notizie sull'azienda Ricerche più recenti: Modello di distribuzione dei ceppi attenuati della peste suina africana negli organi linfoidi periferici dei suini

Il 4 novembre 2025, un team di ricerca del Centro nazionale per le malattie degli animali esotici dell'Agenzia canadese per l'ispezione degli alimenti ha pubblicato un nuovo studio sulla rivista *Viruses*, riportando le dinamiche di distribuzione del genoma virale negli organi linfoidi periferici dei suini dopo infezione orale-nasale con un ceppo di virus della peste suina africana moderatamente virulento.

Punti salienti della ricerca

* Per la prima volta, questo studio ha descritto sistematicamente la distribuzione temporale-spaziale del genoma virale dei ceppi attenuati della peste suina africana Estonia 2014 (genotipo II) e Malta’78 (genotipo I) negli organi linfoidi periferici dei suini dopo infezione orale-nasale, confrontando le differenze tra i due ceppi. Estonia 2014 è stata rilevata prima e ha portato a una mortalità suina più rapida, mentre Malta’78 ha avuto un periodo di sopravvivenza più lungo.

* Questo studio ha confermato che il genoma virale può essere rilevato nei linfonodi inguinali superficiali (SILN) già 2-3 giorni dopo l'infezione, raggiungendo un picco a 5-9 giorni, ed è altamente sincronizzato con la carica virale nella milza.

* Nove suini morti erano positivi al 100% ai SILN, con valori Ct che differivano dai campioni di milza di meno di un ciclo. Ciò ha risolto le sfide operative dei campioni raccomandati dall'OIE (che richiedono la necroscopia e sono soggetti a contaminazione), stabilendo lo standard di riferimento per il monitoraggio passivo senza eviscerazione.

* I suini sopravvissuti hanno mostrato una tendenza alla clearance virale a 10-18 dpi, con valori Ct SILN in continuo aumento, fornendo prove molecolari per la "valutazione del recupero".

* Un test diagnostico triplo che combina istopatologia, immunoistochimica (IHC) e ibridazione in situ (ISH) ha rivelato che il virus infetta solo i macrofagi/cellule dendritiche → queste cellule secernono citochine pro-infiammatorie → linfociti, senza infezione virale, subiscono apoptosi/necrosi → portando in definitiva a danni al tessuto linfoide (necrosi emorragica), chiarendo il meccanismo indiretto del danno immunitario.

Questo studio ha utilizzato due ceppi moderatamente virulenti, ASFV Estonia 2014 e ASFV Malta’78, per condurre esperimenti sui suini utilizzando un metodo di trasmissione simulato sul campo. La distribuzione dinamica del virus nel sangue, nella milza, nelle tonsille e in vari linfonodi superficiali è stata analizzata sistematicamente.

I risultati hanno mostrato che il virus poteva essere rilevato nei linfonodi inguinali superficiali 2-3 giorni dopo l'infezione, raggiungendo il picco a 5-9 giorni. Lo studio ha inoltre confermato che il contenuto del genoma virale nella milza dei suini morti era altamente coerente con quello nei SILN (linfonodo splenico-intestinale), supportando i SILN come un tipo di campione altamente efficiente per lo screening dei suini morti per la peste suina africana.

Introduzione

La peste suina africana (PSA) è dilagante a livello globale. Il monitoraggio passivo basato sulla rimozione della milza richiede tempo, manodopera ed è ad alto rischio di biosicurezza. Il team del Centro per le malattie esterne (NCFAD) dell'Agenzia canadese per l'ispezione degli alimenti ha proposto l'ipotesi che "i SILN possano sostituire la milza" nel 2022, ma mancano dati sulla sua applicabilità nella fase iniziale dell'infezione e sul fatto che i ceppi attenuati siano distribuiti in modo simile. Questo studio mira a colmare questa lacuna.

Risultati

1. Differenze nei tempi di rilevamento del virus:

La viralizzazione nei suini infettati da ASFV Estonia 2014 è iniziata a 2 giorni post-infezione (dpi), mentre nei suini infettati da ASFV Malta’78 è iniziata a 3 dpi; entrambi i virus sono stati rilevabili nei SILN a 3 dpi e la carica virale è aumentata rapidamente nel tempo.

