কোম্পানির খবর সাম্প্রতিক গবেষণা বিনিময় | হেনান প্রদেশের শূকর খামারে বর্ধিত ক্ষতিকারক GIII গেটাভাইরাস প্রকারভেদের বিস্তার

গেটা ভাইরাস (জিইটিভি) একটি উদ্ভবশীল মশার দ্বারা প্রেরিত ভাইরাস যা বিস্তৃত প্রাণী এবং মানুষের জন্য হুমকি। জুলাই থেকে সেপ্টেম্বর 2024,হেনান প্রদেশের বিভিন্ন প্রজাতির গরু খামারে জিইটিভি সংক্রমণ ঘনীভূত হয়েছে।, যা সাম্প্রতিক বছরগুলোতে চীনের মূল ভূখণ্ডে সর্বাধিক বিস্তৃত এবং ঘনীভূত প্রাদুর্ভাবের একটি।

২০২৪ সালের জুলাই থেকে সেপ্টেম্বর পর্যন্ত, হেনান প্রদেশের একাধিক শূকর খামারে গেটা ভাইরাস (জিইটিভি) এর ঘনীভূত প্রাদুর্ভাব ঘটেছে। ৩১টি শূকর খামার থেকে ২৭টি স্ট্রেন বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল,এর মধ্যে ২২ টি ফাইলোজেনেটিক গাছে একটি অনন্য ক্লাস্টার গঠন করেছিল এবং এনএসপি 3 এবং ই 2 প্রোটিনে অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন প্রদর্শন করেছিল.

পরীক্ষা-নিরীক্ষা থেকে দেখা গেছে যে, এই জিআইআই ভেরিয়েন্টটি 100% মৃত্যুর হার সহ শুয়োরের বাচ্চাদের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত রোগজনিত বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে এবং ইঁদুরগুলিতেও উচ্চ রোগজনিত বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে।এই গবেষণাটি হেনাংয়ের শূকর খামারে একটি বড় আকারের জিইটিভি প্রাদুর্ভাবের প্রথম পদ্ধতিগত তদন্ত, যা GIII ভেরিয়েন্টের উন্নত ভাইরুল্যান্স এবং আণবিক বৈশিষ্ট্যগুলি প্রকাশ করে।

পরিচিতি

গেটা ভাইরাস (জিইটিভি) একটি একক-শ্রেণীর, ইতিবাচক-সংবেদনশীল আরএনএ ভাইরাস যা বিস্তৃত প্রাণীকে সংক্রামিত করে এবং এমনকি মানুষের জন্য হুমকি হতে পারে। জুলাই থেকে সেপ্টেম্বর 2024,হেনান প্রদেশের বাণিজ্যিক গরু খামারে একটি ঘনীভূত GETV প্রাদুর্ভাব ঘটেছে, যার ফলে ২৭ টি স্ট্রেনকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। জিআইআইআই ভেরিয়েন্টটি প্রাধান্যপ্রাপ্ত রোগজীবাণু স্ট্রেন ছিল, যা পূর্ববর্তী স্ট্রেনগুলির তুলনায় বৃদ্ধি পেয়েছে।এই গবেষণাটি জিইটিভি এর আণবিক মহামারীবিদ্যা এবং রোগজীবাণুবিদ্যা বোঝার জন্য একটি রেফারেন্স প্রদান করে.

উপকরণ ও পদ্ধতি

এই গবেষণায় BHK-21 এবং PK-15 কোষ ব্যবহার করা হয়েছিল গরুর GETV বিচ্ছিন্ন HNJZ-S1 চাষ করার জন্য। ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড বের করা হয়েছিল হেনান এবং শানসির সন্দেহজনক সংক্রামিত গরুর খামার থেকে, এবং সিডিএনএ সংশ্লেষিত করা হয়েছিল।ভাইরাস সনাক্তকরণ পিসিআর/আরটি-পিসিআর দ্বারা করা হয়েছিল. পজিটিভ নমুনা বিচ্ছিন্ন, বিশুদ্ধ, এবং কোষে চিহ্নিত করা হয়। ভাইরাল বৃদ্ধি বৈশিষ্ট্য এবং প্লেক গঠন নির্ধারিত হয়। E2 জিন এবং সমগ্র জিনোম প্রসারিত, ক্লোন,এবং ক্রম সমন্বয় এবং phylogenetic বিশ্লেষণের জন্য ক্রমযুক্ত.

