En 2006, HP-PRRSV, qui a évolué à partir du PRRSV classique, a causé une épidémie en Chine caractérisée par une forte fièvre, une morbidité et une mortalité.la souche s'est largement répandue en Chine et en AsieLe VPH-PRRSV et ses variantes sont devenus les souches dominantes en Chine, mais les recherches sur les schémas épidémiologiques, l'évolution moléculaire, laet la pathogénicité du nouveau L8.7 Le PRRSV demeure limité.
Le 22 mai 2025, a study titled "Genetic Evolution and Pathogenic Variation of Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus" published in the journal Taylor & Francis systematically explained the epidemic dynamics, les tendances évolutives, les associations de souches vaccinales et les lois de l' évolution de la pathogénicité de la lignée L8.7.
Cette étude fournit des données clés pour l'élaboration de stratégies de prévention et de lutte contre le VRSPR L8.7.
Résumé
Sur la base de l'analyse de 2 509 séquences génétiques globales L8.7 ORF5, la lignée L8.7 a été divisée en sept groupes (L8.7.1-L8.7.7). L8.7.1-L8.7.3 correspondent respectivement au PRRSV classique, aux souches intermédiaires et au HP-PRRSV déclarés, tandis que L8.7.4-L8.7.7 sont définis comme des PRRSV de type HP.
L' analyse statistique a montré que les PRRSV de type HP prédominaient au sein de la lignée L8.7, avec L8.7.5 et L8.7Une analyse complète du génome entier a révélé que 72,15% des souches L8.7 présentaient des caractéristiques de type sauvage.
L'analyse du taux d'évolution a révélé que le taux d'évolution du L8.7.3-L8.7.7 lignées en Chine a diminué d'environ 4,1 fois depuis l'introduction du vaccin contre le VPH-PRRSV atténué (VHP-PRRSV).
Les tests de pathogénicité ont révélé que, par rapport au VPH-PRRSV (L8.7.3: HuN4), souches de type HP-PRRSV (L8.7.5: DLF; L8.7.6: DLW) maintiennent une virulence élevée tout en présentant une pathogénicité réduite chez les porcelets.
# Abstrait graphique
Résultats expérimentaux
# Classification du L8.7 PRRSV
Pour analyser les caractéristiques évolutives du PRRSV L8.7, cette étude a analysé un total de 2509 séquences ORF5: 2159 séquences de souches L8.7 ont été obtenues à partir de la base de données du NCBI,et 350 séquences ont été collectées dans notre laboratoire entre 2014 et 2023 (Figure 1 ((a))Comme le montre la figure, les souches L8.7 ont été divisées en sept groupes (L8.7.1 ¢8.7.7) (figures 1 ((a, b)); toutes les informations relatives à la séquence sont disponibles (figure 2).
Comme le montre la figure 1 (b), les souches de référence utilisées pour construire l'arbre phylogénétique provenaient de souches classiques connues et de souches L8.7 du PRRSV rapportées dans les études de pathogénicité.Les distances génétiques moyennes au sein et entre les groupes sont indiquées à la figure 1 (c)À l'exception de L8.7.2Dans le même temps, les différences génétiques entre les différents groupes ont varié de 4,3% à 10,4%.7.4-L.7Les souches.7 présentaient des modèles de mutation spécifiques d'acides aminés présentant des caractéristiques différentes et ont été définies comme HP-PRRSV-like.23% (56/2509) appartenaient à L8.7.1 (PRRSV de type CH-1a), 4,74% (119/2509) à L8.7.2 (PRRSV intermédiaire), de 11,48% (288/2509) à L8.7.3 (HP-PRRSV) et 81,54% (2046/2509) à ceux similaires à HP-PRRSV.
Figure 1 Arbre phylogénétique et analyse de l'identité nucléotidique des souches L8.7
(a) Arbre phylogénétique divisant les séquences L8.7 en sept groupes. (b) Arbre phylogénétique construit sur la base du gène ORF5 des isolats L8.7 du PRRSV et des souches de référence du PRRSV de chaque lignée.Les souches expérimentales utilisées dans cette étude sont marquées d'étoiles jaunes.. c) Distances génétiques au sein et entre les groupes de souches L8.7 (pourcentage de différences nucléotidiques).
