εταιρικά νέα για Τελευταία έρευνα: Το μοτίβο κατανομής των εξασθενημένων στελεχών της αφρικανικής πανώλης των χοίρων στα περιφερικά λεμφοειδή όργανα των χοίρων

Στις 4 Νοεμβρίου 2025, μια ερευνητική ομάδα από το Εθνικό Κέντρο Εξωτικών Ασθενειών Ζώων του Καναδικού Οργανισμού Επιθεώρησης Τροφίμων δημοσίευσε μια νέα μελέτη στο περιοδικό * Viruses*,για την αναφορά της δυναμικής κατανομής του ιικού γονιδιώματος στα περιφερικά λεμφοειδή όργανα χοίρων μετά από απόκοσμη λοίμωξη από το στόμα έως τη μύτη με μέτρια ιικότητα στελέχους του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων.

Σημαντικά σημεία της έρευνας

* Για πρώτη φορά, this study systematically depicted the temporal-spatial distribution of the viral genome of attenuated African swine fever strains Estonia 2014 (genotype II) and Malta’78 (genotype I) in peripheral lymphoid organs of pigs after oral-nasal infectionΗ Εσθονία 2014 ανιχνεύθηκε νωρίτερα και οδήγησε σε ταχύτερη θνησιμότητα χοίρων, ενώ η Μάλτα 78 είχε μεγαλύτερη περίοδο επιβίωσης.

* Η μελέτη αυτή επιβεβαίωσε ότι το ιικό γονιδίωμα μπορεί να ανιχνευθεί στους επιφανειακούς ισχιακούς λεμφαδένες (SILN) ήδη 2-3 ημέρες μετά τη μόλυνση, φθάνοντας σε μέγιστο επίπεδο στις 5-9 ημέρες,και είναι πολύ συγχρονισμένο με το ιικό φορτίο στη σπλήνα.

* Εννέα νεκροί χοίροι ήταν 100% θετικοί για SILN, με τιμές Ct να διαφέρουν από τα δείγματα σπλήνας κατά λιγότερο από έναν κύκλο.Αυτό έλυσε τις επιχειρησιακές προκλήσεις των δειγμάτων που συνιστά το WOAH (που απαιτούν νεκροψία και είναι επιρρεπείς σε μόλυνση), που καθιερώνει το χρυσό πρότυπο για την παθητική παρακολούθηση χωρίς εκτοξεύσεις.

* Οι χοίροι που επέζησαν έδειξαν τάση ιικής κάθαρσης στα 10-18 dpi, με συνεχώς αυξανόμενες τιμές SILN Ct, παρέχοντας μοριακά στοιχεία για " αξιολόγηση της ανάρρωσης ".

* Μια τριπλή διαγνωστική εξέταση που συνδυάζει ιστοπαθολογία, ανοσοιστοχημεία (IHC),και in situ υβριδικοποίηση (ISH) αποκάλυψε ότι ο ιός μολύνει μόνο τα μακροφάγα/δενδριτικά κύτταρα → αυτά τα κύτταρα εκκρίνουν προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες → λεμφοκύτταρα, χωρίς ιογενή λοίμωξη, υποβάλλονται σε απόπτωση/νεκρόση → οδηγώντας τελικά σε βλάβη του λεμφοειδούς ιστού (αιμορραγική νεκρόση), διευκρινίζοντας τον έμμεσο μηχανισμό της ανοσολογικής βλάβης.

Η παρούσα μελέτη χρησιμοποίησε δύο μέτρια μολυσματικά στελέχη, το ASFV Estonia 2014 και το ASFV Malta ̇78, για τη διεξαγωγή πειραμάτων σε χοίρους με τη χρήση μεθόδου προσομοίωσης μετάδοσης μέσω επαφής πεδίου.Η δυναμική κατανομή του ιού στο αίμα, σπλήνα, αμυγδαλές και διάφορους επιφανειακούς λεμφαδένες αναλύθηκε συστηματικά.

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο ιός μπορεί να ανιχνευθεί σε επιφανειακούς υπομονετικούς λεμφαδένες 2-3 ημέρες μετά τη μόλυνση, φθάνοντας στο αποκορύφωμά του στις 5-9 ημέρες.Η μελέτη επιβεβαίωσε περαιτέρω ότι το περιεχόμενο του ιικού γονιδιώματος στο σπλήνα νεκρών χοίρων ήταν πολύ συμβατό με αυτό του SILN (σπλήνας- εντερικός λεμφαδέντης), υποστηρίζοντας το SILN ως εξαιρετικά αποτελεσματικό τύπο δειγματοληψίας για τον έλεγχο των νεκρών χοίρων για την αφρικανική πανώλη των χοίρων.

