Vào ngày 4 tháng 11 năm 2025, một nhóm nghiên cứu từ Trung tâm Quốc gia về Bệnh động vật kỳ lạ của Cơ quan Kiểm tra Thực phẩm Canada đã xuất bản một nghiên cứu mới trong tạp chí * Virus*,báo cáo về động lực phân bố gen virus trong các cơ quan bạch huyết ngoại vi của lợn sau khi nhiễm trùng đường mũi bằng miệng với chủng virus dịch tả lợn châu Phi có tính độc tính trung bình.
Điểm nổi bật của nghiên cứu
* Lần đầu tiên, this study systematically depicted the temporal-spatial distribution of the viral genome of attenuated African swine fever strains Estonia 2014 (genotype II) and Malta’78 (genotype I) in peripheral lymphoid organs of pigs after oral-nasal infectionEstonia 2014 đã được phát hiện sớm hơn và dẫn đến tỷ lệ tử vong lợn nhanh hơn, trong khi Malta 78 có thời gian sống lâu hơn.
* Nghiên cứu này đã xác nhận rằng bộ gen virus có thể được phát hiện trong các hạch bạch huyết dưới chân (SILN) ngay từ 2-3 ngày sau khi nhiễm trùng, đạt đỉnh ở 5-9 ngày,và được đồng bộ hóa cao với tải viral trong lá lách.
* Chín con lợn chết là 100% dương tính với SILN, với các giá trị Ct khác với các mẫu lá lách ít hơn một chu kỳ.Điều này giải quyết các thách thức hoạt động của các mẫu được khuyến cáo của WOAH (yêu cầu khám nghiệm tử thi và dễ bị ô nhiễm), thiết lập tiêu chuẩn vàng cho giám sát thụ động mà không cần cắt ruột.
* Lợn sống sót cho thấy xu hướng thanh tẩy virus ở mức 10-18 dpi, với giá trị SILN Ct tăng liên tục, cung cấp bằng chứng phân tử cho " đánh giá phục hồi ".
* Một xét nghiệm chẩn đoán ba lần kết hợp histopathology, immunohistochemistry (IHC),và lai tạo in situ (ISH) cho thấy virus chỉ lây nhiễm các tế bào vĩ mô / tế bào cuống mọng → các tế bào này tiết ra các cytokine chống viêm → tế bào lympho, mà không có nhiễm virus, trải qua apoptosis / necrosis → cuối cùng dẫn đến tổn thương mô bạch huyết (hémorrhagic necrosis), làm rõ cơ chế gián tiếp của tổn thương miễn dịch.
Nghiên cứu này sử dụng hai chủng độc tính trung bình, ASFV Estonia 2014 và ASFV Malta ¢78, để tiến hành các thí nghiệm trên lợn bằng phương pháp truyền tiếp xúc thực địa mô phỏng.Sự phân bố năng động của virus trong máu, lá lách, amygdala, và các hạch bạch huyết bề mặt khác nhau đã được phân tích một cách có hệ thống.
Các kết quả cho thấy virus có thể được phát hiện trong các hạch bạch huyết dưới lưng bề mặt 2-3 ngày sau khi nhiễm trùng, đạt đỉnh cao vào 5-9 ngày.Nghiên cứu cũng xác nhận rằng hàm lượng gen virus trong lá lách của lợn chết rất phù hợp với SILN (hạch bạch huyết đường ruột), hỗ trợ SILN như một loại mẫu hiệu quả cao để sàng lọc lợn chết cho dịch tả lợn châu Phi.
Lời giới thiệu
Dịch tả lợn châu Phi (ASF) đang lan rộng trên toàn thế giới. Kiểm tra thụ động dựa trên việc loại bỏ lá lách tốn nhiều thời gian, lao động và mang lại rủi ro an toàn sinh học cao.Nhóm Trung tâm các bệnh bên ngoài của Cơ quan Kiểm tra Thực phẩm Canada (NCFAD) đã đề xuất giả thuyết rằng "SILN có thể thay thế lá lách" vào năm 2022, nhưng vẫn thiếu dữ liệu về khả năng áp dụng của nó trong giai đoạn đầu của nhiễm trùng và liệu các chủng suy giảm có được phân phối tương tự hay không.
Kết quả
1Sự khác biệt trong thời gian phát hiện virus:
Sự lây nhiễm virus ở lợn bị nhiễm ASFV Estonia 2014 bắt đầu 2 ngày sau khi nhiễm (dpi), trong khi ở lợn bị nhiễm ASFV Malta78 nó bắt đầu ở mức 3 dpi; cả hai virus đều có thể phát hiện trong SILN ở mức 3 dpi,và viral load tăng nhanh theo thời gian.