Figure 2 Analyse comparative de la pathogénicité du PRRSV L8.7.1-L8.7.7
# Répartition mondiale du PRRSV L8.7
Cette étude a analysé de manière exhaustive les séquences L8.7 pour lesquelles des informations temporelles et géographiques sont connues.7.4 a été le plus répandu, couvrant huit des neuf pays où des souches L8.7 ont été trouvées (figure 3 ((a, b)).7.4; aucun autre groupe n'a été trouvé. L8.7.1, 8.7.3, 8.7.5, 8.7.6, et 8.7.7 souches ont été détectées respectivement dans deux, trois, quatre, quatre et deux pays (figure 3 ((a, b)).7Le nombre (2201/2509, 87,7%) et la diversité (7/7 groupes, 100%) des souches L8,7 du PRRSV en Chine ont été classés en première position (figure 3 (b)).
Figure 3 a) Répartition géographique des souches L8.7 dans différentes régions du monde.
Cette étude a analysé un total de 2 201 souches de PRRSV L8.7 en provenance de Chine.suivie de GuangxiLa prévalence des différents groupes de PRRSV en Chine présente une dynamique temporelle (figure 3e).avec des pics de prévalence distincts dans des groupes spécifiquesGroupe L8.7.1 et L8.7.2 ont été détectés à des taux très faibles et ont été rarement signalés depuis 2006.7.3, après avoir provoqué un foyer en 2006, est devenu dominant et a persisté de 2006 à 2009.
Figure 3 (c) Répartition géographique des souches L8.7 dans différentes régions de Chine.
Les PRRSV de type HP (L8.7.4 à 8.7.7) ont progressivement remplacé HP-PRRSV comme souches prédominantes en circulation en Chine (figure 3 (e)).7.4 a été signalée et surveillée pour la première fois en Chine en 2006 et représentait une proportion significative des souches L8.7 en Chine entre 2009 et 2011 (41,3%-79,6%).certains groupes ont connu des augmentations soudaines de la prévalence: par exemple, le groupe L8.7.5, qui est apparu pour la première fois en Chine en 2007 et circule en continu, a connu une augmentation significative de sa prévalence depuis 2011 (17,1% à 51,6%) (figure 3 (f)).7Cette catégorie (EU709835.1, SH02) a été identifiée pour la première fois en 2002.Initialement, son taux de détection était extrêmement faible (une seule souche), et il n'a pas été détecté entre 2003 et 2005.sa prévalence a diminué progressivement jusqu' en 2009Il est ensuite devenu la souche prédominante entre 2014 et 2023, représentant 21,5% à 47,1%.7.6 a été le plus fréquemment détecté en Chine (612/2201, 27,8%) et a eu la plus large distribution (20/21 provinces, 95,2%) (figure 3 ((d, f)).7.7 a été détecté pour la première fois en 2008, mais sa prévalence est restée faible jusqu'en 2011, après quoi elle a progressivement augmenté. Son taux de détection a rapidement augmenté pour atteindre 15,1% à 17,1% entre 2022 et 2023.
Figure 3 e) Répartition des souches L8.7 dans le temps sur la base des séquences ORF5.
Ces résultats révèlent qu'au cours de la dernière décennie, L8.7.5 et L8.7Les souches.6 étaient non seulement les plus abondantes mais aussi les plus largement distribuées en Chine.
# Relation entre les MLV HP-PRRSV et les HP-PRRSV
Pour étudier l'association entre les vaccins atténués par le VPH-PRRSV (JXA1-R, HuN4-F112, TJM-F92, GDr180) et les souches similaires au VPH-PRRSV, cette étude a analysé de manière exhaustive les souches du L8.7.4 ¢8.7.7 lignées basées sur l'identité nucléotidique, les signatures de suppression NSP2 et les modifications caractéristiques des acides aminés dans l'ensemble du génome (tableau 1).
Tableau 1 Analyse de l'association à l'échelle du génome entre le vaccin atenué contre le VPH-PRRSV et les souches de ce virus
Les résultats indiquent que la clé pour distinguer le PRRSV semblable au vaccin des souches HP-PRRSV ne peut pas être déterminée par l'identité des nucléotides de l'ensemble du génome ou les modifications caractéristiques des acides aminés,mais plutôt par la présence de suppressions supplémentaires de NSP2 (tableau 1)L'analyse statistique a révélé que 27,85% (22/79) des L8.7.6 souches de lignée ont été associées au vaccin.