Εισαγωγή

Η αφρικανική πανώλη των χοίρων (ΑΠΧ) είναι ανεξέλεγκτη σε παγκόσμιο επίπεδο.Η ομάδα του Κέντρου Εξωτερικών Ασθενειών (NCFAD) του Οργανισμού Επιθεώρησης Τροφίμων του Καναδά πρότεινε την υπόθεση ότι το "SILN μπορεί να αντικαταστήσει τον σπλήνα" το 2022Η μελέτη αυτή έχει ως στόχο να καλύψει αυτό το κενό.

Αποτελέσματα

1Διαφορές στον χρόνο ανίχνευσης του ιού:

Η ιοποίηση σε χοίρους μολυσμένους με ASFV Estonia 2014 ξεκίνησε 2 ημέρες μετά τη μόλυνση (dpi), ενώ σε χοίρους μολυσμένους με ASFV Malta·78 ξεκίνησε στα 3 dpi.και το ιικό φορτίο αυξήθηκε γρήγορα με την πάροδο του χρόνου..

Σχήμα 1. Γενομική κατανομή του στελέχους του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων της Εσθονίας 2014 σε μεμονωμένα χοίρους (α-γ) και ημερήσια μέση τιμή των αποτελεσμάτων ανίχνευσης (με τυποποιημένο σφάλμα μέσων τιμών Ct) (δ-φ)

(α, δ) δείχνουν την κατανομή στο ολικό αίμα, τον σπλήνα και τις αμυγδαλές. (β, ε) δείχνουν την κατανομή στους επιφανειακούς ισχιαίους λεμφαδένες (SILN), τους σαγγοδένες λεμφαδένες (SLN),και επιφανειακούς τραχηλικούς λεμφαδένες (SCLN)· (γ, στ) δείχνουν την κατανομή στους λαβυτεϊκούς λεμφαδένες (PLN), τους εμπρόσθιους μηριαίους λεμφαδένες (PFLN) και τους γαστροηπατικούς λεμφαδένες (GHLN).Οι γραμμές σφάλματος στο σχήμα αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα (SEM) των τιμών Ct σε κάθε χρονικό σημείο και για κάθε τύπο δείγματος..

2. Τυπικά σημεία αιχμής και διαχωρισμού:

Το ιικό φορτίο του ASFV Estonia 2014 στα λεμφοειδή όργανα έφτασε το ανώτατο όριο του 7-9 dpi, ενώ το ιικό φορτίο του ASFV Malta?? 78 έφτασε το ανώτατο όριο του 5-7 dpi. Τα επίπεδα SILN σε νεκρά χοίρους ήταν συγκρίσιμα με αυτά στον σπλήνα,ενώ το ιικό φορτίο στα περιφερικά λεμφοειδή όργανα των επιζώντων χοίρων μειώθηκε σταδιακά, που δείχνει την ιογενή κάθαρση.

Σχήμα 2. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Estonia 2014 strain African swine fever virus.

Την 3η ημέρα μετά την εμβολιασμό (3 dpi) δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές ιστοπαθολογικές αλλαγές:α) Η ανοσοιστοχημεία (IHC) έδειξε διασκορπισμένα μονοκύτταρα θετικά για αντιγόνο του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων (ASFV) (βέλος)Β) Η υβριδικοποίηση in situ (ISH) ανίχνευσε RNA ASFV με παρόμοια κατανομή (βέλος).

Την τέταρτη ημέρα μετά την εμβολιασμό (4 dpi), παρατηρήθηκαν περιοχές πολυφωκικής αιμορραγίας στον φλοιό και την κορτικομεδελώδη διασταύρωση (d, βέλος).Το IHC έδειξε προφανή διασκορπισμένα μονοκύτταρα θετικά λεκέτα χρωματισμού (e, βέλος), και το ιογενετικό υλικό που ανιχνεύθηκε από το ISH (f) έδειξε την ίδια κατανομή και ένταση.

