A síndrome respiratória e reprodutiva suína (PRRS), causada pelo vírus PRRS, é uma das doenças suínas mais devastadoras em todo o mundo. Nos últimos anos, múltiplas cepas da linhagem 1 têm sido amplamente prevalentes nos Estados Unidos, enquanto as cepas L1 RFLP 1-3-4 têm sido menos comumente relatadas na China.
Recentemente, pesquisadores da Universidade Agrícola de Tianjin e da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Tianjin publicaram em conjunto um estudo na Elsevier sobre uma variante recombinante do PRRSV com um padrão L1A/C RFLP 1–3–4 e analisaram seu genoma.
Introdução
A síndrome respiratória e reprodutiva suína (PRRS) é uma doença infecciosa grave causada pelo vírus PRRS. Ela é dividida em dois genótipos principais, os tipos europeu e norte-americano. Os sistemas de classificação RFLP e linhagem são comumente usados para analisar a diversidade genética do PRRSV-2. A linhagem 1 (L1) é prevalente nos Estados Unidos, com padrões RFLP comuns de 1-3-4, 1-4-4 e 1-7-4. Na China, a cepa 1-4-4 L1C predomina, mas sua proporção está diminuindo anualmente. Embora menos comumente relatada, a 1-3-4 tem características únicas de colonização intestinal e pode se tornar uma nova cepa dominante, representando uma séria ameaça para a indústria suína.
Resultados da Pesquisa
1. Isolamento do PRRSV L1 de leitões com diarreia em fazendas de suínos em Tianjin
De maio a junho de 2024, amostras de soro foram coletadas de leitões em amamentação em três fazendas de suínos em Tianjin após diarreia grave. As amostras de soro foram positivas para PRRSV L1 usando o isolamento em células PAM e negativas para vários vírus suínos comuns. Os isolados exibiram agregação e fragmentação típicas de células e foram purificados e nomeados TJ2401, TJ2402 e TJ2406. A análise por imunofluorescência revelou fluorescência verde, com valores TCID₅₀ de 1×10^6,34, 1×10^6,25 e 3×10^5,0/0,1 mL, respectivamente.
Figura 1. Isolamento e Identificação das Cepas PRRSV TJ2401, TJ2402 e TJ2406
(A-D) 48 horas após a infecção. (E-H) Marcado com anticorpo anti-proteína N. Barra de escala, 100 μm.
Conclusão: O vírus da síndrome respiratória e infecciosa suína (PRRSV) L1 foi isolado com sucesso de amostras de leitões com diarreia grave em Tianjin entre maio e junho de 2024. Sua alta virulência foi confirmada por ensaios de efeito citopático e imunofluorescência.
2. Características Genéticas e Análise de Subtipos das Cepas PRRSV L1 Isoladas
O sequenciamento do genoma completo dos isolados TJ2401, TJ2402 e TJ2406 revelou um padrão de deleção em NSP2 consistente com o subtipo L1 (semelhante a NADC30). A análise filogenética do genoma completo revelou uma relação próxima com o subgrupo L1.8. A análise RFLP do gene ORF5 atribuiu TJ2401 ao subtipo L1A e TJ2402 e TJ2406 ao subtipo L1C.
Figura 2. Sequências de NSP2 e árvore filogenética de TJ2401, TJ2402 e TJ2406
(A) O padrão de deleção de NSP2 de TJ2401, TJ2402 e TJ2406 é idêntico ao de NADC30.
(B) Os três isolados estão intimamente relacionados ao PRRSV L1.8 (semelhante a NADC30).
(C) TJ2401 pertence a L1A, enquanto TJ2402 e TJ2406 pertencem a L1C.
Conclusão: Todos os três isolados, TJ2401, TJ2402 e TJ2406, são PRRSV L1 (semelhante a NADC30), pertencentes aos subtipos L1A e L1C, respectivamente.
