berita perusahaan tentang Penelitian terbaru: Pola distribusi strain demam babi Afrika yang lemah di organ limfoid perifer babi

Pada tanggal 4 November 2025, sebuah tim peneliti dari Pusat Nasional Penyakit Hewan Eksotik Badan Inspeksi Pangan Kanada menerbitkan sebuah studi baru dalam jurnal *Viruses*, yang melaporkan dinamika distribusi genom virus dalam organ limfoid perifer babi setelah infeksi oral-nasal dengan galur virus demam babi Afrika yang cukup ganas.

Sorotan Penelitian

* Untuk pertama kalinya, studi ini secara sistematis menggambarkan distribusi temporal-spasial genom virus dari galur demam babi Afrika yang dilemahkan Estonia 2014 (genotipe II) dan Malta’78 (genotipe I) dalam organ limfoid perifer babi setelah infeksi oral-nasal, membandingkan perbedaan antara kedua galur tersebut. Estonia 2014 terdeteksi lebih awal dan mengakibatkan kematian babi yang lebih cepat, sementara Malta’78 memiliki periode kelangsungan hidup yang lebih lama.

* Studi ini mengkonfirmasi bahwa genom virus dapat dideteksi dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN) seawal 2-3 hari setelah infeksi, mencapai puncaknya pada 5-9 hari, dan sangat tersinkronisasi dengan muatan virus di limpa.

* Sembilan babi mati 100% positif SILN, dengan nilai Ct yang berbeda dari sampel limpa kurang dari satu siklus. Hal ini memecahkan tantangan operasional dari sampel yang direkomendasikan WOAH (membutuhkan nekropsi dan rentan terhadap kontaminasi), menetapkan standar emas untuk pemantauan pasif tanpa eviserasi.

* Babi yang masih hidup menunjukkan tren pembersihan virus pada 10-18 dpi, dengan nilai Ct SILN yang terus meningkat, memberikan bukti molekuler untuk "penilaian pemulihan."

* Uji diagnostik tiga kali lipat yang menggabungkan histopatologi, imunohistokimia (IHC), dan hibridisasi in situ (ISH) mengungkapkan bahwa virus hanya menginfeksi makrofag/sel dendritik → sel-sel ini mengeluarkan sitokin pro-inflamasi → limfosit, tanpa infeksi virus, mengalami apoptosis/nekrosis → yang pada akhirnya menyebabkan kerusakan jaringan limfoid (nekrosis hemoragik), mengklarifikasi mekanisme cedera imun secara tidak langsung.

Studi ini menggunakan dua galur yang cukup ganas, ASFV Estonia 2014 dan ASFV Malta’78, untuk melakukan eksperimen pada babi menggunakan metode transmisi kontak lapangan yang disimulasikan. Distribusi dinamis virus dalam darah, limpa, tonsil, dan berbagai kelenjar getah bening superfisial dianalisis secara sistematis.

Hasil menunjukkan bahwa virus dapat dideteksi dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial 2-3 hari setelah infeksi, mencapai puncaknya pada 5-9 hari. Studi ini selanjutnya mengkonfirmasi bahwa kandungan genom virus dalam limpa babi mati sangat konsisten dengan yang ada di SILN (kelenjar getah bening limpa-usus), mendukung SILN sebagai jenis sampel yang sangat efisien untuk penyaringan babi mati untuk demam babi Afrika.

Pendahuluan

Demam babi Afrika (ASF) merajalela secara global. Pemantauan pasif yang mengandalkan pengambilan limpa memakan waktu, padat karya, dan membawa risiko keamanan hayati yang tinggi. Tim Pusat Penyakit Eksternal (NCFAD) Badan Inspeksi Pangan Kanada mengusulkan hipotesis bahwa "SILN dapat menggantikan limpa" pada tahun 2022, tetapi data tentang penerapannya pada tahap infeksi awal dan apakah galur yang dilemahkan didistribusikan secara serupa masih kurang. Studi ini bertujuan untuk mengisi kesenjangan ini.

Hasil

1. Perbedaan waktu deteksi virus:

Viralisasi pada babi yang terinfeksi ASFV Estonia 2014 dimulai pada 2 hari pasca-infeksi (dpi), sedangkan pada babi yang terinfeksi ASFV Malta’78 dimulai pada 3 dpi; kedua virus terdeteksi di SILN pada 3 dpi, dan muatan virus meningkat dengan cepat seiring waktu.