Την 5η ημέρα μετά την εμβολιασμό (5 dpi), εμφανίστηκε πολυοπτική νέκρωση με αιμορραγία κυρίως κατά μήκος της κορτικομεδυλλικής διασταύρωσης (g, βέλος).Το ιογενές αντιγόνο (h) και το ιογενές RNA (i) ανιχνεύθηκαν στις αντίστοιχες περιοχές των νεκρωτικών βλαβών και σε διασκορπισμένα κυττάρα που μοιάζουν με μακροφάγα σε όλο τον ιστό..

Την 7η ημέρα μετά την εμβολιασμό (7 dpi), παρατηρήθηκαν εκτεταμένες αιμορραγίες και νέκρωση στην κορτικομεδυλλική διασταύρωση και σε όλη την πολυφωτική περιοχή του φλοιού (j, βέλος).Ένας μεγάλος αριθμός αντιγόνων του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων ήταν παρόντες στην κορτικομεδελική διασταύρωσηΣε σύγκριση με προηγούμενα χρονικά σημεία, το επίπεδο ανίχνευσης του ιογενούς νουκλεϊκού οξέος μειώθηκε αυτή τη στιγμή (l).

Την 9η ημέρα μετά την εμβολιασμό (9 dpi), παρατηρήθηκαν εκτεταμένες νέκρωση και αιμορραγία σε όλο τον λεμφαδένιο (m, βέλος), συμπεριλαμβανομένης της εκφυλισμού των ενδοθηλιακών κυττάρων (m,Εισαγωγή που δείχνει μεγαλύτερη μεγέθυνση της νεκρωτικής περιοχής)Τα επίπεδα του ιικού αντιγόνου (n) και του ιικού νουκλεϊκού οξέος (o) που ανιχνεύτηκαν σε όλη την πολυφωκική περιοχή του λεμφαδένους ήταν χαμηλότερα από αυτά που παρατηρήθηκαν σε 7 dpi.Τα αντιγόνα του ιού εξακολουθούσαν να παρατηρούνται στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (n, σ.

Την 11η ημέρα μετά την εμβολιασμό (11 dpi), παρατηρήθηκε μέτρια νεκρόση (p), αλλά η ανοσοκαταστολή μειώθηκε σημαντικά (q, r).

3. Αξία εφαρμογής του SILN:

Η συλλογή δείγματος SILN δεν απαιτεί τομή και το ποσοστό ανίχνευσης του ιού σε νεκρούς χοίρους είναι σύμφωνο με αυτό στη σπλήνα.Μπορεί να ανιχνευθεί σταθερά στο πρώιμο στάδιο της μόλυνσης (μετά από 3 dpi), καθιστώντας το ιδανικό εναλλακτικό δείγμα για τον έλεγχο των νεκρών χοίρων.

Σχήμα 3. Γενομική κατανομή του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων της Μάλτας ∆78 σε μεμονωμένα χοίρους (α-γ) και μέσο ημερήσιο αποτέλεσμα ανίχνευσης (με μέσο τυπικό σφάλμα τιμής Ct) (δ-φ)

(α,δ) δείχνουν την κατανομή στο ολικό αίμα, τον σπλήνα και τις αμυγδαλές, (β,ε) δείχνουν την κατανομή στους επιφανειακούς ισχιαίους λεμφαδένες (SILN), στους υποσπονδυλικούς λεμφαδένες (SLN),και επιφανειακούς τραχηλικούς λεμφαδένες (SCLN)· (γ, στ) δείχνουν τη διανομή στους λαβυτεϊκούς λεμφαδένες (PLN), στους εμπρόσθιους μηριαίους λεμφαδένες (PFLN) και στους γαστροηπατικούς λεμφαδένες (GHLN).Οι γραμμές σφάλματος στο σχήμα αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα (SEM) των τιμών Ct σε κάθε χρονικό σημείο και για κάθε τύπο δείγματος..

4Παθολογική και μοριακή επικύρωση:

Τα αποτελέσματα ανοσοιστοχημικής και in situ υβριδικοποίησης επιβεβαίωσαν ότι οι τάσεις κατανομής των ιικών αντιγόνων και των νουκλεϊκών οξέων στο SILN ήταν συμβατές με τα αποτελέσματα της PCR σε πραγματικό χρόνο.Παθολογικές αλλαγές όπως νέκρωση του λεμφοειδούς ιστού και αιμορραγία παρατηρήθηκαν στα μεταγενέστερα στάδια της λοίμωξης., και η διαδικασία απομάκρυνσης του ιού συγχρονίστηκε με την αποκατάσταση της παθολογικής βλάβης.