প্রাণী পরীক্ষায়, জিইটিভি-নেগেটিভ শুয়োরের বাচ্চা এবং দুই দিনের বয়সী এসপিএফ স্তন্যদানকারী ইঁদুরকে ভাইরাসটি পেশীভিত্তিক বা তলদেশীয়ভাবে ইনজেকশন করা হয়েছিল।এবং রক্ত এবং টিস্যুতে ভাইরাল লোড পরিমাপ করা হয়. টিস্যু নমুনা থেকে ভাইরাল আরএনএ নিষ্কাশন করা হয়েছিল, সিডিএনএ সংশ্লেষিত করা হয়েছিল, এবং তারপরে এসওয়াইবিআর গ্রিন কিউপিসিআর দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। ডেটা গড় ± এসডি হিসাবে উপস্থাপিত হয় এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 9 ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়।0.

গবেষণার ফলাফল

1. জিইটিভি নমুনা সংগ্রহ এবং ভাইরাস সনাক্তকরণ

২০২৪ সালের জুলাই মাসে হেনান প্রদেশের ঝুমাডিয়ানের একটি শূকর খামারে ৩ থেকে ১০ দিন বয়সী শুয়োরের বাচ্চাদের মধ্যে উচ্চ মৃত্যুর প্রাদুর্ভাব ঘটেছিল, যার সংক্রমণের হার ৩০% এবং মৃত্যুর হার ৮০%।পরীক্ষাগার থেকে নিশ্চিত করা হয়েছে যে, এই প্রাদুর্ভাবের কারণ একটি একক GETV স্ট্রেনপরবর্তীতে, হেনান প্রদেশের বিভিন্ন গরু খামারে জিইটিভি সংক্রমণের আশঙ্কা দেখা দেয়।ক্লিনিকাল নমুনা সংগ্রহে ১৮টি প্রিফেকচার-স্তরের শহরগুলির মধ্যে ১২টি এবং ১৫৭টি কাউন্টির মধ্যে ২১টি শহরে প্রাদুর্ভাব দেখা গেছে (চিত্র ১)) ।. জুলাই থেকে সেপ্টেম্বর পর্যন্ত, যথাক্রমে ১, ১৫ এবং ১৬ টি প্রাদুর্ভাব ঘটেছে। শুয়োরের বাচ্চাদের মধ্যে প্রধান লক্ষণগুলি ছিল গুরুতর ডায়রিয়া, অ্যাটাক্সিয়া এবং পিছনের অঙ্গ দুর্বলতা।ময়নাতদন্তের পর দেখা গেছে, লিম্ফ্যাডেনোপ্যাথিতে ফুসকুড়ি ও রক্তপাত হয়েছে।, ফুসফুসের রক্তস্রাব, ছড়িয়ে ছিটিয়ে থাকা পৃষ্ঠতল রক্তস্রাব এবং তলদেশের ফুসফুস (চিত্র ১(খ) । ৩৬টি GETV- ইতিবাচক নমুনার মধ্যে মাত্র দুটি PDCoV, PCV2, বা JEV-এর সাথে সংক্রামিত হয়েছিল;বাকিরা একক জিইটিভিতে আক্রান্ত হয়েছে (চিত্র ১ ((গ)).