Hình 1. Phân bố gen của chủng virus dịch tả lợn châu Phi Estonia 2014 ở từng con lợn (a-c) và kết quả phát hiện trung bình hàng ngày (với sai số chuẩn của giá trị Ct trung bình) (d-f)
(a, d) cho thấy sự phân bố trong máu nguyên chất, lá lách và amygdala; (b, e) cho thấy sự phân bố trong các hạch bạch huyết dưới chân (SILN), hạch bạch huyết dưới chân (SLN),và hạch bạch huyết cổ tử cung (SCLN); (c, f) cho thấy sự phân bố trong hạch bạch huyết popliteal (PLN), hạch bạch huyết đùi trước (PFLN) và hạch bạch huyết gan (GHLN).Các thanh lỗi trong hình tượng đại diện cho lỗi chuẩn (SEM) của các giá trị Ct tại mỗi thời điểm và cho mỗi loại mẫu.
2. Các mô hình đỉnh và thông minh:
Mức tải virus của ASFV Estonia 2014 ở các cơ quan bạch huyết đạt đỉnh ở mức 7-9 dpi, trong khi ASFV Malta?? 78 đạt đỉnh ở mức 5-7 dpi. Mức SILN ở lợn chết tương đương với mức trong lá lách,trong khi tải lượng virus trong các cơ quan bạch huyết ngoại vi của lợn sống sót giảm dần, cho thấy thanh thải virus.
Hình 2. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Estonia 2014 strain African swine fever virus.
Vào ngày 3 sau tiêm chủng (3 dpi), không có thay đổi bệnh lý học đáng kể được quan sát thấy:a) Immunohistochemistry (IHC) cho thấy các tế bào đơn phân tán dương tính với kháng nguyên virus dịch tả lợn châu Phi (ASFV) (mũi tên)b) Sự lai tạo in situ (ISH) phát hiện ra RNA ASFV có phân bố tương tự (dấu).
Vào ngày 4 sau khi tiêm chủng (4 dpi), các vùng xuất huyết đa tâm được quan sát thấy tại vỏ não và giao điểm corticomedullary (d, mũi tên).IHC cho thấy rõ ràng rải rác một tế bào màu dương tính (e, mũi tên), và vật liệu gen virus được phát hiện bởi ISH (f) cho thấy sự phân bố và cường độ tương tự.
Vào ngày 5 sau tiêm chủng (5 dpi), necrosis đa tâm với chảy máu xuất hiện chủ yếu dọc theo khớp corticomedullary (g, mũi tên).Viral antigen (h) và viral RNA (i) được phát hiện ở các khu vực tương ứng của tổn thương chết và trong các tế bào giống như đại thực bào rải rác trên toàn bộ mô.
Vào ngày 7 sau khi tiêm chủng (7 dpi), xuất huyết rộng rãi và tử vong đã được quan sát thấy tại các giao điểm corticomedullary và trên toàn bộ khu vực đa tâm của vỏ não (j, mũi tên).Một số lượng lớn các kháng nguyên virus dịch tả lợn châu Phi có mặt tại các giao điểm corticomedullary, và một số tế bào dương tính lan tỏa cũng được tìm thấy trong vỏ não (k). so với các thời điểm trước đó, mức độ phát hiện axit nucleic virus đã giảm vào thời điểm này (l).
Vào ngày 9 sau tiêm chủng (9 dpi), necrosis và xuất huyết rộng rãi đã được quan sát thấy trên toàn bộ hạch bạch huyết (m, mũi tên), bao gồm thoái hóa tế bào nội mô (m, dpi),Nhập cho thấy sự phóng to cao hơn của khu vực chết)Mức độ kháng nguyên virus (n) và axit nucleic virus (o) được phát hiện trong toàn bộ khu vực đa tâm của hạch bạch huyết thấp hơn so với mức 7 dpi.Các kháng nguyên virus vẫn được quan sát thấy trong các tế bào nội mô mạch mạch (n, o nhập).
Vào ngày 11 sau tiêm chủng (11 dpi), necrosis vừa phải đã được quan sát thấy (p), nhưng khả năng miễn dịch giảm đáng kể (q, r).
3Giá trị ứng dụng của SILN:
Việc lấy mẫu SILN không yêu cầu mổ xẻ và tỷ lệ phát hiện virus ở lợn chết phù hợp với tỷ lệ trong lá lách.Nó có thể được phát hiện ổn định trong giai đoạn nhiễm trùng sớm (sau 3 dpi), làm cho nó trở thành một mẫu thay thế lý tưởng để sàng lọc lợn chết.