Figura 1. Distribuzione genomica del ceppo del virus della peste suina africana Estonia 2014 nei singoli suini (a-c) e risultati medi giornalieri di rilevamento (con errore standard dei valori Ct medi) (d-f)

(a, d) mostrano la distribuzione nel sangue intero, nella milza e nelle tonsille; (b, e) mostrano la distribuzione nei linfonodi inguinali superficiali (SILN), nei linfonodi mandibolari (SLN) e nei linfonodi cervicali superficiali (SCLN); (c, f) mostrano la distribuzione nei linfonodi poplitei (PLN), nei linfonodi femorali anteriori (PFLN) e nei linfonodi gastroepatici (GHLN). Le barre di errore nella figura rappresentano l'errore standard (SEM) dei valori Ct ad ogni punto temporale e per ogni tipo di campione.

2. Modelli di picco e clearance:

La carica virale di ASFV Estonia 2014 negli organi linfoidi ha raggiunto il picco a 7-9 dpi, mentre quella di ASFV Malta’78 ha raggiunto il picco a 5-7 dpi. I livelli di SILN nei suini morti erano paragonabili a quelli nella milza, mentre la carica virale negli organi linfoidi periferici dei suini sopravvissuti è gradualmente diminuita, indicando la clearance virale.

Figura 2. Osservazione istopatologica e distribuzione del virus nei linfonodi inguinali superficiali (SILN) dei suinetti dopo inoculazione orale-nasale con il ceppo Estonia 2014 moderatamente virulento del virus della peste suina africana.

Al giorno 3 post-inoculazione (3 dpi), non sono state osservate modificazioni istopatologiche significative: (a) L'immunoistochimica (IHC) ha mostrato singole cellule sparse positive per l'antigene del virus della peste suina africana (ASFV) (freccia); (b) L'ibridazione in situ (ISH) ha rilevato l'RNA ASFV con una distribuzione simile (freccia).

Al giorno 4 post-inoculazione (4 dpi), sono state osservate aree emorragiche multifocali nella corteccia e nella giunzione corticomedullare (d, freccia). L'IHC ha mostrato evidenti chiazze di colorazione positiva sparse a singola cellula (e, freccia) e il materiale genomico virale rilevato dall'ISH (f) ha mostrato la stessa distribuzione e intensità.

Al giorno 5 post-inoculazione (5 dpi), è apparsa necrosi multifocale con emorragia principalmente lungo la giunzione corticomedullare (g, freccia). L'antigene virale (h) e l'RNA virale (i) sono stati rilevati nelle aree corrispondenti delle lesioni necrotiche e nelle cellule simili a macrofagi sparse in tutto il tessuto.

Al giorno 7 post-inoculazione (7 dpi), sono state osservate emorragie ed necrosi estese nella giunzione corticomedullare e in tutta l'area multifocale della corteccia (j, freccia). Un gran numero di antigeni del virus della peste suina africana era presente nella giunzione corticomedullare e alcune cellule positive sparse sono state trovate anche nella corteccia (k). Rispetto ai punti temporali precedenti, il livello di rilevamento dell'acido nucleico virale è stato ridotto in questo momento (l).

Al giorno 9 post-inoculazione (9 dpi), sono state osservate necrosi ed emorragie estese in tutto il linfonodo (m, freccia), inclusa la degenerazione delle cellule endoteliali (m, riquadro che mostra un ingrandimento maggiore dell'area necrotica). I livelli di antigene virale (n) e acido nucleico virale (o) rilevati in tutta l'area multifocale del linfonodo erano inferiori a quelli osservati a 7 dpi. Tuttavia, gli antigeni virali sono stati ancora osservati nelle cellule endoteliali vascolari (n, o riquadro).

All'11° giorno post-inoculazione (11 dpi), è stata osservata necrosi moderata (p), ma l'immunocolorazione è stata significativamente ridotta (q, r).

3. Valore applicativo dei SILN:

Il prelievo di campioni SILN non richiede la dissezione e il tasso di rilevamento del virus nei suini morti è coerente con quello nella milza. Può essere rilevato stabilmente nella fase iniziale dell'infezione (dopo 3 dpi), rendendolo un campione alternativo ideale per lo screening dei suini morti.