চিত্র ১। হেনান প্রদেশের শূকর খামারে জিইটিভি প্রাদুর্ভাবের সংক্ষিপ্ত বিবরণ

(ক) হেনান প্রদেশের জিইটিভি-পজিটিভ গরু খামারের বিতরণ। (খ) এই প্রাদুর্ভাবের সময় সংক্রামিত শুয়োরের মধ্যে মোট হিস্টোলজিকাল ক্ষত।

(গ) টিস্যু নমুনায় জিইটিভি এবং অন্যান্য ভাইরাসগুলির পিসিআর সনাক্তকরণ।

উপসংহারঃ হেনান প্রদেশের একাধিক ফার্মে গরুদের মধ্যে জিইটিভি সংক্রমণ ঘটেছে, মূলত একটি একক ভাইরাসের কারণে। ক্লিনিকাল প্রকাশগুলির মধ্যে ডায়রিয়া, অ্যাটাক্সিয়া এবং পিছনের অঙ্গ দুর্বলতা অন্তর্ভুক্ত ছিল,কিছু নমুনায় মিশ্র সংক্রমণ দেখা দেয়.

2. জিইটিভি এর বিচ্ছিন্নতা, সনাক্তকরণ এবং টাইটার নির্ধারণ

৩৬টি ইতিবাচক নমুনা থেকে, ২৮টি জিইটিভি স্ট্রেনকে সফলভাবে বিএইচকে-২১ কোষে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছে। এইচএনজক-এক্সএইচ১ এবং এইচএনজিএমডি-এক্সপি১কে জিইটিভি হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে। বিএইচকে-২১ বা পিকে-১৫ কোষে সংক্রমণের ৪৮ ঘন্টা পরে,উল্লেখযোগ্য সাইটোপ্যাথিক পরিবর্তন, কোষ সংকোচন, গোলাকারকরণ এবং এক্সফোলিয়েশন সহ, নিয়ন্ত্রণের তুলনায় পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। আরটি-পিসিআর এবং ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপি আরও ভাইরাল পরিচয় নিশ্চিত করেছে।প্রসারণ কার্ভ দেখায় যে দুটি ভাইরাস স্ট্রেনের বৃদ্ধির গতিবিদ্যা অনুরূপ ছিল, সংক্রমণের ৩৬ ঘন্টা পরে টাইটারগুলি সর্বোচ্চ পর্যায়ে পৌঁছে যায় এবং তারপরে হ্রাস পায়। প্লেক অ্যাসেসের ফলাফল দেখিয়েছে যে দুটি ভাইরাস স্ট্রেনের প্লেকগুলি আকারে অনুরূপ ছিল, তবে সংখ্যায় আলাদা ছিল।

চিত্র ২। জিইটিভি-র বিচ্ছিন্নতা ও বৈশিষ্ট্য

(A) HNzk-XH1 বা HNzmd-XP1 দ্বারা BHK-21 এবং PK-15 কোষের সংক্রমণের পরে, 12 থেকে 36 ঘন্টার মধ্যে সাইটোপ্যাথিক প্রভাবগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

(B) জিইটিভি আইসোলেটগুলি আরটি-পিসিআর দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। (C) ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপির মাধ্যমে জিইটিভি কণার মর্ফোলজি পরীক্ষা করা হয়েছিল।

(ঘ) বিএইচকে-২১ এবং পিকে-১৫ কোষে HNzk-XH1 বা HNzmd-XP1 এর বৃদ্ধি। (ঘ) বিএইচকে-২১ কোষে GETV এর প্লেক মর্ফোলজি।

উপসংহারঃ GETV স্ট্রেন HNzk-XH1 এবং HNzmd-XP1 সফলভাবে শূকর খামার নমুনা থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছে। উভয় স্ট্রেন কোষগুলিতে উল্লেখযোগ্য সাইটোপ্যাথিক প্রভাব সৃষ্টি করে।অনুরূপ বৃদ্ধির গতিবিদ্যা এবং টাইটার পরিবর্তনের সাথে, কিন্তু প্লেকের সংখ্যায় পার্থক্য রয়েছে।

