اخبار شرکت آخرین تحقیقات: الگوی توزیع سویه های ضعیف شده تب خوک آفریقایی در اندام های لنفوی محیطی خوک

در تاریخ 4 نوامبر 2025، یک تیم تحقیقاتی از مرکز ملی بیماری‌های حیوانات اگزوتیک آژانس بازرسی مواد غذایی کانادا، مطالعه جدیدی را در مجله *ویروس‌ها* منتشر کرد که پویایی توزیع ژنوم ویروسی را در اندام‌های لنفاوی محیطی خوک‌ها پس از عفونت دهانی-بینی با یک سویه ویروس تب خوکی آفریقایی با حدت متوسط گزارش می‌کرد.

نکات برجسته تحقیق

* برای اولین بار، این مطالعه به طور سیستماتیک توزیع زمانی-فضایی ژنوم ویروسی سویه‌های ضعیف شده تب خوکی آفریقایی استونی 2014 (ژنوتیپ II) و مالت’78 (ژنوتیپ I) را در اندام‌های لنفاوی محیطی خوک‌ها پس از عفونت دهانی-بینی، با مقایسه تفاوت‌های بین دو سویه، به تصویر کشید. استونی 2014 زودتر شناسایی شد و منجر به مرگ و میر سریع‌تر خوک‌ها شد، در حالی که مالت’78 دوره بقای طولانی‌تری داشت.

* این مطالعه تأیید کرد که ژنوم ویروسی را می‌توان در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILN) در اوایل 2-3 روز پس از عفونت شناسایی کرد و به اوج خود در 5-9 روز می‌رسد و با بار ویروسی در طحال بسیار همزمان است.

* نه خوک مرده 100٪ SILN مثبت بودند، با مقادیر Ct که کمتر از یک چرخه با نمونه‌های طحال تفاوت داشتند. این امر چالش‌های عملی نمونه‌های توصیه شده توسط WOAH (نیازمند کالبدشکافی و مستعد آلودگی) را حل کرد و استاندارد طلایی را برای نظارت غیرفعال بدون تخلیه احشا ایجاد کرد.

* خوک‌های زنده مانده روند پاکسازی ویروسی را در 10-18 روز پس از عفونت (dpi) نشان دادند، با افزایش مداوم مقادیر Ct SILN، که شواهد مولکولی را برای "ارزیابی بهبودی" فراهم می‌کند.

* یک آزمایش تشخیصی سه‌گانه که ترکیبی از بافت‌شناسی، ایمونوهیستوشیمی (IHC) و هیبریداسیون درجا (ISH) بود، نشان داد که ویروس فقط ماکروفاژها/سلول‌های دندریتیک را آلوده می‌کند → این سلول‌ها سیتوکین‌های پیش التهابی ترشح می‌کنند → لنفوسیت‌ها، بدون عفونت ویروسی، آپوپتوز/نکروز را تجربه می‌کنند → در نهایت منجر به آسیب بافتی لنفاوی (نکروز خونریزی‌دهنده) می‌شود و مکانیسم غیرمستقیم آسیب ایمنی را روشن می‌کند.

این مطالعه از دو سویه با حدت متوسط، ASFV استونی 2014 و ASFV مالت’78، برای انجام آزمایش‌ها بر روی خوک‌ها با استفاده از روش انتقال تماس میدانی شبیه‌سازی شده استفاده کرد. توزیع دینامیکی ویروس در خون، طحال، لوزه‌ها و گره‌های لنفاوی سطحی مختلف به طور سیستماتیک تجزیه و تحلیل شد.

نتایج نشان داد که ویروس را می‌توان در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی 2-3 روز پس از عفونت شناسایی کرد و به اوج خود در 5-9 روز می‌رسد. این مطالعه همچنین تأیید کرد که محتوای ژنوم ویروسی در طحال خوک‌های مرده با محتوای ژنوم ویروسی در SILN (گره لنفاوی طحال-روده) بسیار سازگار است و از SILN به عنوان یک نوع نمونه بسیار کارآمد برای غربالگری خوک‌های مرده برای تب خوکی آفریقایی پشتیبانی می‌کند.

