El 4 de noviembre de 2025, un equipo de investigación del Centro Nacional de Enfermedades Exóticas de Animales de la Agencia Canadiense de Inspección de Alimentos publicó un nuevo estudio en la revista *Viruses*,por el que se informa de la dinámica de distribución del genoma viral en los órganos linfoides periféricos de los cerdos tras una infección oral-nasal por una cepa del virus de la peste porcina africana de virulencia moderada.
Lo más destacado de la investigación
* Por primera vez, this study systematically depicted the temporal-spatial distribution of the viral genome of attenuated African swine fever strains Estonia 2014 (genotype II) and Malta’78 (genotype I) in peripheral lymphoid organs of pigs after oral-nasal infectionEstonia 2014 se detectó antes y dio lugar a una mortalidad porcina más rápida, mientras que Malta 78 tuvo un período de supervivencia más largo.
* Este estudio confirmó que el genoma viral se puede detectar en los ganglios linfáticos inguinales superficiales (SILN) ya a los 2-3 días después de la infección, alcanzando un pico a los 5-9 días,y está altamente sincronizado con la carga viral en el bazo.
* Nueve cerdos muertos fueron 100% SILN positivos, con valores de Ct que difieren de las muestras de bazo en menos de un ciclo.Esto resolvió los desafíos operativos de las muestras recomendadas por WOAH (que requieren una necropsia y son propensas a la contaminación), estableciendo el estándar de oro para el monitoreo pasivo sin evisceración.
* Los cerdos supervivientes mostraron una tendencia de aclaramiento viral de 10 a 18 dpi, con valores de SILN Ct en continuo aumento, proporcionando evidencia molecular para la "evaluación de la recuperación".
* Una prueba de diagnóstico triple que combina histopatología, inmunohistoquímica (IHC),y la hibridación in situ (ISH) reveló que el virus sólo infecta macrófagos / células dendríticas → estas células secretan citoquinas proinflamatorias → linfocitos, sin infección viral, se someten a apoptosis/necrosis → que en última instancia conduce a daño del tejido linfoide (necrosis hemorrágica), aclarando el mecanismo indirecto de la lesión inmune.
En este estudio se utilizaron dos cepas moderadamente virulentas, el ASFV Estonia 2014 y el ASFV Malta78, para realizar experimentos en cerdos utilizando un método de transmisión por contacto de campo simulado.Distribución dinámica del virus en la sangre, el bazo, las amígdalas y varios ganglios linfáticos superficiales fueron analizados sistemáticamente.
Los resultados mostraron que el virus se podía detectar en los ganglios linfáticos inguinales superficiales 2-3 días después de la infección, alcanzando su punto máximo a los 5-9 días.El estudio confirmó además que el contenido del genoma viral en el bazo de los cerdos muertos era muy consistente con el de SILN (núcleo linfático intestinal del bazo), apoyando el SILN como un tipo de muestra altamente eficiente para la detección de la peste porcina africana en los cerdos muertos.
Introducción
La peste porcina africana (PPA) es una enfermedad que se propaga en todo el mundo y que requiere mucho tiempo, mucha mano de obra y un alto riesgo de bioseguridad.El equipo del Centro de Enfermedades Externas de la Agencia de Inspección de Alimentos de Canadá (NCFAD) propuso la hipótesis de que "la SILN puede reemplazar el bazo" en 2022En el presente estudio se pretende cubrir este vacío, pero aún faltan datos sobre su aplicabilidad en las primeras etapas de la infección y si las cepas atenuadas se distribuyen de manera similar.
Resultados
1Diferencias en el tiempo de detección del virus:
La virulización en cerdos infectados con el VAS Estonia 2014 comenzó a los 2 días después de la infección (dpi), mientras que en cerdos infectados con el VAS Malta78, comenzó a los 3 dpi; ambos virus fueron detectables en el SILN a los 3 dpi,y la carga viral aumentó rápidamente con el tiempo.
Figura 1. Distribución genómica de la cepa del virus de la peste porcina africana de Estonia 2014 en cerdos individuales (a-c) y resultados medios diarios de detección (con error estándar de los valores medios de Ct) (d-f)
(a, d) muestran la distribución en sangre entera, bazo y amígdalas; (b, e) muestran la distribución en ganglios linfáticos inguinales superficiales (SILN), ganglios linfáticos mandibulares (SLN),y ganglios linfáticos cervicales superficiales (SCLN); (c, f) muestran la distribución en los ganglios linfáticos poplíteos (PLN), en los ganglios linfáticos femorales anteriores (PFLN) y en los ganglios linfáticos gastrohepáticos (GHLN).Las barras de error de la figura representan el error estándar (SEM) de los valores de Ct en cada momento y para cada tipo de muestra..
2- Picos y patrones de salida:
La carga viral del ASFV Estonia 2014 en los órganos linfoides alcanzó su punto máximo en 7-9 dpi, mientras que la del ASFV Malta?? 78 alcanzó su punto máximo en 5-7 dpi. Los niveles de SILN en cerdos muertos fueron comparables a los del bazo,mientras que la carga viral en los órganos linfoides periféricos de los cerdos sobrevivientes disminuyó gradualmente, lo que indica el aclaramiento viral.
Figura 2. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Estonia 2014 strain African swine fever virus.
En el día 3 después de la inoculación (3 dpi), no se observaron cambios histopatológicos significativos:(a) La inmunohistoquímica (IHC) mostró células individuales dispersas positivas para el antígeno del virus de la peste porcina africana (VPAA) (flecha)b) La hibridación in situ (ISH) detectó ARN ASFV con una distribución similar (flecha).