3. সিকোয়েন্সিং এবং ফিলোজেনটিক বিশ্লেষণ

এই গবেষণায় প্রাপ্ত পুরো-জিনোম সিকোয়েন্স (জেনব্যাঙ্ক অ্যাক্সেস নম্বরঃ PQ658739?? PQ658750) এবং E2 জিন সিকোয়েন্স (জেনব্যাঙ্ক অ্যাক্সেস নম্বরঃ PQ658751?? PQ658766) জেনব্যাঙ্কে জমা দেওয়া হয়েছে।সমগ্র জিনোমের হোমোলজি বিশ্লেষণ দেখায় যে, আইসোলেটগুলির মধ্যে নিউক্লিওটাইড পরিচয় 98 থেকে 98 পর্যন্ত ছিল।.4% থেকে 100.0% এবং অ্যামিনো অ্যাসিড পরিচয় 99.3% থেকে 100.0% এর মধ্যে ছিল। রেফারেন্স স্ট্রেনের তুলনায়, জিআই, জিআই, জিআইভি এবং জিআইআইএল এর সাথে এই বিচ্ছিন্নগুলির নিউক্লিওটাইড পরিচয় 94.8%-95.0% ছিল, 96০.৯% ০.৯৭%, ০.৯৫.৬% ০.৯৭.৩%, এবং ০.৯৬.৯% ০.৯৯.৮% যথাক্রমে। অ্যামিনো অ্যাসিডের পরিচয় যথাক্রমে ৯৮.৫% ০.৯৮%, ৯৮.৯% ০.৯১%, ৯৮.৩% ০.৯৫%, এবং ৯৮.৭% ০.১০০% ছিল।

২৮ টি আইসোলেট এবং ১২ টি সম্পূর্ণ জিনোমের E2 জিনের উপর ভিত্তি করে ফাইলোজেনেটিক বিশ্লেষণ প্রকাশ করেছে যে সমস্ত আইসোলেটগুলি অন্যান্য গোষ্ঠীর সাথে দূরবর্তীভাবে সম্পর্কিত GIII এর অন্তর্গত (চিত্র 3 ((a,b)) ।তাদের অধিকাংশই GDHYLC23 ভেরিয়েন্টের সাথে একত্রিত হয়েছে (চিত্র 3 ((b)). অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স সারিবদ্ধকরণ এই বিচ্ছিন্নগুলির nsP3 এবং E2 প্রোটিনগুলিতে চারটি অনন্য মিউটেশন প্রকাশ করেছে (চিত্র 3 ((c)) । nsP3 P329S মিউটেশন ZBD অঞ্চলে অবস্থিত,A381T এবং V503G মিউটেশনগুলি HVD অঞ্চলে অবস্থিত, এবং E2 প্রোটিনের অবস্থান 323 এ একটি D323E মিউটেশন রয়েছে। এই বৈশিষ্ট্যগুলির উপর ভিত্তি করে, এই ক্ল্যাডের বিচ্ছিন্নগুলি GIII রূপ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল।

চিত্র ৩. ফিলোজেনটিক বিশ্লেষণ এবং আইসোলেটগুলির অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স সারিবদ্ধকরণ। E2 (a) এবং সম্পূর্ণ জিনোম (b) এর ভিত্তিতে আইসোলেটগুলির ফিলোজেনটিক বিশ্লেষণ।

উপসংহারঃ এই গবেষণায় বিশিষ্ট ব্যক্তিরা সকলেই জিআইআইআই জেনোটাইপের অন্তর্গত, অন্যান্য জেনোটাইপের সাথে দূরবর্তীভাবে সম্পর্কিত এবং এনএসপি 3 এবং ই 2 প্রোটিনে অনন্য অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন রয়েছে,যা নিশ্চিত করে যে এই বিচ্ছিন্নগুলি GIII ভেরিয়েন্ট.

