Em 4 de novembro de 2025, uma equipe de pesquisa do Centro Nacional de Doenças de Animais Exóticos da Agência Canadense de Inspeção Alimentar publicou um novo estudo na revista *Viruses*, relatando a dinâmica de distribuição do genoma viral em órgãos linfoides periféricos de suínos após infecção oral-nasal com uma cepa de vírus da peste suína africana moderadamente virulenta.
Destaques da Pesquisa
* Pela primeira vez, este estudo descreveu sistematicamente a distribuição temporal-espacial do genoma viral das cepas atenuadas da peste suína africana Estonia 2014 (genótipo II) e Malta’78 (genótipo I) em órgãos linfoides periféricos de suínos após infecção oral-nasal, comparando as diferenças entre as duas cepas. A Estonia 2014 foi detectada mais cedo e resultou em mortalidade suína mais rápida, enquanto a Malta’78 teve um período de sobrevivência mais longo.
* Este estudo confirmou que o genoma viral pode ser detectado nos linfonodos inguinais superficiais (LIS) já nos 2-3 dias após a infecção, atingindo um pico em 5-9 dias, e é altamente sincronizado com a carga viral no baço.
* Nove suínos mortos foram 100% positivos para LIS, com valores de Ct que diferiam das amostras do baço em menos de um ciclo. Isso resolveu os desafios operacionais das amostras recomendadas pela OIE (requerendo necropsia e propensas à contaminação), estabelecendo o padrão-ouro para monitoramento passivo sem evisceração.
* Suínos sobreviventes mostraram uma tendência de eliminação viral em 10-18 dpi, com valores de Ct de LIS continuamente crescentes, fornecendo evidências moleculares para "avaliação da recuperação".
* Um teste de diagnóstico triplo combinando histopatologia, imuno-histoquímica (IHQ) e hibridização in situ (HIS) revelou que o vírus infecta apenas macrófagos/células dendríticas → essas células secretam citocinas pró-inflamatórias → linfócitos, sem infecção viral, sofrem apoptose/necrose → levando, em última análise, a danos no tecido linfoide (necrose hemorrágica), esclarecendo o mecanismo indireto de lesão imunológica.
Este estudo utilizou duas cepas moderadamente virulentas, ASFV Estonia 2014 e ASFV Malta’78, para conduzir experimentos em suínos usando um método simulado de transmissão por contato em campo. A distribuição dinâmica do vírus no sangue, baço, amígdalas e vários linfonodos superficiais foi sistematicamente analisada.
Os resultados mostraram que o vírus pode ser detectado nos linfonodos inguinais superficiais 2-3 dias após a infecção, atingindo seu pico em 5-9 dias. O estudo confirmou ainda que o conteúdo do genoma viral no baço de suínos mortos foi altamente consistente com o dos LIS (linfonodo esplênico-intestinal), apoiando os LIS como um tipo de amostra altamente eficiente para triagem de suínos mortos para peste suína africana.
Introdução
A peste suína africana (PSA) está desenfreada globalmente. O monitoramento passivo que depende da remoção do baço é demorado, trabalhoso e acarreta altos riscos de biossegurança. A equipe do Centro de Doenças Externas (NCFAD) da Agência Canadense de Inspeção Alimentar propôs a hipótese de que "LIS pode substituir o baço" em 2022, mas faltam dados sobre sua aplicabilidade no estágio inicial da infecção e se as cepas atenuadas são distribuídas de forma semelhante. Este estudo visa preencher essa lacuna.
Resultados
1. Diferenças no tempo de detecção do vírus:
A viralização em suínos infectados com ASFV Estonia 2014 começou em 2 dias pós-infecção (dpi), enquanto em suínos infectados com ASFV Malta’78 começou em 3 dpi; ambos os vírus foram detectáveis em LIS em 3 dpi, e a carga viral aumentou rapidamente ao longo do tempo.