Σχήμα 4. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Malta’78 strain of African swine fever virus.

Στις 4 ημέρες μετά την εμβολιασμό (4 dpi) δεν παρατηρήθηκαν εμφανείς βλάβες στις ενότητες HE (α).(π.χ. βέλος) και in situ υβριδικοποίηση (ISH) (c), βέλος).

Την 5η ημέρα μετά την εμβολιασμό (5 dpi), παρατηρήθηκε ένας μικρός αριθμός μικρών νεκρωτικών εστίων στον μυελό (d, βέλος).Εντοπίστηκαν άφθονα αντιγόνα (e) του ιού της αφρικανικής πανώλης των χοίρων (ASFV) και ιικό RNA (f) σε κύτταρα με μορφολογία συμβατή με τα μακροφάγα και τα δεντριτικά κύτταρα.

Στις 7 ημέρες μετά την εμβολιασμό (7 dpi), εμφανίστηκαν περιοχές μυελικής νέκρωσης (g, βέλος). Σε σύγκριση με τις 5 dpi, η ποσότητα του αντιγόνου ASFV (h) και του ιικού RNA (i) που ανιχνεύθηκε μειώθηκε.

Την 10η ημέρα μετά την εμβολιασμό (10 dpi), παρατηρήθηκαν αιμορραγία και νέκρωση κυρίως στη σύνδεση φλοιού- μυελού (j), συνοδευόμενη από αδύναμα σήματα ανοσοκαταστολής (k, l).

Την 18η ημέρα μετά την εμβολιασμό (18 dpi), παρατηρήθηκε αντιδραστική υπερπλασία (m) στον ιστό SILN και δεν παρατηρήθηκαν σημαντικά σήματα χρωματισμού ούτε από την IHC (n) ούτε από την ISH (o).

Συμπεράσματα

Η παρούσα μελέτη διευκρίνισε συστηματικά τη δυναμική κατανομής δύο μέτρια ιογενών στελεχών του ASFV στα περιφερειακά λεμφοειδή όργανα των χοίρων μετά από λοίμωξη από το στόμα και τη μύτη μέσω πειραμάτων σε ζώα.Η μελέτη διαπίστωσε ότι ο ιός εξαπλώθηκε γρήγορα στους επιφανειακούς υπογειακούς λεμφαδένες (SILN) μετά τη μόλυνση., και το ιικό φορτίο στο SILN όλων των νεκρών χοίρων παρέμεινε σε υψηλή συμβατότητα με το φορτίο στη σπλήνα,επιβεβαιώνοντας έτσι από παθογόνο άποψη ότι το SILN έχει σταθερή επιστημονική βάση ως δείγμα ελέγχου για χοίρους που πάσχουν από ΑΣΠ.

Αξίζει να τονιστεί ότι η μελέτη αυτή διευκρίνισε επίσης τα όρια εφαρμογής της μεθόδου δειγματοληψίας:Τα πιθανώς επιζώντα μολυσμένα γουρούνια θα καθαρίσουν σταδιακά τον ιό από τους περιφερειακούς λεμφαδένες τους., και το ιικό φορτίο και η μεταβλητότητα στους λεμφαδένες είναι χαμηλά στα αρχικά στάδια της λοίμωξης και κατά τη διάρκεια της περιόδου ανάρρωσης.Το SILN είναι κυρίως κατάλληλο για ταχεία εξέταση νεκρών ή ετοιμοθάνατων χοίρων., και δεν συνιστάται για ρουτίνα παρακολούθηση παθογόνου παράγοντα σε πρώιμο στάδιο μόλυνσης ή σε ζώα που επιβιώνουν.

Τα ευρήματα της παρούσας μελέτης έχουν σαφή πρακτική σημασία: η δειγματοληψία SILN δεν απαιτεί τομή σφαγίου, είναι απλή και γρήγορη στη λειτουργία,και μπορεί να μειώσει σημαντικά τη δυσκολία της δειγματοληψίας επί τόπου και τους κινδύνους βιοασφάλειαςΠαρέχει βασική τεχνική υποστήριξη για τη βελτιστοποίηση των προγραμμάτων παθητικής παρακολούθησης της ΑΣΠ, ιδίως για τη βελτίωση της ικανότητας έγκαιρης ανίχνευσης των επιδημιών.