ข่าว บริษัท เกี่ยวกับ การวิจัยล่าสุด: รูปแบบการกระจายของสายพันธุ์โรคหมูแอฟริกันที่อ่อนแอในอวัยวะหลอดเลือดขอด

เมื่อวันที่ 4 พฤศจิกายน 2525 ทีมวิจัยจากศูนย์แห่งชาติสําหรับโรคสัตว์แปลกประหลาดของสํานักงานตรวจสอบอาหารแคนาดา ได้ตีพิมพ์การศึกษาใหม่ในวารสาร * Viruses *เรื่อง การรายงานเรื่องไดนามิกการกระจายพันธุกรรมของไวรัสในอวัยวะหลอดเลือดขอดบริเวณของหมู หลังจากติดเชื้อทางช่องทางปากและจมูกด้วยเชื้อไวรัสโรคหมูแอฟริกันที่รุนแรงปานกลาง.

จุดเด่นของการวิจัย

*เป็นครั้งแรก this study systematically depicted the temporal-spatial distribution of the viral genome of attenuated African swine fever strains Estonia 2014 (genotype II) and Malta’78 (genotype I) in peripheral lymphoid organs of pigs after oral-nasal infectionเอสโตเนีย 2014 ถูกตรวจพบก่อน และส่งผลให้การตายของหมูเร็วขึ้น ในขณะที่มาลต้า 78 มีระยะเวลาการอยู่รอดที่ยาวกว่า

* การศึกษานี้ยืนยันว่าพันธุกรรมไวรัสสามารถตรวจพบได้ในเส้นเลือดขอดในอ่างทวาร (SILN) ตั้งแต่ 2-3 วันหลังการติดเชื้อและมีความสอดคล้องกับจํานวนไวรัสในกระต่าย.

* หมูตาย 9 ตัว มีผลบวก SILN 100% โดยมีค่า Ct ต่างกันจากตัวอย่างกลากน้อยกว่า 1 วงจรวิธีนี้แก้ปัญหาด้านการปฏิบัติงานของตัวอย่างที่แนะนําโดย WOAH (ต้องการการศพและมีความเสี่ยงต่อการติดเชื้อ), กําหนดมาตรฐานทองสําหรับการติดตามแบบปาสิฟ โดยไม่ต้องตัดท้อง

* หมูที่รอดชีวิตแสดงแนวโน้มการคลียร์เนสของไวรัสที่ 10-18 dpi โดยมีค่า SILN Ct เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่อง ซึ่งเป็นหลักฐานโมเลกุลสําหรับ "การประเมินการฟื้นฟู"

* การทดสอบการวินิจฉัยสามครั้งรวมกัน อาการทางชีวภาพ, อินมูโนฮิสโตเคมี (IHC)และ in situ hybridization (ISH) พบว่าไวรัสติดเชื้อแค่เซลล์แมคโรฟาจ /เซลล์ดันดริต → เซลล์เหล่านี้แยกซิตโคกีนต่อการอักเสบ → เลมฟอไซต์, โดยไม่ติดเชื้อไวรัส, ผ่านการตาย/ตาย → ส่งผลให้เกิดความเสียหายต่อเนื้อเยื่อลมฟอย (เลือดออกเนคโรซิส), ทําให้กลไกโดยตรงของการบาดเจ็บทางภูมิคุ้มกันได้ชัดเจน

การศึกษาครั้งนี้ใช้สายพันธุ์ ASFV Estonia 2014 และ ASFV Malta 78 ที่มีเชื้อไวรัสระดับปานกลางในการทดลองกับหมู โดยใช้วิธีการถ่ายส่งที่ติดต่อสนามแบบจําลองการกระจายไวรัสในเลือดกลาก, แอนดิสิล และหลากหลายเส้นเลือดขอดชั้นนอก

ผลการตรวจแสดงว่าไวรัสสามารถตรวจพบในเส้นเลือดขอดในอาการอ่อน 2-3 วันหลังจากติดเชื้อ และสูงสุดในช่วง 5-9 วันการศึกษายังยืนยันว่า เนื้อหาของพันธุกรรมไวรัสในตับหมูที่ตาย มีความสอดคล้องสูงกับ SILN (ตับลมฟ์ตับหมู), สนับสนุน SILN เป็นชนิดตัวอย่างที่มีประสิทธิภาพสูงสําหรับการสกรีนหมูตายสําหรับโรคแพ้หมูแอฟริกัน

