привлекло глобальное внимание.

Из-за сосуществования различных линий штаммов и живых вакцин события рекомбинации генов PRRSV происходят часто, что приводит к сложным вирусным мутациям и трудностям в контроле вакцинации.

Результаты исследования

1. Выделение и идентификация нового штамма GX2024:

· Ткань легких поросят, проявляющих тяжелые респираторные симптомы, была собрана со свинофермы в Сычуани, которая была вакцинирована вакциной RespPRRS MLV. Штамм PRRSV GX2024 был выделен с использованием клеток Marc-145 и альвеолярных макрофагов свиней (iPAM), с полноразмерным геномом 15018 нт (номер доступа GenBank: PV362838).

Рисунок 1. Выделение вируса PRRSV GX2024

(a) iPAM и клетки Marc-145 были инокулированы PRRSV GX2024 и обнаружены через 60 часов после заражения; (b) Анализ бляшек изолята GX2024 был проведен с использованием клеток iPAM с 10⁻¹⁰ разбавлением вирусного исходного раствора; (c) iPAM и клетки Marc-145 были инфицированы культурой вируса шестого поколения в течение 48 часов, и был выполнен IFA с использованием моноклонального антитела против N PRRSV. Ядра клеток были окрашены DAPI. Масштабная полоса = 75 μm.

• Ген NSP2 этого штамма имеет прерывистую делецию 131 аминокислоты, соответствующую штамму NADC30 (111 аа удалены в положениях 322-432, 1 аа удалена в положении 483 и 19 аа удалены в положениях 504-522), а белок GP5 имеет уникальные аминокислотные мутации (P¹⁵→L¹⁵, F²³→S²³ и т. д.), которые значительно отличаются от штаммов L1C в стране и за рубежом.

Рисунок 2. Множественное выравнивание аминокислотной последовательности NSP2 и GP5

(a) Три прерывистые делеции (синие области) существуют в положениях аминокислот 322–432, 483 и 504–522 в NSP2 GX2024 и штаммов, подобных NADC30. Светло-красные области указывают на делеции аминокислот в высокопатогенном вирусе репродуктивно-респираторного синдрома свиней (HP-PRRSV, штамм, подобный JXA1). (b) Множественное выравнивание последовательностей аминокислот GP5 штамма GX2024 и 17 референсных штаммов PRRSV L1C из Китая и США. Фиолетовые рамки указывают на области сигнального пептида, красные рамки указывают на гипервариабельные области (HVR1 и 2), а желтые рамки указывают на трансмембранные домены (TM1, 2 и 3).

2. Анализ геномной рекомбинации подтверждает тройное происхождение рекомбинации:

Анализ с использованием программного обеспечения RDP4 и SimPlot выявил пять точек рекомбинации в геноме GX2024, расположенных в областях ORF1a, ORF1b, ORF3 и ORF4:

· Области ORF1a (1-1868 нт) и ORF1b (3565-9392 нт) показали наибольшую гомологию со штаммом, подобным JXA1 (L8E);

· Область ORF3 (12688-13172 нт) показала 90,1% гомологии со штаммом вакцины RespPRRS MLV, что выше, чем у его родительского штамма VR-2332;

· Остальные области (1869-3564 нт, 9393-12687 нт и т. д.) были высоко гомологичны штамму, подобному NADC30 (L1C.5), подтверждая его как штамм тройной рекомбинации.

Таблица 1. Сравнение идентичности нуклеотидов между GX2024 и 11 референсными штаммами PRRSV

Таблица 2. Информация о событии рекомбинации, обнаруженном в GX2024

Рисунок 3. Анализ геномной рекомбинации изолята GX2024

3. Эксперимент на патогенность: 100% летальность подчеркивает высокий риск

Эксперимент с заражением был проведен на 9 четырехнедельных поросятах без антител к PRRSV (5 зараженных, 4 контрольных):

· У зараженных поросят развилась высокая температура выше 40℃ на 3-й день, а такие симптомы, как респираторный дистресс, атаксия и диарея, появились на 4-14 дни. Все поросята погибли в течение 14 дней (смертность 100%); в контрольной группе отклонений не наблюдалось.

Рисунок 4. Анализ патогенности изолята PRRSV GX2024 у поросят

(a) Дизайн эксперимента на животных в этом исследовании. (b) Ректальная температура поросят, инокулированных GX2024 и незараженных средой RPMI-1640. Отсечка для клинической лихорадки была установлена на уровне 40,0℃. (c) Оценки клинических симптомов на 3, 7, 10 и 14 дни во время эксперимента с заражением. Оценки включали клинические симптомы, респираторные симптомы и неврологические симптомы. (d) Кривые выживаемости и смертности инокулированных поросят. (e) Средняя еженедельная прибавка в весе инокулированных поросят во время эксперимента с заражением.

Патологическое исследование показало тяжелое уплотнение, отек и кровоизлияние в ткани легких зараженных поросят, утолщение альвеолярных перегородок, некроз эпителиальных клеток, размытые границы между корой и мозговым веществом лимфатических узлов, уменьшение количества лимфоцитов и кровоизлияние; иммуногистохимия подтвердила наличие большого количества антигена PRRSV в легких и лимфатических узлах.

Рисунок 5. Наблюдение за поражениями легких и лимфатических узлов у инокулированных поросят

• Обнаружение вирусной нагрузки показало, что вирусная нагрузка в сыворотке достигла пика через 7 дней после заражения, а вирусная нагрузка в ткани легких была значительно выше, чем в других тканях. Кроме того, у всех зараженных поросят выработались специфические антитела к PRRSV в течение 7 дней (S/P>0,4).

Рисунок 6. Вирусная нагрузка в сыворотке и тканях и обнаружение специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV)

Резюме

В этом исследовании впервые сообщается о высокопатогенном штамме PRRSV L1C.5 RFLP-1-4-4, рекомбинированном из штамма дикого типа и штамма вакцины, который чрезвычайно смертелен для поросят. Появление этого штамма представляет серьезную проблему для текущих стратегий контроля вакцинации против PRRS, подчеркивая необходимость усиленного надзора за вирусами, оптимизированного дизайна вакцин и акцента на биобезопасности и комплексных мерах профилактики и контроля.