Hình 3. Phân bố gen của virus dịch tả lợn châu Phi Malta 78 ở từng con lợn (a-c) và kết quả phát hiện hàng ngày trung bình (với sai số chuẩn giá trị Ct trung bình) (d-f)
(a,d) cho thấy sự phân bố trong máu nguyên chất, lá lách và amygdala; (b,e) cho thấy sự phân bố trong các hạch bạch huyết dưới chân (SILN), hạch bạch huyết dưới chân (SLN),và hạch bạch huyết cổ tử cung (SCLN); (c,f) cho thấy sự phân bố trong hạch bạch huyết popliteal (PLN), hạch bạch huyết đùi trước (PFLN) và hạch bạch huyết gan (GHLN).Các thanh lỗi trong hình tượng đại diện cho lỗi chuẩn (SEM) của các giá trị Ct tại mỗi thời điểm và cho mỗi loại mẫu.
4Chứng minh bệnh lý và phân tử:
Kết quả lai tạo miễn dịch hóa học và in situ xác nhận rằng xu hướng phân phối kháng nguyên virus và axit nucleic trong SILN phù hợp với kết quả PCR thời gian thực.Những thay đổi bệnh lý như necrosis mô bạch huyết và xuất huyết đã được quan sát thấy trong giai đoạn sau của nhiễm trùng., và quá trình loại bỏ virus được đồng bộ hóa với việc sửa chữa tổn thương bệnh lý.
Hình 4. Histopathological observation and virus distribution in superficial inguinal lymph nodes (SILNs) of piglets after oral-nasal inoculation with moderately virulent Malta’78 strain of African swine fever virus.
Vào ngày 4 sau tiêm chủng (4 dpi), không có tổn thương rõ ràng được quan sát thấy ở các phần HE (a).mũi tên) và lai tạo tại chỗ (ISH) (c, mũi tên).
Vào ngày 5 sau tiêm chủng (5 dpi), một số lượng nhỏ các nốt chết nhỏ được quan sát thấy trong tủy (d, mũi tên).Các kháng nguyên virus dịch tả lợn châu Phi (ASFV) phong phú (e) và RNA virus (f) đã được phát hiện trong các tế bào có hình thái phù hợp với tế bào vĩ mô và tế bào sợi dây chuyền.
Vào ngày 7 sau tiêm chủng (7 dpi), các khu vực tử thần tủy xuất hiện (g, mũi tên). so với 5 dpi, lượng kháng nguyên ASFV (h) và RNA virus (i) được phát hiện đã giảm.
Vào ngày 10 sau khi tiêm chủng (10 dpi), xuất huyết và tử vong được quan sát thấy chủ yếu ở khớp cortico-medullary (j), kèm theo các tín hiệu miễn dịch yếu (k, l).
Vào ngày 18 sau tiêm chủng (18 dpi), tăng huyết áp phản ứng (m) được quan sát thấy trong mô SILN, và không có tín hiệu nhuộm đáng kể được quan sát thấy cho cả IHC (n) hoặc ISH (o).
Kết luận
Nghiên cứu này đã giải thích một cách có hệ thống về động lực phân phối của hai chủng ASFV có tính độc tính trung bình trong các cơ quan bạch huyết ngoại biên của lợn sau nhiễm trùng mũi-miệng thông qua các thí nghiệm trên động vật.Nghiên cứu cho thấy rằng virus lan nhanh đến các hạch bạch huyết dưới chân (SILN) bề mặt sau khi nhiễm trùng, và khối lượng virus trong SILN của tất cả lợn chết vẫn rất phù hợp với số lượng trong lá lách,do đó xác nhận từ góc độ gây bệnh rằng SILN có cơ sở khoa học vững chắc như một mẫu sàng lọc cho lợn bị bệnh ASF.
Cần nhấn mạnh rằng nghiên cứu này cũng làm rõ ranh giới áp dụng phương pháp lấy mẫu này:Lợn bị nhiễm bệnh có khả năng sống sót sẽ dần dần loại bỏ virus khỏi hạch bạch huyết ngoại vi của chúng, và khối lượng virus và sự biến đổi trong hạch bạch huyết thấp trong giai đoạn đầu của nhiễm trùng và trong thời gian phục hồi.SILN chủ yếu thích hợp cho việc sàng lọc nhanh các con lợn chết hoặc chết, và không được khuyến cáo cho giám sát bệnh nhân thường xuyên ở động vật nhiễm trùng giai đoạn đầu hoặc sống sót.
Các kết quả của nghiên cứu này có ý nghĩa thực tế rõ ràng: lấy mẫu SILN không yêu cầu mổ xác, đơn giản và nhanh chóng hoạt động,và có thể làm giảm đáng kể khó khăn của việc lấy mẫu tại chỗ và rủi ro an toàn sinh họcNó cung cấp hỗ trợ kỹ thuật quan trọng để tối ưu hóa các chương trình giám sát thụ động của ASF, đặc biệt là để cải thiện khả năng phát hiện dịch bệnh sớm.
Người liên hệ: Mr. Huang Jingtai
Tel: 17743230916
Vietnamese