Figura 3. Distribuzione genomica del virus della peste suina africana Malta’78 nei singoli suini (a-c) e risultati medi giornalieri di rilevamento (con errore standard del valore Ct medio) (d-f)

(a,d) mostrano la distribuzione nel sangue intero, nella milza e nelle tonsille; (b,e) mostrano la distribuzione nei linfonodi inguinali superficiali (SILN), nei linfonodi sottomandibolari (SLN) e nei linfonodi cervicali superficiali (SCLN); (c,f) mostrano la distribuzione nei linfonodi poplitei (PLN), nei linfonodi femorali anteriori (PFLN) e nei linfonodi gastroepatici (GHLN). Le barre di errore nella figura rappresentano l'errore standard (SEM) dei valori Ct ad ogni punto temporale e per ogni tipo di campione.

4. Validazione patologica e molecolare:

I risultati immunoistochimici e di ibridazione in situ hanno confermato che gli andamenti di distribuzione degli antigeni virali e degli acidi nucleici nei SILN erano coerenti con i risultati della PCR in tempo reale. Nelle fasi successive dell'infezione sono state osservate alterazioni patologiche come necrosi ed emorragia del tessuto linfoide e il processo di clearance virale è stato sincronizzato con la riparazione del danno patologico.

Figura 4. Osservazione istopatologica e distribuzione del virus nei linfonodi inguinali superficiali (SILN) dei suinetti dopo inoculazione orale-nasale con il ceppo Malta’78 moderatamente virulento del virus della peste suina africana.

Al giorno 4 post-inoculazione (4 dpi), non sono state osservate lesioni evidenti nelle sezioni HE (a). Singole cellule sparse, simili a macrofagi, sono state osservate mediante immunoistochimica (IHC) (b, freccia) e ibridazione in situ (ISH) (c, freccia).

Al giorno 5 post-inoculazione (5 dpi), un piccolo numero di piccoli focolai necrotici è stato osservato nel midollo (d, freccia). L'abbondante antigene del virus della peste suina africana (ASFV) (e) e l'RNA virale (f) sono stati rilevati in cellule con morfologia coerente con macrofagi e cellule dendritiche.

Al giorno 7 post-inoculazione (7 dpi), sono apparse aree di necrosi midollare (g, freccia). Rispetto a 5 dpi, la quantità di antigene ASFV (h) e RNA virale (i) rilevata è stata ridotta.

Al giorno 10 post-inoculazione (10 dpi), emorragia e necrosi sono state osservate principalmente nella giunzione cortico-midollare (j), accompagnate da deboli segnali di immunocolorazione (k, l).

Al giorno 18 post-inoculazione (18 dpi), è stata osservata iperplasia reattiva (m) nel tessuto SILN e non sono stati osservati segnali di colorazione significativi né dall'IHC (n) né dall'ISH (o).

Conclusione

Questo studio ha chiarito sistematicamente le dinamiche di distribuzione di due ceppi ASFV moderatamente virulenti negli organi linfoidi periferici dei suini dopo infezione orale-nasale attraverso esperimenti sugli animali. Lo studio ha scoperto che il virus si è diffuso rapidamente ai linfonodi inguinali superficiali (SILN) dopo l'infezione e la carica virale nei SILN di tutti i suini deceduti è rimasta altamente coerente con quella nella milza, confermando così da una prospettiva patogena che i SILN hanno una solida base scientifica come campione di screening per i suini colpiti da PSA.

Vale la pena sottolineare che questo studio ha anche chiarito i limiti di applicabilità di questo metodo di campionamento: i suini infetti potenzialmente sopravvissuti elimineranno gradualmente il virus dai loro linfonodi periferici e la carica virale e la variabilità nei linfonodi sono basse nelle prime fasi dell'infezione e durante il periodo di recupero. Pertanto, i SILN sono adatti principalmente per lo screening rapido di suini morti o morenti e non sono raccomandati per la sorveglianza di routine dei patogeni nelle prime fasi dell'infezione o negli animali sopravvissuti.

I risultati di questo studio hanno un chiaro significato pratico: il campionamento dei SILN non richiede la dissezione della carcassa, è semplice e veloce da eseguire e può ridurre significativamente la difficoltà del campionamento in loco e i rischi per la biosicurezza. Fornisce un supporto tecnico fondamentale per l'ottimizzazione dei programmi di sorveglianza passiva della PSA, in particolare per migliorare la capacità di rilevare precocemente i focolai.