El síndrome reproductivo y respiratorio porcino (SRRE), causado por el virus SRRE, es una de las enfermedades porcinas más devastadoras del mundo.las cepas múltiples del linaje 1 han sido muy frecuentes en los Estados Unidos, mientras que las cepas L1 RFLP 1-3-4 se han notificado con menos frecuencia en China.
Recientemente, researchers from Tianjin Agricultural University and Tianjin University of Traditional Chinese Medicine jointly published a study in Elsevier on a recombinant PRRSV variant with an L1A/C RFLP 1–3–4 pattern and analyzed its genome.
Introducción
El síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS) es una enfermedad infecciosa grave causada por el virus PRRS. Se divide en dos genotipos principales, el europeo y el norteamericano.Los sistemas de clasificación por linaje y RFLP se utilizan comúnmente para analizar la diversidad genética del PRRSV-2El linaje 1 (L1) es prevalente en los Estados Unidos, con patrones comunes de RFLP de 1-3-4, 1-4-4 y 1-7-4.Aunque menos frecuentemente se ha informado, 1-3-4 tiene características únicas de colonización intestinal y puede convertirse en una nueva cepa dominante, lo que supone una grave amenaza para la industria porcina.
Resultados de la investigación
1Aislamiento del L1 PRRSV de lechones con diarrea en granjas de cerdos de Tianjin
De mayo a junio de 2024, se recogieron muestras de suero de lechones lactantes en tres granjas porcinas de Tianjin después de una diarrea grave.Las muestras de suero fueron positivas para el PRRSV L1 utilizando aislamiento de células PAM y negativas para varios virus porcinos comunesLos aislados mostraron agregación y fragmentación celular típica y fueron purificados y nombrados TJ2401, TJ2402 y TJ2406.con valores de TCID50 de 1 × 10 ^ 6.34, 1 x 10 ^ 6.25, y 3×10^5,0/0,1 mL, respectivamente.
Figura 1. Aislamiento e identificación de las cepas de PRRSV TJ2401, TJ2402 y TJ2406
48 horas después de la infección, etiquetado con anticuerpos de proteína anti-N, barra de escala, 100 μm.
Conclusión: El virus del síndrome reproductivo e infeccioso porcino (PRRSV) L1 se aisló con éxito de muestras de lechones lactantes con diarrea grave en Tianjin entre mayo y junio de 2024.Su alta virulencia fue confirmada por los ensayos de efecto citopático e inmunofluorescencia..
2Características genéticas y análisis de subtipos de cepas PRRSV L1 aisladas
La secuenciación del genoma de longitud completa de los aislados TJ2401, TJ2402 y TJ2406 reveló un patrón de eliminación en NSP2 consistente con el subtipo L1 (semejante a NADC30).El análisis filogenético de todo el genoma reveló una estrecha relación con la L1.8 subgrupo. El análisis RFLP del gen ORF5 asignó TJ2401 al subtipo L1A y TJ2402 y TJ2406 al subtipo L1C.
Figura 2. Secuencias NSP2 y árbol filogenético de TJ2401, TJ2402 y TJ2406
(A) El patrón de eliminación de NSP2 de TJ2401, TJ2402 y TJ2406 es idéntico al de NADC30.
(B) Los tres aislados están estrechamente relacionados con el PRRSV L1.8 (similar al NADC30).
(C) TJ2401 pertenece a L1A, mientras que TJ2402 y TJ2406 pertenecen a L1C.
Conclusión: los tres aislados, TJ2401, TJ2402 y TJ2406, son PRRSV L1 (similares a la NADC30) pertenecientes a los subtipos L1A y L1C, respectivamente.
3Características de recombinación y análisis de segmentos genéticos clave de cepas aisladas de PRRSV
El análisis de recombinación reveló que TJ2401, TJ2402 y TJ2406 exhibieron características de recombinación.potencialmente contribuyen a su patogenicidad clínica similar. TJ2406, por otro lado, era principalmente homólogo a la cepa NADC30 y contenía segmentos recombinantes restringidos.
Figura 3. Árbol filogenético construido sobre la base de genomas representativos del PRRSV
Conclusión: Los tres aislados de PRRSV son cepas recombinantes. TJ2401 y TJ2402 comparten el segmento L8, lo que podría resultar en una patogenicidad clínica similar.
4Análisis de los signos clínicos y dinámica viral de los tres aislados en lechones
Los lechones inoculados con TJ2401, TJ2402 o TJ2406 desarrollaron temperatura corporal elevada, diarrea severa y aumento de los síntomas clínicos, disminución del aumento de peso diario,y la seroconversión en el día 11Las cargas virales en el suero y el hisopo anal fueron significativamente elevadas, mientras que el grupo control no mostró síntomas ni pruebas virales positivas.
Figura 4. Indicadores clínicos y resultados de las pruebas virológicas e inmunológicas en lechones
(A) Los lechones inoculados con TJ2401, TJ2402 o TJ2406 tenían temperaturas corporales elevadas.
(B) El aumento de peso diario de los lechones se redujo significativamente.
(C) Al día 11 después de la infección, los lechones lograron la seroconversión de los anticuerpos PRRS (umbral 0,4).
(D) La carga viral en suero aumentó 5 días después de la infección y alcanzó su punto máximo el día 11.
(E) La carga viral en los hisopos anales fue consistente con la carga viral en suero.
(F) El virus estaba presente en múltiples tejidos, más prominentemente en el intestino.
Conclusión: TJ2401, TJ2402 y TJ2406 indujeron signos clínicos significativos e infección viral en lechones, mientras que no se observaron anomalías en el grupo control.
5Análisis comparativo de los aislados de PRRSV en patología pulmonar e intestinal en lechones
Los cerdos de los tres grupos fueron sacrificados humanamente al día 21 después de la infección para la necropsia.o TJ2406 todas las neumonías intersticiales desarrolladas, la consolidación pulmonar y la hemorragia, y las puntuaciones de las lesiones fueron significativamente más altas que las del grupo no infectado.Los grupos de infección TJ2401 y TJ2402 también mostraron adelgazamiento de la pared intestinal., contenido intestinal acuoso y ganglios linfáticos mesentéricos agrandados, mientras que el grupo TJ2406 no mostró lesiones intestinales obvias.El examen microscópico mostró que el septo alveolar de los lechones infectados con las tres cepas del virus se engrosó y las lesiones pulmonares microscópicas aumentaron.En términos de patología intestinal, los grupos TJ2401 y TJ2402 mostraron descamación epitelial intestinal e infiltración linfocítica.Mientras que el grupo TJ2406 y el grupo control no mostraron lesiones obvias..
Figura 4. Daño histológico macroscópico y microscópico en muestras pulmonares e intestinales.
(A) La infección por TJ2401, TJ2402 y TJ2406 dio lugar a lesiones pulmonares significativas y una importante infiltración de células inflamatorias.
(B) TJ2401 y TJ2402 causaron lesiones pulmonares e intestinales, mientras que no se observaron lesiones significativas en el grupo no infectado.
Conclusión: TJ2401 y TJ2402 causaron lesiones pulmonares e intestinales significativas en lechones, mientras que TJ2406 causó principalmente lesiones pulmonares sin anomalías intestinales significativas.
Resumen de las actividades
Este estudio encontró que L1A TJ2401 y L1C TJ2402 causaron una infección intestinal grave, mientras que TJ2406 solo causó neumonía intersticial.Esto sugiere que la patogenicidad del PRRSV similar al NADC30 es compleja y que las vacunas tienen una eficacia limitada.Es necesario reforzar la vigilancia y ajustar oportunamente las estrategias de control.
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