أخبار الشركة عن أحدث الأبحاث: نمط توزيع سلالات الطاعون الأفريقي للخنازير الضعيفة في الأعضاء الليمفاوية الطرفية للخنازير

في 4 نوفمبر 2025، نشر فريق بحث من المركز الوطني لأمراض الحيوانات الغريبة في وكالة تفتيش الأغذية الكندية دراسة جديدة في مجلة * Viruses *،عن تقرير ديناميكيات توزيع الجينوم الفيروسي في الأعضاء الليمفاوية الطرفية للخنازير بعد العدوى الفموية والأنفية بالسلالة الفيروسية من داء الخنازير الأفريقي ذات الفيروسية المتوسطة.

أبرز أبحاث

* لأول مرة، this study systematically depicted the temporal-spatial distribution of the viral genome of attenuated African swine fever strains Estonia 2014 (genotype II) and Malta’78 (genotype I) in peripheral lymphoid organs of pigs after oral-nasal infectionتم الكشف عن إستونيا 2014 في وقت سابق وأدى إلى وفيات أسرع في الخنازير، في حين أن مالطا 78 كان لها فترة بقاء أطول.

* أكدت هذه الدراسة أن الجينوم الفيروسي يمكن اكتشافه في الغدد الليمفاوية اللحائية السطحية (SILN) في وقت مبكر من 2-3 أيام بعد العدوى ، و يصل إلى ذروته في 5-9 أيام ،ويتزامن مع الحمل الفيروسي في الطحال.

* تسعة خنازير ميتة كانت 100% SILN إيجابية، مع قيم Ct تختلف عن عينات الطحال بأقل من دورة واحدة.هذا حل التحديات التشغيلية للعينات الموصى بها من قبل WOAH (التي تتطلب التشريح والمتعرضة للتلوث)، ووضع المعيار الذهبي للمراقبة السلبية دون إزالة الأمعاء.

* أظهرت الخنازير الباقية على قيد الحياة اتجاه الإزالة الفيروسية عند 10 - 18 دبي، مع ارتفاع مستمر في قيم SILN Ct، مما يوفر دليل جزئي لـ " تقييم التعافي ".

* اختبار تشخيصي ثلاثي يجمع بين علم الأمراض الحيوية ، والكيمياء المناعية (IHC) ،والهجينة في الموقع (ISH) كشفت أن الفيروس يُصيب فقط الخلايا الكبرى / الخلايا الدندريتية → هذه الخلايا تفرز السيتوكينات المؤيدة للالتهابات → الخلايا الليمفاوية، بدون عدوى فيروسية، تخضع للابتوتا / التنكس → مما يؤدي في نهاية المطاف إلى تلف الأنسجة الليمفاوية (التنكس النزيفي) ، مما يوضح الآلية غير المباشرة للإصابة المناعية.

استخدمت هذه الدراسة سلالتين شديدة الفيروسات، ASFV Estonia 2014 و ASFV Malta78, لإجراء تجارب على الخنازير باستخدام طريقة نقل محاكاة بالاتصال الميداني.التوزيع الديناميكي للفيروس في الدمتم تحليل الطحال واللوزتين والعقد الليمفاوية السطحية المختلفة بشكل منهجي.

أظهرت النتائج أن الفيروس يمكن اكتشافه في الغدد الليمفاوية الشفهية في الحوض بعد 2-3 أيام من العدوى ، وبلغ ذروته في 5-9 أيام.أكدت الدراسة أيضاً أن محتوى الجينوم الفيروسي في طحال الخنازير الميتة كان متسقاً للغاية مع محتوى الجينوم في SILN (عقدة الليمفاوية الطحالية - الأمعاء)، دعم SILN كنوع عينة فعال للغاية لفحص الخنازير الميتة لحمى الخنازير الأفريقية.

مقدمة

وبشكل عام، يُعتبر هذا المرض من أهم الأمراض التي تعاني منها المرض.اقترح فريق مركز الأمراض الخارجية التابع لوكالة تفتيش الأغذية الكندية (NCFAD) فرضية أن "SILN يمكن أن تحل محل الطحال" في عام 2022، ولكن لا تزال هناك نقص في البيانات المتعلقة بتطبيقها في المرحلة المبكرة من العدوى وما إذا كانت السلالات الضعيفة موزعة بشكل مماثل. تهدف هذه الدراسة إلى سد هذه الفجوة.

النتائج

1الاختلافات في وقت اكتشاف الفيروس:

بدأ التلوث في الخنازير المصابة بفيروس الفطريات الصوفية في إستونيا 2014 بعد يومين من العدوى (dpi) ، في حين بدأ في الخنازير المصابة بفيروس الفطريات الصوفية في مالطا 78 عند 3 dpi ؛ كان يمكن الكشف عن كلا الفيروسين في SILN عند 3 dpi ،وارتفعت الحمولة الفيروسية بسرعة مع مرور الوقت.

