บล็อก เกี่ยวกับ เกาหลีใต้ทดสอบ 9 ชุด PCR โรคหมูแอฟริกัน เพื่อความปลอดภัยของขยะอาหาร

เงาของโรคอหิวาต์แอฟริกาในสุกร (ASF) กำลังแพร่กระจายไปทั่วอุตสาหกรรมสุกรทั่วโลกในอัตราที่ไม่เคยมีมาก่อน โรคที่ติดต่อได้ง่ายนี้เกิดจากเชื้อไวรัสอหิวาต์แอฟริกาในสุกร (ASFV) ไม่เพียงแต่ทำลายล้างประชากรสุกรเท่านั้น แต่ยังสร้างความสูญเสียทางเศรษฐกิจอย่างมหาศาลให้กับภาคปศุสัตว์ทั่วโลก เนื่องจากมีอัตราการตายเกือบ 100% และการแพร่กระจายอย่างรวดเร็ว ASFV ซึ่งเป็นไวรัสดีเอ็นเอสายคู่ที่มีเปลือกหุ้มที่ซับซ้อน ได้ถูกจัดประเภทออกเป็น 6 จีโนไทป์หลักผ่านการจัดลำดับจีโนมขั้นสูง โดยยีน p72 ที่ค่อนข้างคงที่ทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายสำคัญในการจำแนกความแตกต่าง

ผลกระทบของ ASF ขยายวงกว้างเกินกว่าฟาร์ม การวิจัยบ่งชี้ว่า ASFV สามารถแพร่กระจายผ่านผลิตภัณฑ์สุกรที่ปรุงไม่สุกหรือปนเปื้อน โดยเฉพาะอย่างยิ่งผ่านเศษอาหารที่นำกลับมาใช้เป็นอาหารสัตว์ ซึ่งก่อให้เกิดความเสี่ยงของการติดเชื้อทุติยภูมิอย่างต่อเนื่อง เพื่อตอบสนองต่อสิ่งนี้ ประเทศต่างๆ เช่น เกาหลีใต้ ได้ใช้มาตรการที่เข้มงวด รวมถึงการห้ามใช้เศษอาหารในอาหารสัตว์ ดังนั้น การเฝ้าระวัง ASFV ในกระแสเศษอาหารตั้งแต่เนิ่นๆ จึงกลายเป็นสิ่งสำคัญอันดับต้นๆ

แม้จะมีวัคซีนทดลองที่มุ่งเป้าไปที่การลบยีนเฉพาะ แต่ก็ยังไม่มีวัคซีน ASF ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ การไม่มีวัคซีนนี้เน้นย้ำถึงความสำคัญของเครื่องมือวินิจฉัยที่มีความไวและความจำเพาะสูง ซึ่งเป็นรากฐานของกลยุทธ์การควบคุม ASF

องค์การอนามัยสัตว์โลก (WOAH) แนะนำวิธีการวินิจฉัยด้วย PCR สามวิธี ได้แก่ วิธีธรรมดาหนึ่งวิธีและวิธีเรียลไทม์ PCR สองวิธี สำหรับการคัดกรองตัวอย่าง ASFV ที่สงสัยในปริมาณมาก นับตั้งแต่มีการเผยแพร่มาตรฐาน WOAH เทคนิคขั้นสูง เช่น ELISA, LAMP, multiplex PCR และ ultra-sensitive real-time PCR ได้เกิดขึ้น อย่างไรก็ตาม หลายวิธีเหล่านี้ยังคงจำกัดอยู่ในการวิจัย โดยประสิทธิภาพในโลกแห่งความเป็นจริง โดยเฉพาะชุดทดสอบเชิงพาณิชย์ จำเป็นต้องมีการประเมินอย่างเข้มงวดโดยผู้ใช้ปลายทางและหน่วยงานกำกับดูแล