3. Características de Recombinação e Análise de Segmentos Gênicos Chave das Cepas PRRSV Isoladas
A análise de recombinação revelou que TJ2401, TJ2402 e TJ2406 exibiram características de recombinação. TJ2401 e TJ2402 compartilharam um segmento gênico comum (1-1970 nt) de vírus L8 (semelhantes a JXA1), potencialmente contribuindo para sua patogenicidade clínica semelhante. TJ2406, por outro lado, foi principalmente homólogo à cepa NADC30 e continha segmentos recombinantes restritos.
Figura 3. Árvore filogenética construída com base em genomas representativos de PRRSV
Conclusão: Todos os três isolados de PRRSV são cepas recombinantes. TJ2401 e TJ2402 compartilham o segmento L8, potencialmente resultando em patogenicidade clínica semelhante.
4. Análise dos Sinais Clínicos e Dinâmica Viral dos Três Isolados em Leitões
Leitões inoculados com TJ2401, TJ2402 ou TJ2406 desenvolveram temperatura corporal elevada, diarreia grave e aumento das pontuações dos sintomas clínicos, diminuição do ganho de peso diário e soroconversão no dia 11. As cargas virais no soro e no swab anal foram significativamente elevadas, enquanto o grupo controle não apresentou sintomas ou testes virais positivos.
Figura 4. Indicadores clínicos e resultados de testes virológicos e imunológicos em leitões
(A) Leitões inoculados com TJ2401, TJ2402 ou TJ2406 apresentaram temperaturas corporais elevadas.
(B) O ganho de peso diário dos leitões foi significativamente reduzido.
(C) No dia 11 pós-infecção, os leitões atingiram a soroconversão de anticorpos PRRS (limiar 0,4).
(D) A carga viral no soro aumentou 5 dias após a infecção e atingiu o pico no dia 11.
(E) A carga viral em swabs anais foi consistente com a carga viral no soro.
(F) O vírus estava presente em múltiplos tecidos, mais proeminentemente no intestino.
Conclusão: TJ2401, TJ2402 e TJ2406 induziram todos sinais clínicos significativos e infecção viral em leitões, enquanto nenhuma anormalidade foi observada no grupo controle.
5. Análise Comparativa dos Isolados de PRRSV na Patologia Pulmonar e Intestinal em Leitões
Leitões em todos os três grupos foram eutanasiados humanamente no dia 21 pós-infecção para necropsia. Os resultados mostraram que leitões infectados com TJ2401, TJ2402 ou TJ2406 desenvolveram todos pneumonia intersticial, consolidação e hemorragia pulmonar, e as pontuações das lesões foram significativamente maiores do que as do grupo não infectado. Os grupos de infecção por TJ2401 e TJ2402 também mostraram afinamento da parede intestinal, conteúdo intestinal aquoso e aumento dos gânglios linfáticos mesentéricos, enquanto o grupo TJ2406 não apresentou lesões intestinais óbvias. O exame microscópico mostrou que os septos alveolares de leitões infectados com as três cepas virais estavam espessados e as pontuações das lesões microscópicas pulmonares foram aumentadas. Em termos de patologia intestinal, os grupos TJ2401 e TJ2402 mostraram descamação epitelial intestinal e infiltração linfocítica, enquanto o grupo TJ2406 e o grupo controle não mostraram lesões óbvias.
Figura 4. Danos histológicos macroscópicos e microscópicos em amostras pulmonares e intestinais.
(A) A infecção por TJ2401, TJ2402 e TJ2406 resultou em lesões pulmonares significativas e infiltração proeminente de células inflamatórias.
(B) TJ2401 e TJ2402 causaram lesões pulmonares e intestinais, enquanto nenhuma lesão significativa foi observada no grupo não infectado.
Conclusão: TJ2401 e TJ2402 causaram lesões pulmonares e intestinais significativas em leitões, enquanto TJ2406 causou principalmente lesões pulmonares sem anormalidades intestinais significativas.
Resumo
Este estudo descobriu que L1A TJ2401 e L1C TJ2402 causaram infecção intestinal grave, enquanto TJ2406 causou apenas pneumonia intersticial. Isso sugere que a patogenicidade do PRRSV semelhante a NADC30 é complexa e que as vacinas são limitadas em sua eficácia. É necessária uma vigilância reforçada e um ajuste oportuno das estratégias de controle.
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