ข่าว บริษัท เกี่ยวกับ ทีมเสฉวนค้นพบไวรัส PRRSV สายพันธุ์ใหม่ที่เกิดจากการรวมตัวกันของยีน ซึ่งมีความรุนแรงสูง: การรวมตัวกันของวัคซีนและสายพันธุ์ป่า

เมื่อวันที่ 2 กรกฎาคม 2025 ทีมงานนำโดย Zhang Zhidong และ Zhou Long จาก College of Animal Science and Veterinary Medicine มหาวิทยาลัย Southwest University for Nationalities ร่วมกับ Sichuan Academy of Animal Sciences ได้ตีพิมพ์งานวิจัยล่าสุดในวารสารนานาชาติ *Frontiers in Veterinary Science* รายงานไวรัสกลุ่มอาการทางเดินหายใจและระบบสืบพันธุ์ในสุกรชนิดใหม่ (PRRSV) สายพันธุ์ GX2024 ซึ่งเกิดจากการผสมข้ามสายพันธุ์ของไวรัสชนิดป่าและวัคซีนไวรัสมีชีวิตดัดแปลง (MLV) สายพันธุ์นี้ถูกแยกได้จากฟาร์มสุกรในมณฑลเสฉวน ประเทศจีน และแสดงให้เห็นถึงความรุนแรงสูงมาก (อัตราการตาย 100%) ในลูกสุกร

ไฮไลท์งานวิจัย

• การค้นพบครั้งแรกของลักษณะเฉพาะที่มีความรุนแรงสูงของสายพันธุ์ PRRSV รีคอมบิแนนท์ชนิด L1C.5 RFLP-1-4-4 ในประเทศจีน

• สายพันธุ์นี้เกิดจากการรวมตัวกันจากสามแหล่งที่มา: สายพันธุ์ป่าชนิด NADC30-like (L1C.5) + สายพันธุ์ JXA1-like ที่ก่อโรคสูง (L8E) + สายพันธุ์วัคซีนมีชีวิตทางการค้า RespPRRS MLV (L5A)

• การติดเชื้อในลูกสุกรทำให้เกิดไข้สูง (40–42°C) เลือดออกในปอดอย่างรุนแรงและบวมน้ำ และลูกสุกรทั้งหมดเสียชีวิตภายใน 14 วัน

• สิ่งนี้แสดงให้เห็นว่าวัคซีน MLV ในปัจจุบันมีความเสี่ยงในการรวมตัวใหม่และการหลบหนีภูมิคุ้มกันในพื้นที่ที่มีไวรัสชนิดป่าระบาด

ในปี 2024 ทีมวิจัยค้นพบการแท้งและการคลอดก่อนกำหนดในแม่สุกรและการตายเฉียบพลันในลูกสุกรที่ฟาร์มสุกรในเสฉวน การวิเคราะห์การแยกเซลล์และการจัดลำดับจีโนมทั้งหมดยืนยันว่าสายพันธุ์ใหม่ GX2024 เป็นของชนิด L1C.5 ของสายพันธุ์ PRRSV-2

การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมเพิ่มเติมเปิดเผยว่าสายพันธุ์นี้เป็นไวรัสรีคอมบิแนนท์แบบหลายส่วนชนิดใหม่ ซึ่งเกิดจากการรวมตัวกันจากสายพันธุ์ป่าชนิด NADC30-like, สายพันธุ์ JXA1-like ที่ก่อโรคสูง และสายพันธุ์วัคซีนไวรัสมีชีวิตดัดแปลง (MLV)

การทดลองท้าทายในสัตว์แสดงให้เห็นว่า GX2024 มีความรุนแรงสูง ลูกสุกรที่ติดเชื้อเสียชีวิตในระยะเวลาอันสั้น แสดงอาการปอดบวมจากเลือดออกและบวมน้ำอย่างรุนแรง ต่อมน้ำเหลืองขยายใหญ่ขึ้นและมีเลือดออกอย่างมีนัยสำคัญ การเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วของปริมาณไวรัส และการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของระดับแอนติบอดีในซีรัม

บทนำ

กลุ่มอาการทางเดินหายใจและระบบสืบพันธุ์ในสุกร (PRRS) เป็นหนึ่งในโรคไวรัสที่ทำลายล้างมากที่สุดในอุตสาหกรรมสุกรทั่วโลก ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา สายพันธุ์ NADC30-like (L1C) ได้กลายเป็นสายพันธุ์ที่แพร่หลายในฟาร์มสุกรของจีนอย่างค่อยเป็นค่อยไป ในขณะที่การปรากฏตัวของชนิด RFLP 1–4-4 ได้ดึงดูดความสนใจจากทั่วโลก

เนื่องจากการมีอยู่ร่วมกันของสายพันธุ์และวัคซีนมีชีวิตที่แตกต่างกัน เหตุการณ์การรวมตัวใหม่ของยีน PRRSV เกิดขึ้นบ่อยครั้ง นำไปสู่การกลายพันธุ์ของไวรัสที่ซับซ้อนและความยากลำบากในการควบคุมวัคซีน