4পঙ্গপালের মধ্যে GETV HNzk-XH1 স্ট্রেনের প্যাথোজেনিকতা

বাণিজ্যিক শূকর খামারে GETV প্রাদুর্ভাবের উচ্চ মৃত্যুর হার এবং BHK-21 এবং PK-15 কোষ থেকে বিচ্ছিন্ন GETV ভাইরাসগুলির উচ্চ টাইটারের কারণে,এই গবেষণায় উচ্চতর টাইটারের HNzk-XH1 স্ট্রেনটি প্যাথোজেনিকতা মূল্যায়নের জন্য নির্বাচিত হয়েছিলচ্যালেঞ্জ গ্রুপের শুয়োরের বাচ্চাদের HNzk-XH1 স্ট্রেনের 107TCID50 ইনট্রামাসকুলার ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল, যখন কন্ট্রোল গ্রুপকে সমান পরিমাণে DMEM মিডিয়াম ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।চ্যালেঞ্জের ২৪ ঘণ্টা পর, চ্যালেঞ্জ গ্রুপের শুয়োরদের ডায়রিয়া হয়, যার পরে ১.৫ দিন পরে পিছনের অঙ্গের প্যারালাইসিস হয়। দুই দিন পরে, কিছু শুয়োর মারা যায়, এবং চার দিনের মধ্যে সমস্ত শুয়োর মারা যায়,১০০% মৃত্যুর হার (চিত্র ৪ ((গ))ক্লিনিকাল লক্ষণ স্কোর দেখিয়েছে যে HNzk-XH1 গ্রুপের লক্ষণগুলি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি গুরুতর ছিল (চিত্র 4 ((খ)) । মৃত শুয়োরের অবিলম্বে অটোপসি করা হয়েছিল,যখন কন্ট্রোল গ্রুপের অটোপসি ৮ দিন পরে করা হয়HNzk-XH1 গ্রুপের পাতলা অন্ত্রের প্রাচীর উল্লেখযোগ্যভাবে পাতলা, হলুদ, জলীয় সামগ্রী সহ, যখন নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের পাতলা অন্ত্র স্বাভাবিক ছিল (চিত্র 4 ((এ)) ।RT-qPCR বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে চ্যালেঞ্জের দুই দিন পর সংগৃহীত রক্তে GETV nsP1 জিনের কপি সংখ্যা 106/ml এর কাছাকাছি ছিল।, যখন কন্ট্রোল গ্রুপে কোন ভাইরাস সনাক্ত করা হয়নি (চিত্র 4 ((d)). লিভার, ফুসফুস, কিডনি, মলদ্বার, পাতলা অন্ত্রের পরীক্ষা,HNzk-XH1- সংক্রামিত গোষ্ঠীর সকল অঙ্গের উচ্চ ভাইরাল লোড দেখা গেছে।, যখন কোন GETV RNA পরীক্ষা গ্রুপে সনাক্ত করা হয় নি (চিত্র 4 ((ই)) ।

চিত্র ৪. শুয়োরের মধ্যে রোগজীবাণু

(ক) সংক্রামিত শূকরদের ক্লিনিকাল লক্ষণ এবং ময়নাতদন্তের ফলাফল (খ) সংক্রামিত শূকরদের ক্লিনিকাল স্কোর।

(গ) সংক্রামিত শূকরদের বেঁচে থাকার হার। (ঘ) সংক্রামিত শূকরদের সম্পূর্ণ রক্তে ভাইরাল আরএনএ স্তর সংক্রমণের পর ২ দিন।

(ঙ) সংক্রমণের পর মারা যাওয়া বা মৃত্যুদণ্ডপ্রাপ্ত শূকর বাচ্চাদের বিভিন্ন অঙ্গের ভাইরাল আরএনএ স্তর।

উপসংহারঃ এইচএনজক-এক্সএইচ১ স্ট্রেনটি শুয়োরের বাচ্চাদের জন্য অত্যন্ত প্যাথোজেনিক, যা দ্রুত গুরুতর ক্লিনিকাল লক্ষণ এবং মৃত্যুর কারণ হয়। ভাইরাসটি রক্ত এবং প্রধান অঙ্গগুলিতে ব্যাপকভাবে উপস্থিত।নিয়ন্ত্রণ গ্রুপে কোন অস্বাভাবিকতা দেখা যায়নি।.