مقدمه

تب خوکی آفریقایی (ASF) در سراسر جهان شایع است. نظارت غیرفعال که به برداشتن طحال متکی است، زمان‌بر، پرهزینه و دارای خطرات ایمنی زیستی بالایی است. تیم مرکز بیماری‌های خارجی (NCFAD) آژانس بازرسی مواد غذایی کانادا در سال 2022 فرضیه «SILN می‌تواند جایگزین طحال شود» را مطرح کرد، اما داده‌هایی در مورد قابلیت کاربرد آن در مرحله اولیه عفونت و اینکه آیا سویه‌های ضعیف شده به طور مشابه توزیع می‌شوند یا خیر، وجود ندارد. این مطالعه با هدف پر کردن این شکاف انجام شده است.

نتایج

1. تفاوت در زمان تشخیص ویروس:

ویروسی شدن در خوک‌های آلوده به ASFV استونی 2014 از 2 روز پس از عفونت (dpi) آغاز شد، در حالی که در خوک‌های آلوده به ASFV مالت’78 از 3 dpi آغاز شد. هر دو ویروس در SILN در 3 dpi قابل تشخیص بودند و بار ویروسی به سرعت در طول زمان افزایش یافت.

شکل 1. توزیع ژنومی سویه ویروس تب خوکی آفریقایی استونی 2014 در خوک‌های جداگانه (a-c) و نتایج تشخیص میانگین روزانه (با خطای استاندارد مقادیر Ct) (d-f)

(a, d) توزیع را در خون کامل، طحال و لوزه‌ها نشان می‌دهند. (b, e) توزیع را در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILN)، گره‌های لنفاوی فکی (SLN) و گره‌های لنفاوی گردنی سطحی (SCLN) نشان می‌دهند. (c, f) توزیع را در گره‌های لنفاوی پاپلیتئال (PLN)، گره‌های لنفاوی فمورال قدامی (PFLN) و گره‌های لنفاوی گاستروهپاتیک (GHLN) نشان می‌دهند. نوارهای خطا در شکل، خطای استاندارد (SEM) مقادیر Ct را در هر نقطه زمانی و برای هر نوع نمونه نشان می‌دهند.

2. الگوهای اوج و پاکسازی:

بار ویروسی ASFV استونی 2014 در اندام‌های لنفاوی در 7-9 dpi به اوج خود رسید، در حالی که بار ویروسی ASFV مالت’78 در 5-7 dpi به اوج خود رسید. سطوح SILN در خوک‌های مرده با سطوح موجود در طحال قابل مقایسه بود، در حالی که بار ویروسی در اندام‌های لنفاوی محیطی خوک‌های زنده مانده به تدریج کاهش یافت که نشان‌دهنده پاکسازی ویروسی است.

شکل 2. مشاهده بافت‌شناسی و توزیع ویروس در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILNs) خوکچه پس از تلقیح دهانی-بینی با سویه تب خوکی آفریقایی استونی 2014 با حدت متوسط.

در روز 3 پس از تلقیح (3 dpi)، هیچ تغییر بافت‌شناسی قابل توجهی مشاهده نشد: (a) ایمونوهیستوشیمی (IHC) سلول‌های منفرد پراکنده مثبت برای آنتی‌ژن ویروس تب خوکی آفریقایی (ASFV) را نشان داد (فلش)؛ (b) هیبریداسیون درجا (ISH) RNA ASFV را با توزیع مشابه شناسایی کرد (فلش).

در روز 4 پس از تلقیح (4 dpi)، نواحی خونریزی چندکانونی در قشر و محل اتصال قشری-مدولاری مشاهده شد (d، فلش). IHC لکه‌های رنگ‌آمیزی مثبت تک‌سلولی پراکنده آشکاری را نشان داد (e، فلش)، و مواد ژنومی ویروسی که توسط ISH شناسایی شد (f) همان توزیع و شدت را نشان داد.