الشكل 1. التوزيع الجينومي لسلالة فيروس داء الخنازير الأفريقي في إستونيا 2014 في الخنازير الفردية (a-c) ونتائج الكشف اليومية المتوسطة (مع الخطأ القياسي لقيم Ct المتوسطة) (d-f)

(أ، د) تظهر التوزيع في الدم الكامل، الطحال، واللوزة؛ (ب، ه) تظهر التوزيع في الغدد الليمفاوية اللحمية السطحية (SILN) ، الغدد الليمفاوية الفكية (SLN) ،وعقدة الليمفاوية العنقية السطحية (SCLN)؛ (ج، ف) يظهر التوزيع في الغدد الليمفاوية الشعبية (PLN) ، الغدد الليمفاوية الفخذية الأمامية (PFLN) ، والغدد الليمفاوية المعدنية الكبدية (GHLN).أعمدة الخطأ في الشكل تمثل الخطأ القياسي لقيم Ct في كل نقطة زمنية و لكل نوع عينة.

2. أنماط الذروة والتخليص:

بلغ الحمل الفيروسي لـ ASFV Estonia 2014 في الأعضاء الليمفاوية ذروته عند 7-9 dpi ، في حين بلغ ذروة ASFV Malta ‬78 عند 5-7 dpi. كانت مستويات SILN في الخنازير الميتة مماثلة لتلك الموجودة في الطحال ،في حين أن الحمل الفيروسي في الأعضاء الليمفاوية المحيطية من الخنازير الباقية على قيد الحياة انخفضت تدريجيا، مما يشير إلى الإزالة الفيروسية.

الشكل 2. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Estonia 2014 strain African swine fever virus.

في اليوم الثالث بعد التلقيح (3 دبي) ، لم تلاحظ أي تغيرات هيسوتوباثولوجية مهمة:(أ) أظهرت الكيمياء المناعية (IHC) خلايا فردية متناثرة إيجابية لفيروس داء الخنازير الأفريقي (ASFV) (السهم)· (ب) تم الكشف عن التهجين في الموقع (ISH) RNA ASFV مع توزيع مماثل (السهم).

في اليوم الرابع بعد التطعيم (4 dpi) ، لوحظت مناطق نزيف متعددة البؤرة في القشرة الدماغية والانفصال القشري (d، السهم).أظهرت IHC بقع تلوين إيجابية متناثرة من خلية واحدة واضحة، والمواد الجينومية الفيروسية التي اكتشفتها ISH (f) أظهرت نفس التوزيع والكثافة.

في اليوم الخامس بعد التلقيح (5dpi) ، ظهرت الكليات المتعددة الأماكن مع النزيف بشكل رئيسي على طول التقاطع القشري (g ، السهم).تم الكشف عن المضاد الفيروسي (h) والRNA الفيروسي (i) في المناطق المقابلة للآفات الميتة وفي الخلايا الشبيهة بالماكروفات المنتشرة في جميع أنحاء الأنسجة.

في اليوم السابع بعد التطعيم (7dpi) ، تم ملاحظة نزيف واسع النطاق و نكروز في تقاطع القشرة الدموية و في جميع أنحاء المنطقة متعددة الأطراف في القشرة (j ، السهم).كان هناك عدد كبير من مضادات فيروس داء الخنازير الأفريقي موجودة في تقاطع القشرة الدمويةتم العثور أيضا على بعض الخلايا الإيجابية المنتشرة في القشرة الدماغية (k). بالمقارنة مع النقاط الزمنية السابقة ، انخفض مستوى الكشف عن حمض النووي الفيروسي في هذا الوقت (l).

في اليوم التاسع بعد التطعيم (9dpi) ، تم ملاحظة تدهور واسع النطاق ونزيف في جميع أنحاء الغدد الليمفاوية (m، arrow) ، بما في ذلك تدهور الخلايا الغدد الصماء (m، arrow) ،إدراج يظهر تكبير أكبر للمنطقة الميتة)كانت مستويات المضاد الفيروسي (n) وحمض النوكليين الفيروسي (o) التي تم اكتشافها في جميع أنحاء المنطقة متعددة البؤرة للعقدة الليمفاوية أقل من تلك التي لوحظت عند 7 دبي.كانت المضادات الفيروسية لا تزال لوحظت في الخلايا الغذائية الوعائية(أو إدراج)

في اليوم الحادي عشر بعد التلقيح (11 دبي) ، تم ملاحظة الكتلة المعتدلة (ب) ، ولكن الحفاظ على المناعة انخفض بشكل ملحوظ (q، r).

3قيمة تطبيق SILN:

لا يتطلب جمع عينات SILN تشريحًا، ومعدل الكشف عن الفيروس في الخنازير الميتة متسق مع معدل الكشف عن الفيروس في الطحال.يمكن اكتشافه بشكل مستقر في مرحلة العدوى المبكرة (بعد 3 دبي)مما يجعلها عينة بديلة مثالية لفحص الخنازير الميتة.