5HNzk-XH1 ভেরিয়েন্টের সাথে সংক্রামিত স্তন্যপায়ী ইঁদুরের মধ্যে প্যাথোলজিকাল পরিবর্তন

এই গবেষণায় দেখা গেছে যে, গেইটিভি-র ভাইরুল্যান্স অধ্যয়নের জন্য স্তন্যপান করা ইঁদুর আদর্শ মডেল।পরীক্ষামূলক ফলাফল দেখায় যে HNzk-XH1 ভেরিয়েন্টের সাথে স্তন্যপায়ী ইঁদুরের সংক্রমণ পিছনের অঙ্গের প্যারালাইসিস এবং বৃদ্ধির বিলম্বের কারণ হয় (চিত্র 5 ((a))এর বিপরীতে, এইচএনজেডজে-এস১ স্ট্রেন কম মারাত্মক ছিল, এবং কম ডোজ দিয়ে সংক্রামিত স্তন্যপায়ী মাউস বেঁচে ছিল এবং স্বাভাবিক ওজন অর্জন করেছিল,যা দেখায় যে দুধ খাওয়ানো ইঁদুরের মধ্যে দুটি স্ট্রেনের প্যাথোজেনিকতার মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য রয়েছে.

চিত্র ৫. HNzk-XH1 এবং HNZJ-S1 এর রোগজনিততার তুলনা

(খ) HNzk-XH1 স্ট্রেনের বিভিন্ন মাত্রায় আক্রান্ত স্তন্যপায়ী মাউসের বেঁচে থাকার হার।

(c) HNZJ-S1 স্ট্রেনের বিভিন্ন ডোজের সাথে সংক্রামিত স্তন্যপায়ী ইঁদুরের বেঁচে থাকার হার। (d) HNzk-XH1 স্ট্রেনের বিভিন্ন ডোজের সাথে সংক্রামিত স্তন্যপায়ী ইঁদুরের ওজন পরিবর্তন।

(e) HNZJ-S1 স্ট্রেনের বিভিন্ন ডোজের সাথে সংক্রামিত স্তন্যপায়ী ইঁদুরের ওজন পরিবর্তন।

উপসংহারঃ HNzk-XH1 ভেরিয়েন্ট স্তন্যপায়ী ইঁদুরের ক্ষেত্রে অত্যন্ত প্যাথোজেনিক, যা পিছনের অঙ্গের পক্ষাঘাত, বৃদ্ধির বিলম্ব এবং দ্রুত মৃত্যুর কারণ হয়। HNZJ-S1 স্ট্রেন কম প্যাথোজেনিক,এবং স্তন্যদানকারী ইঁদুর যারা কম মাত্রায় আক্রান্ত তারা বেঁচে থাকে এবং স্বাভাবিক শরীরের ওজন বজায় রাখে, যা দুটি স্ট্রেনের মধ্যে ভাইরুলেনসেসে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।

সিদ্ধান্ত

এই গবেষণায় দেখা গেছে যে ২০২৪ সালের জুলাই থেকে সেপ্টেম্বর পর্যন্ত হেনান প্রদেশের গরু খামারে জিইটিভি প্রাদুর্ভাবকে জিআইআই গ্রুপের একটি স্বতন্ত্র, শাখাভিত্তিক বৈকল্পিক হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল,E2 এবং nsP3 প্রোটিনে চারটি অনন্য অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন রয়েছেপূর্ববর্তী পৃথকীকরণের তুলনায়, এই বৈকল্পিকটি আরও বেশি ভাইরুল্যান্স প্রদর্শন করে এবং প্রাদুর্ভাবের আগে শূকর এবং মশার মাধ্যমে নীরবে সংক্রামিত হতে পারে।জলবায়ু পরিস্থিতি এবং শূকর খামারের সঞ্চালন প্যাটার্নগুলি মহামারীটির বিস্তারকে ত্বরান্বিত করেছিলবর্তমানে, চীনে কোন ভ্যাকসিন পাওয়া যায় না, যার ফলে ক্রমবর্ধমান নজরদারি এবং প্রতিরোধ ও নিয়ন্ত্রণের কৌশলগুলিতে সময়মত সমন্বয় প্রয়োজন।