Pathogénicité des souches HP-PRRSV et HP-PRRSV chez les porcelets
# Isolement et identification des souches dominantes du VPH-PRRSV
Élucider systématiquement la pathogénicité des souches dominantes de VPH-PRRSV (L8.7.5 et L8.7.6), cette étude a réussi à isoler le L8.7.5 souche de lignée DLF et L8.7Ces virus ont été isolés à partir de macrophages alvéolaires porcines (PAM) et de cellules Marc-145.L'analyse IFA a montré que l'expression de la protéine M du PRRSV a été observée dans les PAM et les cellules Marc-145 inoculées avec la souche (figure 4 ((a)))., indiquant que les souches DLF et DLW ont été séparées avec succès.
Figure 4 Isolement, culture, analyse de la recombinaison et alignement caractéristique des acides aminés NSP2 de la souche L8.7
a) Identification des souches DLW et DLF.L'analyse d'immunofluorescence (IFA) utilisant un anticorps monoclonal ciblant la protéine PRRSV M a révélé une réactivité spécifique dans les PAM et les cellules Marc-145 du groupe témoin., les groupes infectés par le DLF, le DLW et le HuN4. Les noyaux cellulaires ont été contre-colorés par le DAPI. Barre d'échelle = 300 μm. b) Analyse des événements de recombinaison dans le DLW.(c) Alignement des séquences d'acides aminés déduites des protéines NSP2 de la L8.7 souches.
# Caractéristiques génomiques de DLF et DLW
La longueur complète du génome de DLF (PQ178809) et de DLW (PQ178810) est de 15 324 et 15 323 nucléotides, respectivement (à l'exclusion de la queue poly ((A)).HuN4/DLW et DLF/DLW ont été 980,67%, 95,78% et 95,13% respectivement (voir tableau ci-dessous).
L' alignement des séquences de la protéine NSP2 a révélé que DLF et DLW présentaient des délétions discontinues de 30 acides aminés (1 + 29 acides aminés) aux positions 482 et 533-561 dans la protéine NSP2 de la souche CH-1a.Ce schéma de suppression est compatible avec celui de L8.7.3 (HP-PRRSV) (Figure 4 (c)). Pour déterminer si DLF et DLW ont été impliqués dans un événement de recombinaison,L'analyse utilisant le logiciel SimPlot et RDP4 a révélé que le DLW a connu un événement de recombinaison (sites de recombinaison s'étendant sur nt 3500-5657)Selon les deux études précédentes et les critères utilisés dans la présente étude pour distinguer les souches de vaccins des souches de type sauvage, la DLF et la DLW étaient des souches de type sauvage.
Signes cliniques des porcelets infectés
Les porcelets testés ont été pesés tous les 7 jours et des échantillons de sang ont été prélevés à 0, 3, 5, 7, 10, 14 et 21 jours par iode.
Les porcelets des groupes de défi HuN4 et DLF ont tous deux développé des symptômes cliniques évidents (toux, léthargie, indigestion et frissons) 2 jours après l'exposition.Les porcelets du groupe de défi DLW présentaient des signes cliniques typiques d'infection par le PRRSV 3 jours après l'exposition.Les porcelets du groupe de défi HuN4 ont maintenu une forte fièvre (≥ 40 °C).5°C) pendant 4 à 6 jours (figure 5 (b)) et a commencé à mourir 12 jours après l'exposition, avec un taux de survie de 20% à 21 jours après l'exposition (figure 5 (c)). Les porcelets du groupe de défi DLF ont commencé à mourir à 16 jours après l'exposition,avec un taux de survie de 60% à 21 jours après l'exposition (figure 5 (c))Malgré un taux de mortalité plus faible, la durée de la fièvre dans ce groupe était plus longue (7 à 15 jours) (figure 5b).avec une durée plus courte de la fièvre (1 à 8 jours) (figure 5 (b))Les porcelets du groupe témoin n'ont montré aucun symptôme clinique évident et ont survécu tout au long de l'étude (figure 5 (b, c)).