Gambar 1. Distribusi genom galur virus demam babi Afrika Estonia 2014 pada masing-masing babi (a-c) dan hasil deteksi rata-rata harian (dengan kesalahan standar nilai Ct rata-rata) (d-f)

(a, d) menunjukkan distribusi dalam darah utuh, limpa, dan tonsil; (b, e) menunjukkan distribusi dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN), kelenjar getah bening mandibular (SLN), dan kelenjar getah bening servikal superfisial (SCLN); (c, f) menunjukkan distribusi dalam kelenjar getah bening popliteal (PLN), kelenjar getah bening femoralis anterior (PFLN), dan kelenjar getah bening gastrohepatik (GHLN). Bilah kesalahan pada gambar mewakili kesalahan standar (SEM) dari nilai Ct pada setiap titik waktu dan untuk setiap jenis sampel.

2. Pola Puncak dan Pembersihan:

Muatan virus ASFV Estonia 2014 dalam organ limfoid mencapai puncaknya pada 7-9 dpi, sedangkan ASFV Malta’78 mencapai puncaknya pada 5-7 dpi. Tingkat SILN pada babi mati sebanding dengan yang ada di limpa, sementara muatan virus dalam organ limfoid perifer babi yang masih hidup secara bertahap menurun, yang mengindikasikan pembersihan virus.

Gambar 2. Pengamatan histopatologis dan distribusi virus dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN) anak babi setelah inokulasi oral-nasal dengan galur Estonia 2014 yang cukup ganas dari virus demam babi Afrika.

Pada hari ke-3 pasca-inokulasi (3 dpi), tidak ada perubahan histopatologis yang signifikan yang diamati: (a) Imunohistokimia (IHC) menunjukkan sel tunggal yang tersebar positif untuk antigen virus demam babi Afrika (ASFV) (panah); (b) Hibridisasi in situ (ISH) mendeteksi RNA ASFV dengan distribusi yang serupa (panah).

Pada hari ke-4 pasca-inokulasi (4 dpi), area hemoragi multifokal diamati pada korteks dan persimpangan kortikomeduler (d, panah). IHC menunjukkan bercak pewarnaan positif sel tunggal yang tersebar jelas (e, panah), dan materi genomik virus yang terdeteksi oleh ISH (f) menunjukkan distribusi dan intensitas yang sama.

Pada hari ke-5 pasca-inokulasi (5 dpi), nekrosis multifokal dengan hemoragi muncul terutama di sepanjang persimpangan kortikomeduler (g, panah). Antigen virus (h) dan RNA virus (i) terdeteksi di area lesi nekrotik yang sesuai dan dalam sel seperti makrofag yang tersebar di seluruh jaringan.

Pada hari ke-7 pasca-inokulasi (7 dpi), hemoragi dan nekrosis yang luas diamati di persimpangan kortikomeduler dan di seluruh area multifokal korteks (j, panah). Sejumlah besar antigen virus demam babi Afrika hadir di persimpangan kortikomeduler, dan beberapa sel positif yang tersebar juga ditemukan di korteks (k). Dibandingkan dengan titik waktu sebelumnya, tingkat deteksi asam nukleat virus berkurang pada saat ini (l).

Pada hari ke-9 pasca-inokulasi (9 dpi), nekrosis dan hemoragi yang luas diamati di seluruh kelenjar getah bening (m, panah), termasuk degenerasi sel endotel (m, sisipan yang menunjukkan perbesaran area nekrotik yang lebih tinggi). Tingkat antigen virus (n) dan asam nukleat virus (o) yang terdeteksi di seluruh area multifokal kelenjar getah bening lebih rendah daripada yang diamati pada 7 dpi. Namun, antigen virus masih diamati dalam sel endotel vaskular (n, sisipan o).

Pada hari ke-11 pasca-inokulasi (11 dpi), nekrosis sedang diamati (p), tetapi pewarnaan imunologis berkurang secara signifikan (q, r).

3. Nilai aplikasi SILN:

Pengambilan sampel SILN tidak memerlukan diseksi, dan tingkat deteksi virus pada babi mati konsisten dengan yang ada di limpa. Hal ini dapat dideteksi secara stabil pada tahap infeksi awal (setelah 3 dpi), menjadikannya sampel alternatif yang ideal untuk penyaringan babi mati.