ผลการวิจัย

1. การแยกและการระบุสายพันธุ์ใหม่ GX2024:

· เนื้อเยื่อปอดจากลูกสุกรที่แสดงอาการทางเดินหายใจรุนแรงถูกเก็บรวบรวมจากฟาร์มสุกรในเสฉวนที่ได้รับวัคซีน RespPRRS MLV สายพันธุ์ PRRSV GX2024 ถูกแยกโดยใช้เซลล์ Marc-145 และมาโครฟาจในถุงลมปอดของสุกร (iPAMs) โดยมีจีโนมเต็มความยาว 15018 nt (หมายเลขการเข้าถึง GenBank: PV362838)

รูปที่ 1 การแยกไวรัส PRRSV GX2024

(a) iPAM และเซลล์ Marc-145 ถูกฉีดด้วย PRRSV GX2024 และตรวจพบ 60 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ (b) การทดสอบเพลทของไอโซเลต GX2024 ดำเนินการโดยใช้เซลล์ iPAM โดยใช้สารละลายสต็อกไวรัสเจือจาง 10⁻¹⁰ (c) iPAM และเซลล์ Marc-145 ติดเชื้อด้วยการเพาะเลี้ยงไวรัสรุ่นที่หกเป็นเวลา 48 ชั่วโมง และดำเนินการ IFA โดยใช้แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน N PRRSV นิวเคลียสของเซลล์ถูกย้อมด้วย DAPI มาตราส่วน = 75 μm

• ยีน NSP2 ของสายพันธุ์นี้มีการลบแบบไม่ต่อเนื่องของกรดอะมิโน 131 ตัว ซึ่งสอดคล้องกับสายพันธุ์ NADC30 (ลบ 111 aa ที่ตำแหน่ง 322-432, ลบ 1 aa ที่ตำแหน่ง 483 และลบ 19 aa ที่ตำแหน่ง 504-522) และโปรตีน GP5 มีการกลายพันธุ์ของกรดอะมิโนที่ไม่ซ้ำกัน (P¹⁵→L¹⁵, F²³→S²³ เป็นต้น) ซึ่งแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากสายพันธุ์ L1C ในประเทศและต่างประเทศ

รูปที่ 2 การจัดตำแหน่งกรดอะมิโนหลายลำดับของ NSP2 และ GP5

(a) มีการลบแบบไม่ต่อเนื่องสามครั้ง (บริเวณสีน้ำเงิน) ที่ตำแหน่งกรดอะมิโน 322–432, 483 และ 504–522 ใน NSP2 ของ GX2024 และสายพันธุ์ NADC30-like บริเวณสีแดงอ่อนระบุถึงการลบกรดอะมิโนในไวรัสกลุ่มอาการทางเดินหายใจและระบบสืบพันธุ์ในสุกรที่ก่อโรคสูง (HP-PRRSV, สายพันธุ์ JXA1-like) (b) การจัดตำแหน่งหลายลำดับของลำดับกรดอะมิโน GP5 ของสายพันธุ์ GX2024 และสายพันธุ์อ้างอิง PRRSV L1C 17 สายพันธุ์จากจีนและสหรัฐอเมริกา กล่องสีม่วงระบุบริเวณเปปไทด์สัญญาณ กล่องสีแดงระบุบริเวณที่มีการเปลี่ยนแปลงสูง (HVR1 และ 2) และกล่องสีเหลืองระบุโดเมนข้ามเยื่อหุ้มเซลล์ (TM1, 2 และ 3)

2. การวิเคราะห์การรวมตัวใหม่ของจีโนมยืนยันต้นกำเนิดการรวมตัวใหม่สามครั้ง:

การวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ RDP4 และ SimPlot เปิดเผยจุดแตกหักของการรวมตัวใหม่ห้าจุดในจีโนม GX2024 ซึ่งอยู่ในบริเวณ ORF1a, ORF1b, ORF3 และ ORF4:

· บริเวณ ORF1a (1-1868nt) และ ORF1b (3565-9392nt) แสดงให้เห็นความคล้ายคลึงกันสูงสุดกับสายพันธุ์ JXA1-like (L8E);

· บริเวณ ORF3 (12688-13172nt) แสดงให้เห็นความคล้ายคลึงกัน 90.1% กับสายพันธุ์วัคซีน RespPRRS MLV ซึ่งสูงกว่าสายพันธุ์ VR-2332 ที่เป็นแม่;

· บริเวณที่เหลือ (1869-3564nt, 9393-12687nt เป็นต้น) มีความคล้ายคลึงกันสูงกับสายพันธุ์ NADC30-like (L1C.5) ยืนยันว่าเป็นสายพันธุ์รวมตัวใหม่สามครั้ง