เพื่อแก้ไขปัญหานี้ นักวิจัยได้ประเมินชุดทดสอบ ASFV real-time PCR ที่ได้รับการอนุมัติจาก MAFRA จำนวน 9 ชุดในเกาหลีใต้อย่างเป็นระบบ การศึกษาได้ประเมินตัวชี้วัดประสิทธิภาพที่สำคัญ ได้แก่ ความจำเพาะ ความไว ต้นทุนต่อปฏิกิริยา และเวลาในการประมวลผล โดยใช้ตัวอย่างเศษอาหาร 20 ตัวอย่างและสารควบคุมสังเคราะห์ที่เป็นบวก ASFV ผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบกับข้อมูลก่อนหน้าเพื่อเป็นแนวทางในการเลือกเครื่องมือวินิจฉัยที่เหมาะสมที่สุด

รายละเอียดระเบียบวิธีที่สำคัญ:

• การเลือกตัวอย่าง: ตัวอย่างเศษอาหาร 20 ตัวอย่างที่สุ่มเลือกจากตัวอย่างที่ให้ผลลบ ASFV จำนวน 5,581 ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมระหว่างปี 2020–2022
• มาตรการความปลอดภัย: ใช้ลำดับ ASFV สังเคราะห์ (สายพันธุ์ HBNH-2019) และไวรัสอ้างอิง (PCV2, PPV, PrV) เพื่อขจัดความเสี่ยงทางชีวภาพ
• การสกัดดีเอ็นเอ: ดำเนินการโดยใช้ชุด QIAamp® DNA mini หลังจากทำให้ตัวอย่าง 1 กรัมเป็นเนื้อเดียวกัน

ภายใต้เงื่อนไขที่เข้มงวด (1000 RFU, เกณฑ์ Cq เฉพาะของชุดทดสอบ) ชุดทดสอบส่วนใหญ่ตรวจพบ ASFV ที่ความเข้มข้นต่ำกว่า 1 fg/µL ชุดทดสอบสามชุดจาก Median Diagnostics, Ahram Biosystems และ MiCo Biosystems มีความไวเป็นพิเศษที่ 100 ag/µL เมื่อใช้เกณฑ์ Cq ที่เป็นเอกภาพ (<35) ชุดทดสอบสี่ชุดยังคงตรวจจับได้ที่ 1 fg/µL โดยชุดทดสอบห้าชุดยังคงทำงานได้ที่ 10 fg/µL ภายใต้สภาวะ RFU ที่สูงขึ้น (2500)

ผลการค้นพบที่น่าสังเกต:

• ความคุ้มค่า: ชุดทดสอบหกชุดมีต้นทุนต่ำกว่า 10,000 KRW ต่อปฏิกิริยา
• ความเร็ว: ชุดทดสอบสามชุด (Ahram Biosystems, MiCo BioMed, Kogene Biotech) วิเคราะห์เสร็จสิ้นใน 50–70 นาที เร็วกว่าโปรโตคอล WOAH 1 ชั่วโมง
• การตรวจสอบความถูกต้อง: ชุดทดสอบสามชุดที่ให้ประสิทธิภาพสูงสุด (VDx®, Palm PCR™, PowerChek™) แสดงผลลัพธ์ที่สอดคล้องกันในผู้ดำเนินการหลายราย

การประเมินชุดทดสอบ ASFV ที่ได้รับการอนุมัติจาก MAFRA ในเกาหลีใต้อย่างครอบคลุมเป็นครั้งแรกนี้ ระบุเครื่องมือที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเฝ้าระวังเศษอาหาร ชุดทดสอบที่เลือกผสมผสานความไวสูง (100 ag/µL) ราคาไม่แพง (<10,000 KRW/ปฏิกิริยา) และการประมวลผลที่รวดเร็ว (<70 นาที) ซึ่งเป็นคุณลักษณะสำคัญสำหรับโปรแกรมการตรวจสอบขนาดใหญ่

ข้อจำกัดของการศึกษา ได้แก่ การไม่มีตัวอย่างภาคสนามจากสัตว์ที่ติดเชื้อเนื่องจากข้อกังวลด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ และการมุ่งเน้นเฉพาะเมทริกซ์เศษอาหาร การวิจัยในอนาคตควรตรวจสอบความถูกต้องของผลการค้นพบเหล่านี้ด้วยตัวอย่างประเภทต่างๆ รวมถึงตัวอย่างทางคลินิกจากการระบาด