Figura 1. Distribuição genômica da cepa do vírus da peste suína africana Estonia 2014 em suínos individuais (a-c) e resultados médios diários de detecção (com erro padrão dos valores médios de Ct) (d-f)
(a, d) mostram a distribuição em sangue total, baço e amígdalas; (b, e) mostram a distribuição em linfonodos inguinais superficiais (LIS), linfonodos mandibulares (SLN) e linfonodos cervicais superficiais (SCLN); (c, f) mostram a distribuição em linfonodos poplíteos (PLN), linfonodos femorais anteriores (PFLN) e linfonodos gastro-hepáticos (GHLN). As barras de erro na figura representam o erro padrão (SEM) dos valores de Ct em cada ponto no tempo e para cada tipo de amostra.
2. Padrões de Pico e Eliminação:
A carga viral de ASFV Estonia 2014 em órgãos linfoides atingiu o pico em 7-9 dpi, enquanto a de ASFV Malta’78 atingiu o pico em 5-7 dpi. Os níveis de LIS em suínos mortos foram comparáveis aos do baço, enquanto a carga viral nos órgãos linfoides periféricos de suínos sobreviventes diminuiu gradualmente, indicando eliminação viral.
Figura 2. Observação histopatológica e distribuição do vírus em linfonodos inguinais superficiais (LIS) de leitões após inoculação oral-nasal com a cepa Estonia 2014 moderadamente virulenta do vírus da peste suína africana.
No dia 3 pós-inoculação (3 dpi), nenhuma alteração histopatológica significativa foi observada: (a) A imuno-histoquímica (IHQ) mostrou células únicas dispersas positivas para o antígeno do vírus da peste suína africana (ASFV) (seta); (b) A hibridização in situ (HIS) detectou RNA de ASFV com uma distribuição semelhante (seta).
No dia 4 pós-inoculação (4 dpi), áreas multifocais de hemorragia foram observadas no córtex e na junção corticomedular (d, seta). A IHQ mostrou manchas positivas óbvias de células únicas dispersas (e, seta), e o material genômico viral detectado por HIS (f) mostrou a mesma distribuição e intensidade.
No dia 5 pós-inoculação (5 dpi), necrose multifocal com hemorragia apareceu principalmente ao longo da junção corticomedular (g, seta). O antígeno viral (h) e o RNA viral (i) foram detectados nas áreas correspondentes de lesões necróticas e em células dispersas semelhantes a macrófagos em todo o tecido.
No dia 7 pós-inoculação (7 dpi), hemorragia e necrose extensas foram observadas na junção corticomedular e em toda a área multifocal do córtex (j, seta). Um grande número de antígenos do vírus da peste suína africana estava presente na junção corticomedular, e algumas células positivas dispersas também foram encontradas no córtex (k). Em comparação com os pontos anteriores no tempo, o nível de detecção do ácido nucleico viral foi reduzido neste momento (l).
No dia 9 pós-inoculação (9 dpi), necrose e hemorragia extensas foram observadas em todo o linfonodo (m, seta), incluindo degeneração das células endoteliais (m, inserção mostrando uma ampliação maior da área necrótica). Os níveis de antígeno viral (n) e ácido nucleico viral (o) detectados em toda a área multifocal do linfonodo foram menores do que os observados em 7 dpi. No entanto, os antígenos virais ainda foram observados nas células endoteliais vasculares (n, o inserção).
No dia 11 pós-inoculação (11 dpi), necrose moderada foi observada (p), mas a imunocoloração foi significativamente reduzida (q, r).
3. Valor de aplicação de LIS:
A coleta de amostras de LIS não requer dissecção, e a taxa de detecção do vírus em suínos mortos é consistente com a do baço. Pode ser detectado de forma estável no estágio inicial da infecção (após 3 dpi), tornando-o uma amostra alternativa ideal para triagem de suínos mortos.
