وبلاگ در باره کره جنوبی ۹ کیت PCR تب خوکی آفریقایی را برای ایمنی زباله‌های غذایی آزمایش کرد

سایه تب خوک آفریقا (ASF) در حال گسترش در سراسر صنعت گوشت خوک جهانی با سرعت بی سابقه است. این بیماری بسیار عفونی که توسط ویروس تب خوک آفریقا (ASFV) ایجاد می شود،نه تنها جمعیت خوک ها را نابود می کند بلکه به دلیل مرگ و میر نزدیک به 100٪ و انتقال سریع آن، خسارات اقتصادی زیادی را به بخش های دامداری در سراسر جهان وارد می کند.. ASFV، یک ویروس پیچیده DNA دو رشته ای پیچیده به شش ژنوتایپ اصلی از طریق توالی ژنومی پیشرفته طبقه بندی شده است،با ژن p72 نسبتا حفظ شده که به عنوان یک نشانگر کلیدی برای تمایز عمل می کند.

اثرات ASF بسیار فراتر از مزارع است. تحقیقات نشان می دهد که ASFV می تواند از طریق محصولات گوشت خوک کم پخته شده یا آلوده، به ویژه از طریق زباله های غذایی بازیافت شده به عنوان مواد غذایی گسترش یابد.خطر مداوم عفونت های ثانویه را ایجاد می کنددر پاسخ، کشورهایی مانند کره جنوبی اقدامات سختگیرانه ای را اجرا کرده اند، از جمله ممنوعیت استفاده از زباله های غذایی در مواد غذایی حیوانات.بنابراین نظارت زودهنگام ASFV در جریان های زباله های غذایی به یک اولویت حیاتی تبدیل شده است.

با وجود واکسن های آزمایشی که حذف ژن های خاص را هدف قرار می دهند، هیچ واکسن تجاری ASF وجود ندارد.این عدم وجود اهمیت ابزارهای تشخیصی بسیار حساس و خاص را به عنوان پایه استراتژی های کنترل ASF نشان می دهد..

سازمان جهانی بهداشت حیوانات (WOAH) سه روش تشخیصی مبتنی بر PCR را توصیه می کند: یک آزمایش PCR معمولی و دو آزمایش PCR در زمان واقعی برای غربالگری با سرعت بالا از نمونه های مشکوک ASFV.از زمان انتشار استانداردهای WOAH، تکنیک های پیشرفته ای مانند ELISA، LAMP، PCR چندگانه و PCR بسیار حساس در زمان واقعی ظهور کرده اند.با عملکرد واقعی آنها، به ویژه کیت های تجاری، نیاز به ارزیابی دقیق توسط کاربران نهایی و تنظیم کنندگان.

برای برطرف کردن این شکاف، محققان به طور سیستماتیک ۹ کیت PCR در زمان واقعی ASFV مورد تایید MAFRA در کره جنوبی را ارزیابی کردند. با استفاده از ۲۰ نمونه زباله غذایی و کنترل های مصنوعی ASFV مثبت،در این مطالعه معیارهای عملکردی حیاتی ارزیابی شد.: خاصیت، حساسیت، هزینه در هر واکنش و زمان پردازش. نتایج با داده های قبلی مقایسه شد تا انتخاب ابزارهای تشخیصی بهینه را هدایت کند.

جزئیات کلیدی روش شناسی:

• انتخاب نمونه:20 نمونه از زباله های غذایی که به صورت تصادفی از 5،581 نمونه منفی ASFV که بین سال های 2020 تا 2022 جمع آوری شده اند، انتخاب شده اند.
• پروتکل های ایمنی:برای از بین بردن خطرات بیولوژیکی، از توالی های مصنوعی ASFV (شعب HBNH-2019) و ویروس های مرجع (PCV2، PPV، PrV) استفاده شد.
• استخراج DNA:با استفاده از کیت های کوچک DNA QIAamp® پس از همگن سازی نمونه های 1g انجام می شود.

در شرایط سختگیرانه (۱۰۰۰ RFU، آستانه های Cq خاص کیت) ، اکثر کیت ها ASFV را در غلظت های کمتر از ۱ fg/μL تشخیص دادند.و MiCo Biosystems حساسیت استثنایی را در 100 ag/μL به دست آوردند.هنگامی که یک آستانه Cq یکپارچه (<35) اعمال می شود، چهار کیت تشخیص را در 1 fg / μl حفظ می کنند و پنج مورد هنوز در 10 fg / μl در شرایط RFU (2500) بالا کار می کنند.

یافته های قابل توجه:

• بهره وری هزینه:شش کیت هزینه های زیر 10،000 KRW در هر واکنش را حفظ کردند.
• سرعت:سه کیت (Ahram Biosystems، MiCo BioMed، Kogene Biotech) تجزیه و تحلیل را در ۵۰/۷۰ دقیقه/۱ ساعت سریعتر از پروتکل های WOAH تکمیل کردند.
• اعتباربخشی:سه کیت با عملکرد بالا (VDx®، Palm PCRTM، PowerChekTM) نتایج سازگار را در چندین تحلیلگر نشان دادند.

این اولین ارزیابی جامع کیت های ASFV تایید شده توسط MAFRA در کره جنوبی، ابزار بهینه برای نظارت بر زباله های غذایی را شناسایی می کند. کیت های انتخاب شده دارای حساسیت بالا (100 ag/μL) ،مقرون به صرفه بودن (<10)۰۷۰ دقیقه) ۰ ویژگی های حیاتی برای برنامه های نظارت در مقیاس بزرگ.

محدودیت های مطالعه شامل عدم وجود نمونه های زمینی از حیوانات آلوده به دلیل نگرانی های ایمنی زیستی و تمرکز انحصاری بر ماتریس های ضایعات غذایی است.تحقیقات آینده باید این یافته ها را با انواع نمونه های مختلف تأیید کنداز جمله نمونه های بالینی از شیوع بیماری.