Figure 5 (b) Tendances de la température rectale après le défi avec DLF, DLW et HuN4.
Figure 5 (c) Taux de survie après défi avec DLF, DLW et HuN4.
Les poids des porcelets ont été mesurés à 0, 7, 14 et 21 dpi.L'analyse statistique a montré que le gain de poids quotidien moyen (GPA) des porcelets dans le groupe atteint de FDL était significativement inférieur à celui des porcelets non infectés de 1 à 7 dpi.Par rapport aux porcelets non infectés, l'ADG des porcelets du groupe soumis au défi HuN4 était significativement inférieure, allant de 8 à 14 dpi,tandis que l'ADG des porcelets du groupe confronté à la DLW était significativement inférieure de 8 à 14 et de 15 à 21 dpi (figure 5 ((d)).
Figure 5 (d) Changements moyens de la prise de poids quotidienne dans les groupes atteints de DLF, de DLW et de HuN4
Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart type (barres d'erreur). :p<0.05; :p<0.01; :p<0.001Les résultats sont publiés dans le journal officiel.0001; ns: non statistiquement significatif.
# Changements dynamiques dans les anticorps spécifiques au PRRSV
Des échantillons de sang ont été prélevés sur tous les porcs à 0, 3, 5, 7, 10, 14 et 21 dpi et des anticorps spécifiques à la protéine PRRSV N ont été détectés à l'aide d'un kit ELISA commercial.Les résultats ont montré que les anticorps spécifiques au PRRSV (ratio S/P ≥ 0.4) ont été détectées chez les porcelets des groupes soumis à la DLF et à la HuN4 à 10 dpi. À 14 dpi, les cinq porcelets du groupe soumis à la DLW étaient tous anticorps positifs (ratio S/P ≥ 0,4).Les ratios S/P dans les groupes contestés ont continué à augmenter jusqu'à la fin de l'expérience, alors qu'aucun anticorps spécifique au PRRSV n'a été détecté dans le groupe non contesté tout au long de l'expérience (figure 5 (e)).
# Évaluation de la virémie et de la charge virale dans différents tissus
La réaction en chaîne de la polymérase à transcription inverse quantitative (RT-qPCR) a été utilisée pour analyser la répartition de la charge virale dans les échantillons sériques et 10 tissus obtenus lors de l' autopsie à 0, 3, 5, 7, 10, 14, 15 et 16 jours.et 21 jours après le défiLes résultats ont montré que les taux de virémie dans les groupes soumis à la mise au défi ont commencé à augmenter 3 jours après la mise au défi,Le pic atteint 5 jours après le défi dans les groupes DLF et DLW et 7 jours après le défi dans le groupe HuN4 (figure 5 ((f))Des différences significatives dans les niveaux de virémie ont été observées entre les groupes soumis à la mise au défi de 7 à 10 jours après la mise au défi (figure 5 (f)).La virémie n' a pas été détectée dans le groupe témoin pendant toute la période de défiBien que des différences dans les charges virales dans les mêmes tissus aient été observées entre les groupes soumis à l'essai, ces différences n'étaient pas statistiquement significatives (figure 5 (g)).Le séquençage du gène ORF7 a confirmé que les échantillons contenaient la souche de défi originale.
Figure 5 (f) Changements dynamiques de la virémie induits par le défi DLF, DLW et HuN4
Figure 5 ((g) Analyse de la charge virale dans les différents tissus des groupes de défi DLF, DLW et HuN4
# Les lésions grosses et histopathologiques
Tous les porcelets infectés par HuN4 présentaient une atrophie thymatique sévère (figure 6a).considérant qu'aucune atrophie thymatique n'a été observée dans le groupe soumis à la DLW (figures 6b), c)).