در روز 5 پس از تلقیح (5 dpi)، نکروز چندکانونی با خونریزی عمدتاً در امتداد محل اتصال قشری-مدولاری ظاهر شد (g، فلش). آنتی‌ژن ویروسی (h) و RNA ویروسی (i) در نواحی مربوط به ضایعات نکروتیک و در سلول‌های پراکنده شبیه ماکروفاژ در سراسر بافت شناسایی شدند.

در روز 7 پس از تلقیح (7 dpi)، خونریزی و نکروز گسترده در محل اتصال قشری-مدولاری و در سراسر ناحیه چندکانونی قشر مشاهده شد (j، فلش). تعداد زیادی آنتی‌ژن ویروس تب خوکی آفریقایی در محل اتصال قشری-مدولاری وجود داشت و برخی از سلول‌های مثبت پراکنده نیز در قشر یافت شدند (k). در مقایسه با نقاط زمانی قبلی، سطح تشخیص اسید نوکلئیک ویروسی در این زمان کاهش یافت (l).

در روز 9 پس از تلقیح (9 dpi)، نکروز و خونریزی گسترده در سراسر گره لنفاوی مشاهده شد (m، فلش)، از جمله تخریب سلول‌های اندوتلیال (m، درج نشان‌دهنده بزرگنمایی بیشتر ناحیه نکروتیک). سطوح آنتی‌ژن ویروسی (n) و اسید نوکلئیک ویروسی (o) که در سراسر ناحیه چندکانونی گره لنفاوی شناسایی شد، کمتر از سطوح مشاهده شده در 7 dpi بود. با این حال، آنتی‌ژن‌های ویروسی هنوز در سلول‌های اندوتلیال عروقی مشاهده شدند (n، o درج).

در روز 11 پس از تلقیح (11 dpi)، نکروز متوسط مشاهده شد (p)، اما رنگ‌آمیزی ایمونولوژیک به طور قابل توجهی کاهش یافت (q، r).

3. ارزش کاربردی SILN:

جمع‌آوری نمونه SILN نیازی به تشریح ندارد و میزان تشخیص ویروس در خوک‌های مرده با میزان موجود در طحال سازگار است. این روش می‌تواند به طور پایدار در مرحله اولیه عفونت (پس از 3 dpi) شناسایی شود و آن را به یک نمونه جایگزین ایده‌آل برای غربالگری خوک‌های مرده تبدیل می‌کند.

شکل 3. توزیع ژنومی ویروس تب خوکی آفریقایی مالت’78 در خوک‌های جداگانه (a-c) و نتایج تشخیص میانگین روزانه (با خطای استاندارد مقدار Ct متوسط) (d-f)

(a,d) توزیع را در خون کامل، طحال و لوزه‌ها نشان می‌دهند. (b,e) توزیع را در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILN)، گره‌های لنفاوی زیر فکی (SLN) و گره‌های لنفاوی گردنی سطحی (SCLN) نشان می‌دهند. (c,f) توزیع را در گره‌های لنفاوی پاپلیتئال (PLN)، گره‌های لنفاوی فمورال قدامی (PFLN) و گره‌های لنفاوی گاستروهپاتیک (GHLN) نشان می‌دهند. نوارهای خطا در شکل، خطای استاندارد (SEM) مقادیر Ct را در هر نقطه زمانی و برای هر نوع نمونه نشان می‌دهند.

4. اعتبار سنجی آسیب‌شناسی و مولکولی:

نتایج ایمونوهیستوشیمی و هیبریداسیون درجا تأیید کرد که روند توزیع آنتی‌ژن‌های ویروسی و اسیدهای نوکلئیک در SILN با نتایج PCR واقعی سازگار بود. تغییرات آسیب‌شناسی مانند نکروز بافت لنفاوی و خونریزی در مراحل بعدی عفونت مشاهده شد و روند پاکسازی ویروسی با ترمیم آسیب‌های آسیب‌شناسی همزمان بود.