Figura 3. Distribuição genômica do vírus da peste suína africana Malta’78 em suínos individuais (a-c) e resultados médios diários de detecção (com erro padrão do valor médio de Ct) (d-f)
(a,d) mostram a distribuição em sangue total, baço e amígdalas; (b,e) mostram a distribuição em linfonodos inguinais superficiais (LIS), linfonodos submandibulares (SLN) e linfonodos cervicais superficiais (SCLN); (c,f) mostram a distribuição em linfonodos poplíteos (PLN), linfonodos femorais anteriores (PFLN) e linfonodos gastro-hepáticos (GHLN). As barras de erro na figura representam o erro padrão (SEM) dos valores de Ct em cada ponto no tempo e para cada tipo de amostra.
4. Validação Patológica e Molecular:
Os resultados da imuno-histoquímica e da hibridização in situ confirmaram que as tendências de distribuição de antígenos virais e ácidos nucleicos em LIS foram consistentes com os resultados da PCR em tempo real. Alterações patológicas, como necrose e hemorragia do tecido linfoide, foram observadas nos estágios posteriores da infecção, e o processo de eliminação viral foi sincronizado com a reparação dos danos patológicos.
Figura 4. Observação histopatológica e distribuição do vírus em linfonodos inguinais superficiais (LIS) de leitões após inoculação oral-nasal com a cepa Malta’78 moderadamente virulenta do vírus da peste suína africana.
No dia 4 pós-inoculação (4 dpi), nenhuma lesão óbvia foi observada nas seções HE (a). Células únicas dispersas, semelhantes a macrófagos, foram observadas por imuno-histoquímica (IHQ) (b, seta) e hibridização in situ (HIS) (c, seta).
No dia 5 pós-inoculação (5 dpi), um pequeno número de pequenos focos necróticos foi observado na medula (d, seta). Abundante antígeno do vírus da peste suína africana (ASFV) (e) e RNA viral (f) foram detectados em células com morfologia consistente com macrófagos e células dendríticas.
No dia 7 pós-inoculação (7 dpi), áreas de necrose medular apareceram (g, seta). Em comparação com 5 dpi, a quantidade de antígeno ASFV (h) e RNA viral (i) detectada foi reduzida.
No dia 10 pós-inoculação (10 dpi), hemorragia e necrose foram observadas principalmente na junção córtico-medular (j), acompanhadas por sinais fracos de imunocoloração (k, l).
No dia 18 pós-inoculação (18 dpi), hiperplasia reativa (m) foi observada no tecido LIS, e nenhum sinal significativo de coloração foi observado por IHQ (n) ou HIS (o).
Conclusão
Este estudo elucidou sistematicamente a dinâmica de distribuição de duas cepas ASFV moderadamente virulentas nos órgãos linfoides periféricos de suínos após infecção oral-nasal por meio de experimentos em animais. O estudo descobriu que o vírus se espalhou rapidamente para os linfonodos inguinais superficiais (LIS) após a infecção, e a carga viral nos LIS de todos os suínos falecidos permaneceu altamente consistente com a do baço, confirmando assim, de uma perspectiva patogênica, que o LIS tem uma base científica sólida como uma amostra de triagem para suínos afetados pela PSA.
Vale ressaltar que este estudo também esclareceu os limites de aplicabilidade deste método de amostragem: suínos infectados potencialmente sobreviventes eliminarão gradualmente o vírus de seus linfonodos periféricos, e a carga viral e a variabilidade nos linfonodos são baixas nos estágios iniciais da infecção e durante o período de recuperação. Portanto, o LIS é adequado principalmente para a triagem rápida de suínos mortos ou moribundos, e não é recomendado para vigilância de rotina de patógenos na infecção em estágio inicial ou em animais sobreviventes.
As descobertas deste estudo têm um significado prático claro: a amostragem de LIS não requer dissecção da carcaça, é simples e rápida de operar e pode reduzir significativamente a dificuldade de amostragem no local e os riscos de biossegurança. Ele fornece suporte técnico essencial para otimizar os programas de vigilância passiva da PSA, especialmente para melhorar a capacidade de detectar surtos precocemente.
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