Les cinq porcs du groupe soumis à HuN4 ont tous présenté une consolidation pulmonaire (figure 6 (e)), dont quatre avaient une hémorragie des ganglions lymphatiques mandibulaires (figure 6 (m)).trois avaient une consolidation pulmonaire (figure 6 (f)) et trois avaient une hémorragie des ganglions lymphatiques mandibulaires (figure 6 (n))Deux des cinq porcs du groupe soumis à la DLW présentaient une consolidation pulmonaire (figure 6 (g)) et deux porcs présentaient une légère hémorragie dans les ganglions lymphatiques mandibulaires (figure 6 (o)).Aucun changement pathologique significatif n'a été observé dans les tissus des organes des porcelets non infectés (figure 6 ((d)Les États membres
Les porcs soumis à HuN4 ont développé une pneumonie interstitielle sévère avec hémorragie (figure 6 (i)), caractérisée par un épaississement du septum alvéolaire et une infiltration de cellules mononucléaires.Les lésions microscopiques dans les poumons des groupes soumis à la DLF et à la DLW étaient similaires., mais différaient en gravité (figure 6 ((j,k)). Le groupe soumis à la DLF présentait une infiltration généralisée des cellules inflammatoires par des exsudats sérotiques, une nécrose et une exfoliation des cellules épithéliales alvéolaires,et une nécrose et une exfoliation significatives des cellules épithéliales des bronches (figure 6 ((j))Le groupe soumis à la DLW a montré une infiltration généralisée des cellules inflammatoires et un élargissement modéré des septes alvéolaires (figure 6 (k)).les groupes interrogés présentaient des degrés d'hémorragie médullaire dans les ganglions lymphatiques mandibulaires (figure 6 ((q-t)), alors qu'aucune lésion pathologique n'a été observée dans ces tissus chez les porcs témoins (figure 6 (i,t)).
Graphique 6 Les lésions pulmonaires grosses et histologiques dans les différents groupes de défi
Les porcelets testés avec HuN4 ou DLF ont présenté des degrés divers d'atrophie thymatique (a, b).Les groupes infectés par HuN4 et DLF ont développé une pneumonie interstitielle sévère avec consolidation pulmonaire (e, f) et une hémorragie des ganglions lymphatiques (i, j), tandis que le groupe infecté par le DLW présentait une pneumonie interstitielle plus légère avec consolidation pulmonaire (g) et une hémorragie des ganglions lymphatiques (o).Les tissus pulmonaires des groupes testés présentaient différents degrés de pneumonie interstitielle., caractérisée par une infiltration généralisée de cellules inflammatoires, une hyperplasie épithéliale alvéolaire et un élargissement des septes alvéolaires (i-k).des hémorragies médullaires ont été observées dans les ganglions lymphatiques mandibulaires des groupes soumis à la défiance (q-t), mais pas dans le groupe témoin (r).
Conclusion
La lignée L8.7 est la première lignée de PRRSV découverte en Chine et circule depuis plus de 25 ans.a provoqué une épidémie en Chine caractérisée par une forte fièvrePar la suite, cette souche s'est largement répandue en Chine et en Asie, subissant une mutation significative.Le VPH-PRRSV et ses variantes sont devenus les souches dominantes en Chine, mais les recherches sur les modèles épidémiologiques, l'évolution moléculaire et la pathogénicité du nouveau PRRSV L8.7 restent sous-développées.7 PRRSV et a mené une analyse exhaustive et systématique.
Les souches L8.7 ont été principalement axées sur leur pathogénicité, en particulier depuis l'épidémie de 2006 causée par le L8.7Par conséquent, cette étude a isolé et évalué la pathogénicité des souches les plus dominantes de ce virus (L8.7.5: DLF; L8.7.6Les résultats ont montré que, bien que la virulence des souches de type HP-PRRSV (DLF et DLW) ait été réduite par rapport à celle du HP-PRRSV (HuN4) (comme en témoigne l' augmentation de la survie des porcelets), la virulence des souches de type HP-PRRSV (DLF et DLW) a été réduite par rapport aux souches de type HP-PRRSV (HuN4) (comme en témoigne l' augmentation de la survie des porcelets).augmentation du poids quotidien, une diminution de la température et de la durée de la fièvre, et des différences dans l' atrophie thymatique), elles présentaient toujours une pathogénicité significative.La virulence dans cette étude a été corrélée à la charge virale sérique chez les porcelets testés 7 et 10 jours après l'inoculation.Par conséquent, le taux de survie, la température et la durée de la fièvre ont étél' atrophie thymatique sont des indicateurs importants de la pathogénicité du PRRSV chez les porcelets.
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