คําแนะนํา

โรคไข้หมูแอฟริกัน (ASF) อยู่ในระดับระดับโลก การตรวจติดตามโดยเฉพาะที่พึ่งพาการกําจัดตัวกระจก เป็นการใช้เวลาและแรงงานมาก และมีอันตรายต่อความปลอดภัยทางชีวภาพสูงทีมศูนย์โรคภายนอกของสํานักงานตรวจสอบอาหารแคนาดา (NCFAD) ได้เสนอสมมุติฐานว่า "SILN สามารถแทนที่กระต่าย" ในปี 2022การศึกษาครั้งนี้มีเป้าหมายที่จะครอบคลุมช่องว่างนี้

ผล

1ความแตกต่างในเวลาการตรวจพบไวรัส:

การระบายไวรัสในหมูที่ติดเชื้อ ASFV Estonia 2014 เริ่มขึ้น 2 วันหลังการติดเชื้อ (dpi) ในขณะที่หมูที่ติดเชื้อ ASFV Malta78 เริ่มขึ้น 3 dpiและความจุของไวรัสเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วตามเวลา.

ภาพที่ 1 การกระจายพันธุกรรมของเอสโตเนีย 2014 เชื้อไวรัสโรคแพ้หมูแอฟริกันในหมูแต่ละตัว (a-c) และผลการตรวจพบเฉลี่ยต่อวัน (มีค่าความผิดพลาดมาตรฐานของค่า Ct กลาง) (d-f)

(a, d) แสดงการกระจายในเลือดทั้งตัว, แมลง, และทอนซิล; (b, e) แสดงการกระจายในเส้นเลือดขอดอ่อนผิว (SILN), เส้นเลือดขอดแมนดิบูลาร์ (SLN),และเส้นเลือดขอดคอมผิว (SCLN); (c, f) แสดงการกระจายในเส้นเลือดขอด popliteal (PLN), เส้นเลือดขอด femoral anterior (PFLN), และเส้นเลือดขอด gastrohepatic (GHLN)รางความผิดพลาดในรูปแสดงความผิดพลาดมาตรฐาน (SEM) ของค่า Ct ในแต่ละจุดเวลาและสําหรับแต่ละชนิดตัวอย่าง.

2สภาพสูงสุดและระยะว่าง:

อัตราการติดเชื้อของ ASFV Estonia 2014 ในอวัยวะลมฟอยด์สูงสุด 7-9 dpi ส่วนของ ASFV Malta 78 สูงสุด 5-7 dpiขณะที่โหลดไวรัสในอวัยวะหลอดเลือดขอดด้านนอกของหมูที่รอดชีวิตลดลงอย่างช้า ๆ, แสดงถึงการเคลียร์ไวรัส

รูปที่ 2 Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Estonia 2014 strain African swine fever virus.

ในวันที่ 3 หลังการฉีดวัคซีน (3 dpi) ไม่พบการเปลี่ยนแปลงทางทางโรคทางกระดูกเลือดที่สําคัญ:(a) อินมูโนไฮสโตเคมี (IHC) แสดงว่าเซลล์เดี่ยวที่กระจายกระจายเป็นบวกต่ออานติเจนของไวรัสโรคหมูแอฟริกัน (ASFV) (ลูกศร); b) การผสมพันธุ์ในสถานที่ (ISH) ค้นพบ RNA ASFV ด้วยการกระจายที่คล้ายกัน (ลูกศร)

ในวันที่ 4 หลังการฉีดวัคซีน (4 dpi) มีการสังเกตเห็นพื้นที่เลือดออกหลายจุดที่สมองชั้นนอกและจุดเชื่อมของสมองชั้นนอก (d, ลูกศร)IHC แสดงให้เห็นที่ชัดเจนกระจายกระจายเซลล์เดียว, ลูกศร) และวัสดุพันธุกรรมไวรัสที่ตรวจพบโดย ISH (f) แสดงการกระจายและความเข้มข้นเดียวกัน

ในวันที่ 5 หลังการฉีดวัคซีน (5 dpi) โมลติโฟคัล เนคโรซัสที่มีการหลั่งเลือดปรากฏเป็นหลักตามเส้นแยก corticomedullary (g, ลูกศร)ไวรัสแอนติเจน (h) และไวรัส RNA (i) ถูกตรวจพบในพื้นที่ที่ตรงกันของโรคเนครอต และในเซลล์คล้ายกับมะเร็งกระจายไปทั่วเนื้อเยื่อ.