Gambar 3. Distribusi genom virus demam babi Afrika Malta’78 pada masing-masing babi (a-c) dan hasil deteksi harian rata-rata (dengan kesalahan standar nilai Ct rata-rata) (d-f)

(a,d) menunjukkan distribusi dalam darah utuh, limpa, dan tonsil; (b,e) menunjukkan distribusi dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN), kelenjar getah bening submandibular (SLN), dan kelenjar getah bening servikal superfisial (SCLN); (c,f) menunjukkan distribusi dalam kelenjar getah bening popliteal (PLN), kelenjar getah bening femoralis anterior (PFLN), dan kelenjar getah bening gastrohepatik (GHLN). Bilah kesalahan pada gambar mewakili kesalahan standar (SEM) dari nilai Ct pada setiap titik waktu dan untuk setiap jenis sampel.

4. Validasi Patologis dan Molekuler:

Hasil imunohistokimia dan hibridisasi in situ mengkonfirmasi bahwa tren distribusi antigen virus dan asam nukleat dalam SILN konsisten dengan hasil PCR real-time. Perubahan patologis seperti nekrosis jaringan limfoid dan hemoragi diamati pada tahap infeksi selanjutnya, dan proses pembersihan virus disinkronkan dengan perbaikan kerusakan patologis.

Gambar 4. Pengamatan histopatologis dan distribusi virus dalam kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN) anak babi setelah inokulasi oral-nasal dengan galur Malta’78 yang cukup ganas dari virus demam babi Afrika.

Pada hari ke-4 pasca-inokulasi (4 dpi), tidak ada lesi yang jelas yang diamati pada bagian HE (a). Sel tunggal seperti makrofag yang tersebar diamati dengan imunohistokimia (IHC) (b, panah) dan hibridisasi in situ (ISH) (c, panah).

Pada hari ke-5 pasca-inokulasi (5 dpi), sejumlah kecil fokus nekrotik kecil diamati di medula (d, panah). Antigen virus demam babi Afrika (ASFV) yang melimpah (e) dan RNA virus (f) terdeteksi dalam sel dengan morfologi yang konsisten dengan makrofag dan sel dendritik.

Pada hari ke-7 pasca-inokulasi (7 dpi), area nekrosis meduler muncul (g, panah). Dibandingkan dengan 5 dpi, jumlah antigen ASFV (h) dan RNA virus (i) yang terdeteksi berkurang.

Pada hari ke-10 pasca-inokulasi (10 dpi), hemoragi dan nekrosis diamati terutama di persimpangan kortiko-meduler (j), disertai dengan sinyal imunostaining yang lemah (k, l).

Pada hari ke-18 pasca-inokulasi (18 dpi), hiperplasia reaktif (m) diamati pada jaringan SILN, dan tidak ada sinyal pewarnaan yang signifikan yang diamati baik oleh IHC (n) maupun ISH (o).

Kesimpulan

Studi ini secara sistematis menjelaskan dinamika distribusi dua galur ASFV yang cukup ganas dalam organ limfoid perifer babi setelah infeksi oral-nasal melalui percobaan hewan. Studi ini menemukan bahwa virus menyebar dengan cepat ke kelenjar getah bening inguinal superfisial (SILN) setelah infeksi, dan muatan virus dalam SILN dari semua babi yang meninggal tetap sangat konsisten dengan yang ada di limpa, sehingga mengkonfirmasi dari perspektif patogenik bahwa SILN memiliki dasar ilmiah yang kuat sebagai sampel penyaringan untuk babi yang terkena ASF.

Perlu ditekankan bahwa studi ini juga mengklarifikasi batas penerapan metode pengambilan sampel ini: babi yang terinfeksi yang berpotensi masih hidup secara bertahap akan membersihkan virus dari kelenjar getah bening perifer mereka, dan muatan virus dan variabilitas dalam kelenjar getah bening rendah pada tahap awal infeksi dan selama periode pemulihan. Oleh karena itu, SILN terutama cocok untuk penyaringan cepat babi yang mati atau sekarat, dan tidak direkomendasikan untuk pengawasan patogen rutin pada infeksi tahap awal atau hewan yang masih hidup.

Temuan studi ini memiliki signifikansi praktis yang jelas: pengambilan sampel SILN tidak memerlukan diseksi bangkai, mudah dan cepat dioperasikan, dan dapat secara signifikan mengurangi kesulitan pengambilan sampel di lokasi dan risiko keamanan hayati. Hal ini memberikan dukungan teknis utama untuk mengoptimalkan program pengawasan pasif ASF, terutama untuk meningkatkan kemampuan mendeteksi wabah sejak dini.