شکل 4. مشاهده بافت‌شناسی و توزیع ویروس در گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILNs) خوکچه پس از تلقیح دهانی-بینی با سویه تب خوکی آفریقایی مالت’78 با حدت متوسط.

در روز 4 پس از تلقیح (4 dpi)، هیچ ضایعه آشکاری در بخش‌های HE مشاهده نشد (a). سلول‌های منفرد پراکنده شبیه ماکروفاژ توسط ایمونوهیستوشیمی (IHC) (b، فلش) و هیبریداسیون درجا (ISH) (c، فلش) مشاهده شدند.

در روز 5 پس از تلقیح (5 dpi)، تعداد کمی از کانون‌های نکروتیک کوچک در مغز مشاهده شد (d، فلش). آنتی‌ژن فراوان ویروس تب خوکی آفریقایی (ASFV) (e) و RNA ویروسی (f) در سلول‌هایی با مورفولوژی سازگار با ماکروفاژها و سلول‌های دندریتیک شناسایی شدند.

در روز 7 پس از تلقیح (7 dpi)، نواحی نکروز مغز ظاهر شد (g، فلش). در مقایسه با 5 dpi، مقدار آنتی‌ژن ASFV (h) و RNA ویروسی (i) شناسایی شده کاهش یافت.

در روز 10 پس از تلقیح (10 dpi)، خونریزی و نکروز در درجه اول در محل اتصال قشری-مدولاری مشاهده شد (j)، که با سیگنال‌های رنگ‌آمیزی ضعیف همراه بود (k، l).

در روز 18 پس از تلقیح (18 dpi)، هیپرپلازی واکنشی (m) در بافت SILN مشاهده شد و هیچ سیگنال رنگ‌آمیزی قابل توجهی توسط IHC (n) یا ISH (o) مشاهده نشد.

نتیجه‌گیری

این مطالعه به طور سیستماتیک پویایی توزیع دو سویه ASFV با حدت متوسط را در اندام‌های لنفاوی محیطی خوک‌ها پس از عفونت دهانی-بینی از طریق آزمایش‌های حیوانی روشن کرد. این مطالعه نشان داد که ویروس پس از عفونت به سرعت به گره‌های لنفاوی اینگوینال سطحی (SILN) گسترش می‌یابد و بار ویروسی در SILN همه خوک‌های متوفی با بار ویروسی در طحال بسیار سازگار باقی ماند، بنابراین از منظر بیماری‌زایی تأیید کرد که SILN دارای یک مبنای علمی محکم به عنوان یک نمونه غربالگری برای خوک‌های مبتلا به ASF است.

شایان ذکر است که این مطالعه همچنین حدود کاربردی این روش نمونه‌برداری را روشن کرد: خوک‌های آلوده که احتمالاً زنده می‌مانند، به تدریج ویروس را از گره‌های لنفاوی محیطی خود پاک می‌کنند و بار ویروسی و تنوع در گره‌های لنفاوی در مراحل اولیه عفونت و در طول دوره بهبودی کم است. بنابراین، SILN عمدتاً برای غربالگری سریع خوک‌های مرده یا در حال مرگ مناسب است و برای نظارت معمول بر پاتوژن در عفونت‌های اولیه یا حیوانات زنده مانده توصیه نمی‌شود.

یافته‌های این مطالعه دارای اهمیت عملی روشنی است: نمونه‌برداری SILN نیازی به تشریح لاشه ندارد، ساده و سریع است و می‌تواند به طور قابل توجهی مشکل نمونه‌برداری در محل و خطرات ایمنی زیستی را کاهش دهد. این امر پشتیبانی فنی کلیدی را برای بهینه‌سازی برنامه‌های نظارت غیرفعال ASF، به ویژه برای بهبود توانایی تشخیص زودهنگام شیوع بیماری، فراهم می‌کند.