El día 4 después de la inoculación (4 dpi), se observaron zonas de hemorragia multifocal en la unión cortical y corticomedular (d, flecha).El IHC mostró manchas de tinción positivas de una sola célula dispersas (e, flecha), y el material genómico viral detectado por ISH (f) mostró la misma distribución e intensidad.
Al quinto día después de la inoculación (5 dpi), la necrosis multifocal con hemorragia apareció principalmente a lo largo de la unión corticomedular (g, flecha).El antígeno viral (h) y el ARN viral (i) se detectaron en las áreas correspondientes de las lesiones necróticas y en células similares a los macrófagos diseminadas por todo el tejido..
Al séptimo día después de la vacunación (7 dpi), se observaron hemorragias y necrosis extensas en la unión corticomedular y en toda la zona multifocal de la corteza (j, flecha).Una gran cantidad de antígenos del virus de la peste porcina africana estaban presentes en la unión corticomedularEn comparación con los puntos de tiempo anteriores, el nivel de detección del ácido nucleico viral se redujo en este momento (l).
El día 9 después de la inoculación (9 dpi), se observaron necrosis y hemorragias extensas en todo el ganglio linfático (m, flecha), incluyendo degeneración de células endoteliales (m, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha, flecha).inserción que muestra una mayor ampliación de la zona necrótica)Los niveles de antígeno viral (n) y ácido nucleico viral (o) detectados en toda la zona multifocal del ganglio linfático fueron inferiores a los observados a 7 dpi.Los antígenos virales aún se observaron en las células endoteliales vasculares (n, o inserción).
Al día 11 después de la vacunación (11 dpi), se observó una necrosis moderada (p), pero el mantenimiento de la inmunidad se redujo significativamente (q, r).
3Valor de aplicación del SILN:
La recogida de muestras SILN no requiere disección, y la tasa de detección del virus en cerdos muertos es consistente con la del bazo.Se puede detectar de manera estable en la etapa temprana de la infección (después de 3 dpi), lo que la convierte en una muestra alternativa ideal para la detección de cerdos muertos.
Gráfico 3. Distribución genómica del virus de la peste porcina africana de Malta-78 en cerdos individuales (a-c) y resultados medios diarios de detección (con error estándar del valor medio de Ct) (d-f)
(a,d) muestran la distribución en sangre entera, bazo y amígdalas; (b,e) muestran la distribución en ganglios linfáticos inguinales superficiales (SILN), ganglios linfáticos submandibulares (SLN),y ganglios linfáticos cervicales superficiales (SCLN); (c, f) muestran la distribución en los ganglios linfáticos poplíteos (PLN), en los ganglios linfáticos femorales anteriores (PFLN) y en los ganglios linfáticos gastrohepáticos (GHLN).Las barras de error de la figura representan el error estándar (SEM) de los valores de Ct en cada momento y para cada tipo de muestra..
4Validación patológica y molecular:
Los resultados de la hibridación inmunohistoquímica e in situ confirmaron que las tendencias de distribución de los antígenos virales y los ácidos nucleicos en SILN eran consistentes con los resultados de PCR en tiempo real.Se observaron cambios patológicos tales como necrosis del tejido linfoide y hemorragia en las últimas etapas de la infección., y el proceso de eliminación viral se sincronizó con la reparación del daño patológico.
Figura 4. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Malta’78 strain of African swine fever virus.
En el día 4 después de la inoculación (4 dpi), no se observaron lesiones obvias en las secciones HE (a).Las condiciones de producción y de producción de los productos de la industria de la energía son las siguientes:, flecha).
El día 5 después de la inoculación (5 dpi), se observaron un pequeño número de focos necróticos pequeños en la médula (d, flecha).Se detectaron abundantes antígenos (e) del virus de la peste porcina africana (VPAA) y ARN viral (f) en células con una morfología consistente con los macrófagos y las células dendríticas.
Al séptimo día después de la vacunación (7 dpi), aparecieron áreas de necrosis medular (g, flecha).
Al día 10 después de la vacunación (10 dpi), se observaron hemorragias y necrosis principalmente en la unión cortico-medular (j), acompañadas de débiles señales de inmunización (k, l).
Al día 18 después de la inoculación (18 dpi), se observó hiperplasia reactiva (m) en el tejido SILN, y no se observaron señales significativas de tinción ni en IHC (n) ni en ISH (o).
Conclusión
El presente estudio aclaró sistemáticamente la dinámica de distribución de dos cepas moderadamente virulentas de VASPA en los órganos linfoides periféricos de los cerdos después de una infección oral-nasal mediante experimentos con animales.El estudio encontró que el virus se extendió rápidamente a los ganglios linfáticos inguinales superficiales (SILN) después de la infección., y la carga viral en el SILN de todos los cerdos fallecidos se mantuvo muy consistente con la del bazo,confirmando así desde una perspectiva patógena que el SILN tiene una base científica sólida como muestra de detección de cerdos afectados por la peste porcina africana.
Cabe destacar que este estudio también aclaró los límites de aplicabilidad de este método de muestreo:Los cerdos potencialmente infectados sobrevivientes eliminarán gradualmente el virus de sus ganglios linfáticos periféricos., y la carga viral y la variabilidad en los ganglios linfáticos son bajas en las primeras etapas de la infección y durante el período de recuperación.El SILN es adecuado principalmente para la detección rápida de cerdos muertos o moribundos, y no se recomienda para la vigilancia rutinaria de patógenos en animales infectados en etapa temprana o sobrevivientes.
Los resultados de este estudio tienen una clara importancia práctica: la toma de muestras SILN no requiere disección de la carcasa, es sencilla y rápida de operar,y puede reducir significativamente la dificultad del muestreo in situ y los riesgos de bioseguridadProporciona un apoyo técnico clave para optimizar los programas de vigilancia pasiva de la PPA, especialmente para mejorar la capacidad de detectar los brotes a tiempo.
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