ในวันที่ 7 หลังการฉีดเชื้อ (7 dpi) มีการเลือดออกและเนครอซิสที่กว้างขวางที่จุดต่อเนื่อง corticomedullary และทั่วบริเวณ multifocal ของ cortex (j, ลูกศร)จํานวนมากของสารต้านเชื้อไวรัสโรคหมูแอฟริกันมีอยู่ที่จุดเชื่อม corticomedullary, และมีเซลล์บวกบางส่วนที่กระจายอยู่ในสมอง (k) เมื่อเทียบกับช่วงเวลาก่อนหน้านี้, ระดับการตรวจพบของกรดนิวเคลียนไวรัสลดลงในช่วงเวลานี้ (l).

ในวันที่ 9 หลังการฉีดวัคซีน (9 dpi) มีการคล้องเลือดและการหลั่งเลือดที่กว้างขวางทั่วหลอดลมฟ์ (m, arrow) รวมถึงการเสื่อมเสื่อมของเซลล์ endothelial (m, dpi)ใส่ที่แสดงให้เห็นการขยายขนาดที่สูงกว่าของบริเวณที่ตาย)ระดับของไวรัสอานติเจน (n) และไวรัสนิวเคลียนกรด (o) ที่ตรวจพบทั่วบริเวณมัลติโฟกัลของเส้นเลือดขอดต่ํากว่าที่สังเกตได้ที่ 7 dpiอานติเจนไวรัสยังคงสังเกตในเซลล์ endothelial เส้นเลือด (n, o ลง).

ในวันที่ 11 หลังการฉีดวัคซีน (11 dpi) มีการสังเกตเห็นอาการเสื่อมที่ปานกลาง (p) แต่การรักษาภูมิคุ้มกันลดลงอย่างมีนัยสําคัญ (q, r)

3ค่าใช้งานของ SILN:

การเก็บตัวอย่าง SILN ไม่จําเป็นต้องผ่าตัด และอัตราการตรวจพบไวรัสในหมูที่ตายตรงกับอัตราการตรวจพบในกระต่ายสามารถตรวจพบได้อย่างมั่นคงในช่วงต้นของโรค (หลังจาก 3 dpi)ทําให้มันเป็นตัวอย่างสํารองที่เหมาะสมสําหรับการตรวจสอบหมูตาย

รูปที่ 3 การกระจายพันธุกรรมของไวรัสโรคหมูแอฟริกันมาลต้า 78 ในหมูแต่ละตัว (a-c) และผลการตรวจพบรายวันเฉลี่ย (มีค่า Ct ผิดปกติเฉลี่ย) (d-f)

(a,d) แสดงการกระจายในเลือดทั้งตัว, แมลง, และทอนไส้; (b,e) แสดงการกระจายในเส้นเลือดขอดอ่อนข้างบน (SILN), เส้นเลือดขอดใต้คัน (SLN),และเส้นเลือดขอดคอมผิว (SCLN); (c,f) แสดงการกระจายในหลอดลมฟ์ popliteal (PLN), หลอดลมฟ์ femoral anterior (PFLN) และหลอดลมฟ์ gastrohepatic (GHLN)รากความผิดพลาดในรูปแสดงความผิดพลาดมาตรฐาน (SEM) ของค่า Ct ในแต่ละจุดเวลาและสําหรับแต่ละชนิดตัวอย่าง.

4การตรวจสอบทางโรคและโมเลกุล

ผลการผสมพันธุ์ทางภูมิคุ้มกันและทางเคมีในสถานที่ยืนยันว่าแนวโน้มการกระจายของสารต้านเชื้อไวรัสและกรดนิวเคลียนใน SILN สอดคล้องกับผลการทดลอง PCR ในเวลาจริงการเปลี่ยนแปลงทางโรค เช่น โรคเนคโรสเนื้อเยื่อลมฟอยด์และเลือดออกถูกสังเกตในระยะหลังของโรคติดเชื้อ, และกระบวนการกําจัดไวรัสถูกปรับปรุงพร้อมกับการซ่อมแซมความเสียหายทางโรค

รูปที่ 4 Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Malta’78 strain of African swine fever virus.

