ブログ について 韓国は食品廃棄物の安全のためにアフリカ豚インフルエンザPCRキットを9つ試験

アフリカ豚コレラ（ASF）の影が、前例のない速さで世界の豚肉産業に広がりつつあります。アフリカ豚コレラウイルス（ASFV）によって引き起こされるこの非常に伝染性の高い病気は、豚の個体群を壊滅させるだけでなく、致死率がほぼ100％で急速に伝染するため、世界中の畜産部門に甚大な経済的損失をもたらします。ASFVは、複雑なエンベロープを持つ二本鎖DNAウイルスであり、高度なゲノム配列解析により6つの主要な遺伝子型に分類されており、比較的保存されているp72遺伝子が識別のための重要なマーカーとして機能しています。

ASFの影響は農場をはるかに超えて広がっています。研究によると、ASFVは加熱不十分または汚染された豚肉製品、特に飼料としてリサイクルされた食品廃棄物を通じて拡散する可能性があり、二次感染の持続的なリスクをもたらします。これに対応するため、韓国のような国々は、動物用飼料への食品廃棄物の使用禁止を含む厳格な措置を実施しています。したがって、食品廃棄物ストリームにおけるASFVの早期監視が重要な優先事項となっています。

特定の遺伝子欠失を標的とした実験的なワクチン候補が存在するにもかかわらず、商業的に実行可能なASFワクチンは存在しません。この不在は、ASF制御戦略の基盤として、高感度かつ高特異的な診断ツールの重要性を強調しています。

世界動物保健機関（WOAH）は、疑わしいASFVサンプルのハイスループットスクリーニングのために、3つのPCRベースの診断方法（従来の1つとリアルタイムPCRアッセイ2つ）を推奨しています。WOAHの基準が発表されて以来、ELISA、LAMP、マルチプレックスPCR、超高感度リアルタイムPCRなどの高度な技術が登場しています。しかし、その多くは研究室にとどまっており、特に市販キットの実際の性能は、エンドユーザーと規制当局による厳格な評価が必要です。

このギャップに対処するため、研究者たちは韓国でMAFRA承認済みの9つのASFVリアルタイムPCRキットを体系的に評価しました。20の食品廃棄物サンプルと合成ASFV陽性コントロールを使用して、特異性、感度、反応あたりのコスト、処理時間といった重要な性能指標を評価しました。最適な診断ツールの選択をガイドするために、結果は以前のデータと比較してベンチマークされました。

主な方法論の詳細：

• サンプル選択： 2020年から2022年の間に収集された5,581のASFV陰性検体からランダムに選択された20の食品廃棄物サンプル。
• 安全プロトコル： 生物学的ハザードリスクを排除するために、合成ASFV配列（HBNH-2019株）と参照ウイルス（PCV2、PPV、PrV）が使用されました。
• DNA抽出： 1gサンプルの均質化後、QIAamp® DNA miniキットを使用して実行されました。

厳格な条件下（1000 RFU、キット固有のCq閾値）では、ほとんどのキットが1 fg/μL未満の濃度でASFVを検出しました。Median Diagnostics、Ahram Biosystems、MiCo Biosystemsの3つのキットは、100 ag/μLで例外的な感度を達成しました。統一されたCq閾値（<35）を適用すると、4つのキットが1 fg/μLで検出を維持し、5つのキットは、RFU（2500）が上昇した条件下で10 fg/μLでまだ機能していました。

注目すべき発見：

• コスト効率： 6つのキットは、反応あたりのコストを10,000 KRW未満に維持しました。
• 速度： 3つのキット（Ahram Biosystems、MiCo BioMed、Kogene Biotech）は、50〜70分で分析を完了しました。これはWOAHプロトコルよりも1時間速いです。
• 検証： 上位3つのパフォーマンスキット（VDx®、Palm PCR™、PowerChek™）は、複数のアナリスト間で一貫した結果を示しました。

韓国におけるMAFRA承認済みASFVキットのこの最初の包括的な評価は、食品廃棄物監視のための最適なツールを特定します。選択されたキットは、高感度（100 ag/μL）、手頃な価格（<10,000 KRW/反応）、および迅速な処理（<70分）を組み合わせており、これらは大規模監視プログラムにとって重要な属性です。

研究の制約には、バイオセーフティ上の懸念から感染動物からのフィールドサンプルの不在、および食品廃棄物マトリックスに限定された焦点が含まれます。今後の研究では、アウトブレイクからの臨床検体を含む、さまざまなサンプルタイプでこれらの発見を検証する必要があります。