الشكل 3. التوزيع الجينومي لفيروس مالطا ‬78 لدخان الخنازير الأفريقي في الخنازير الفردية (a-c) ونتائج الكشف اليومية المتوسطة (مع متوسط خطأ قياسي لقيمة Ct) (d-f)

(أ، د) تظهر التوزيع في الدم الكامل، الطحال، واللوزة؛ (ب، د) تظهر التوزيع في الغدد الليمفاوية اللحمية السطحية (SILN) ، الغدد الليمفاوية تحت الفك (SLN) ،وعقدة الليمفاوية العنقية السطحية (SCLN)(ج،و) يظهر التوزيع في الغدد الليمفاوية الشعبية (PLN) ، الغدد الليمفاوية الفخذية الأمامية (PFLN) ، والغدد الليمفاوية المعدنية الكبدية (GHLN).أعمدة الخطأ في الشكل تمثل الخطأ القياسي لقيم Ct في كل نقطة زمنية و لكل نوع عينة.

4التحقق المرضي والجزيئي:

أكدت نتائج التهجين المناعي الهستوكيميائي وفي الموقع أن اتجاهات توزيع المضادات الفيروسية والأحماض النووية في SILN كانت متوافقة مع نتائج PCR في الوقت الحقيقي.تم ملاحظة التغيرات المرضية مثل كدمة الأنسجة الليمفاوية والنزيف في المراحل اللاحقة من العدوى، و تم مزامنة عملية إزالة الفيروس مع إصلاح الضرر المرضي.

الشكل الرابع Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Malta’78 strain of African swine fever virus.

في اليوم الرابع بعد التطعيم (4dpi) ، لم تلاحظ أي آفات واضحة في أقسام HE (أ).السهم) والهجين في الموقع (ISH)(السهم)

في اليوم الخامس بعد التلقيح (5dpi) ، لوحظ عدد قليل من المراكز النكروتية الصغيرة في النخاع (d، السهم).تم اكتشاف مضاد فيروس داء الخنازير الأفريقي (ASFV) الواسع (e) والRNA الفيروسي (f) في الخلايا التي تتوافق شكلها مع الخلايا الكبرى والخلايا التشنجية.

في اليوم السابع بعد التطعيم (7dpi) ، ظهرت مناطق الكليات النخاعية (g ، السهم). مقارنة مع 5dpi ، انخفضت كمية مضاد الفيروس (h) و RNA الفيروسي (i) المكتشف.

في اليوم العاشر بعد التطعيم (10 دبي) ، لوحظ نزيف وتجاعيد في المقام الأول في تقاطع القشرة الدموية (j) ، مصحوبة بإشارات ضعف في الجهاز المناعي (k، l).

في اليوم الثامن عشر بعد التلقيح (18 دبي) ، تم ملاحظة ارتفاع في نسبة التفاعلية (م) في أنسجة SILN ، ولم يتم ملاحظة أي إشارات ملونة مهمة من IHC (n) أو ISH (o).

الاستنتاج

أوضحت هذه الدراسة بشكل منهجي ديناميكيات توزيع سلالات ASFV مرتفعة الخطورة في الأعضاء الليمفاوية الطرفية للخنازير بعد العدوى الفموية الفموية من خلال التجارب على الحيوانات.وجدت الدراسة أن الفيروس ينتشر بسرعة إلى الغدد الليمفاوية الشمسية السطحية بعد العدوى، والحمل الفيروسي في SILN من جميع الخنازير الميتة ظلت متسقة للغاية مع تلك في الطحال،وبالتالي يؤكد من وجهة نظر المرضية أن SILN لديه أساس علمي متين كعينة فحص للخنازير المصابة بمرض ASF.

تجدر الإشارة إلى أن هذه الدراسة وضحت أيضا حدود قابلية استخدام طريقة العينة هذه:الخنازير المصابة التي يمكن أن تبقى على قيد الحياة سوف تطهر تدريجيا الفيروس من الغدد الليمفاوية المحيطية، والحمل الفيروسي والتنوع في الغدد الليمفاوية منخفضة في المراحل المبكرة من العدوى وخلال فترة التعافي.SILN مناسب بشكل رئيسي لفحص سريع للخنازير الميتة أو المحتضرة، ولا يوصى به لمراقبة روتينية للمسببات الأمراضية في الحيوانات المصابة في المراحل المبكرة أو الباقية على قيد الحياة.

نتائج هذه الدراسة لها أهمية عملية واضحة: أخذ عينات SILN لا يتطلب تشريح الجثث ، بسيط وسريع في التشغيل ،ويمكن أن تقلل بشكل كبير من صعوبة أخذ العينات في الموقع ومخاطر السلامة الحيويةيوفر الدعم التقني الرئيسي لتحسين برامج المراقبة السلبية للأمراض الفطرية، وخاصة لتحسين القدرة على اكتشاف تفشي الأمراض في وقت مبكر.