ในวันที่ 4 หลังการฉีดวัคซีน (4 dpi) ไม่พบการบาดเจ็บที่ชัดเจนในส่วน HE (a)และ in situ hybridization (ISH) (c, ลูกศร)

ในวันที่ 5 หลังการฉีดวัคซีน (5 dpi) มีการสังเกตเห็นจุดเนคโรติกขนาดเล็กจํานวนน้อยในสมอง (d, ลูกศร)อานติเจน (e) และ RNA ไวรัส (f) ของไวรัสไข้หมูแอฟริกัน (ASFV) ที่มีจํานวนมากถูกตรวจพบในเซลล์ที่มีมอร์โฟโลยีที่สอดคล้องกับเซลล์แมคโรฟาจและเซลล์เดนดริต.

ในวันที่ 7 หลังการฉีดเชื้อ (7 dpi) มีบริเวณที่เกิดเนคโรซเมดูล่าร์ปรากฏ (g, ลูกศร) เมื่อเทียบกับ 5 dpi จํานวนของสารต้าน ASFV (h) และ RNA ไวรัส (i) ที่ตรวจพบลดลง

ในวันที่ 10 หลังการฉีดฉีด (10 dpi) มีการเลือดออกและเนคโรซิสที่สังเกตเห็นเป็นหลักในจุดเชื่อม cortico-medullary (j) พร้อมด้วยสัญญาณการรักษาภูมิคุ้มกันที่อ่อนแอ (k, l)

ในวันที่ 18 หลังการฉีดฉีด (18 dpi) มีการสังเกตเห็นอาการไฮเปอร์พลาซี (m) ในเนื้อเยื่อ SILN และไม่มีสัญญาณการสีที่สําคัญที่สังเกตเห็นจาก IHC (n) หรือ ISH (o)

สรุป

การศึกษานี้ได้ชี้ให้เห็นอย่างเป็นระบบถึงไดนามิกการกระจายของสายพันธุ์ ASFV ที่มีเชื้อไวรัสอย่างปานกลางสองสาย ในอวัยวะลมฟอยด์ทางด้านนอกของหมูหลังจากติดเชื้อทางช่องทางปากและจมูก ผ่านการทดลองกับสัตว์การศึกษาพบว่าไวรัสแพร่กระจายอย่างรวดเร็วไปยังเส้นเลือดขอดในอาการอาการและจํานวนไวรัสใน SILN ของหมูที่ตายทั้งหมดยังคงสอดคล้องมากกับจํานวนในกลากโดยยืนยันจากมุมมองของโรคว่า SILN มีพื้นฐานทางวิทยาศาสตร์ที่มั่นคงเป็นตัวอย่างการตรวจสอบสําหรับหมูที่ป่วย ASF.

คุ้มค่าที่จะเน้นว่าการศึกษานี้ยังทําความชัดเจนขอบเขตของการใช้วิธีการเก็บตัวอย่างนี้:หมูที่ติดเชื้อที่อาจรอดชีวิต จะค่อยๆ ทําให้ไวรัสหายไปจากเส้นเลือดขอด, และความจุของไวรัสและความแตกต่างในเส้นเลือดขอดต่ําในช่วงแรกของโรคติดเชื้อและในช่วงช่วงการฟื้นฟูSILN เหมาะสําหรับการตรวจฉลากไวของหมูที่ตายหรือกําลังจะตายและไม่แนะนําสําหรับการตรวจสอบเชื้อโรคประจําการในช่วงต้นของโรค หรือสัตว์ที่รอดชีวิต

สรุปจากการศึกษานี้มีความสําคัญทางการปฏิบัติอย่างชัดเจน: การเก็บตัวอย่าง SILN ไม่จําเป็นต้องแยกเนื้อสัตว์และสามารถลดความยากลําบากในการเก็บตัวอย่างในสถานที่และความเสี่ยงต่อความปลอดภัยทางชีวภาพได้อย่างมากมันให้การสนับสนุนทางเทคนิคสําคัญในการปรับปรุงโปรแกรมการเฝ้าระวังโรค ASF โดยเฉพาะการปรับปรุงความสามารถในการตรวจพบการระบาดในระยะต้น