ตารางที่ 1 การเปรียบเทียบเอกลักษณ์นิวคลีโอไทด์ระหว่าง GX2024 และสายพันธุ์อ้างอิง PRRSV 11 สายพันธุ์

ตารางที่ 2 ข้อมูลเหตุการณ์การรวมตัวใหม่ที่ตรวจพบใน GX2024

รูปที่ 3 การวิเคราะห์การรวมตัวใหม่ของจีโนมของไอโซเลต GX2024

3. การทดลองก่อโรค: การตาย 100% เน้นความเสี่ยงสูง

การทดลองท้าทายดำเนินการกับลูกสุกรอายุสี่สัปดาห์ 9 ตัวที่ไม่มีแอนติบอดี PRRSV (ท้าทาย 5 ตัว ควบคุม 4 ตัว):

· ลูกสุกรที่ถูกท้าทายมีไข้สูงกว่า 40℃ ในวันที่ 3 และอาการต่างๆ เช่น ภาวะหายใจลำบาก อาการเดินเซ และท้องเสียปรากฏในวันที่ 4-14 ลูกสุกรทั้งหมดเสียชีวิตภายใน 14 วัน (อัตราการตาย 100%); กลุ่มควบคุมไม่แสดงความผิดปกติใดๆ

รูปที่ 4 การวิเคราะห์การก่อโรคของไอโซเลต PRRSV GX2024 ในลูกสุกร

(a) การออกแบบการทดลองในสัตว์ของการศึกษานี้ (b) อุณหภูมิทางทวารหนักของลูกสุกรที่ฉีดด้วย GX2024 และไม่ติดเชื้อด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ RPMI-1640 ค่าตัดออกสำหรับไข้ทางคลินิกถูกตั้งไว้ที่ 40.0℃ (c) คะแนนอาการทางคลินิกในวันที่ 3, 7, 10 และ 14 ระหว่างการทดลองท้าทาย คะแนนรวมถึงอาการทางคลินิก อาการทางเดินหายใจ และอาการทางระบบประสาท (d) เส้นโค้งการรอดชีวิตและการตายของลูกสุกรที่ฉีด (e) การเพิ่มน้ำหนักเฉลี่ยรายสัปดาห์ของลูกสุกรที่ฉีดระหว่างการทดลองท้าทาย

การตรวจทางพยาธิวิทยาแสดงให้เห็นการรวมตัวกันอย่างรุนแรง บวมน้ำ และเลือดออกในเนื้อเยื่อปอดของลูกสุกรที่ถูกท้าทาย การหนาตัวของผนังถุงลม การตายของเซลล์บุผิว ขอบเขตที่ไม่ชัดเจนระหว่างเปลือกนอกและไขกระดูกของต่อมน้ำเหลือง จำนวนลิมโฟไซต์ลดลง และเลือดออก การย้อมสีด้วยภูมิคุ้มกันเคมียืนยันการมีอยู่ของแอนติเจน PRRSV จำนวนมากในปอดและต่อมน้ำเหลือง

รูปที่ 5 การสังเกตพยาธิสภาพปอดและรอยโรคต่อมน้ำเหลืองในลูกสุกรที่ฉีด

• การตรวจจับปริมาณไวรัสแสดงให้เห็นว่าปริมาณไวรัสในซีรัมถึงจุดสูงสุด 7 วันหลังการท้าทาย และปริมาณไวรัสในเนื้อเยื่อปอดสูงกว่าเนื้อเยื่ออื่นๆ อย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ ลูกสุกรที่ถูกท้าทายทั้งหมดสร้างแอนติบอดีจำเพาะ PRRSV ภายใน 7 วัน (S/P>0.4)

รูปที่ 6 ปริมาณไวรัสในซีรัมและเนื้อเยื่อและการตรวจจับแอนติบอดีจำเพาะไวรัสกลุ่มอาการทางเดินหายใจและระบบสืบพันธุ์ในสุกร (PRRSV)

สรุป

การศึกษานี้รายงานเป็นครั้งแรกถึงสายพันธุ์ PRRSV L1C.5 RFLP-1-4-4 ที่ก่อโรคสูง ซึ่งเกิดจากการรวมตัวใหม่จากสายพันธุ์ป่าและสายพันธุ์วัคซีน ซึ่งเป็นอันตรายถึงชีวิตอย่างยิ่งต่อลูกสุกร การเกิดขึ้นของสายพันธุ์นี้ก่อให้เกิดความท้าทายอย่างร้ายแรงต่อกลยุทธ์การควบคุมวัคซีน PRRS ในปัจจุบัน เน้นย้ำถึงความจำเป็นในการเสริมสร้างการเฝ้าระวังไวรัส การออกแบบวัคซีนที่เหมาะสม และการเน้นย้ำถึงความปลอดภัยทางชีวภาพและมาตรการป้องกันและควบคุมแบบบูรณาการ