bedrijfsnieuws over [Test] De belangrijkste factor die van invloed is op de ASF-testresultaten: correcte bemonstering en opslag

Testen is de meest cruciale component van preventie en bestrijding van Afrikaanse varkenspest. De wetenschappelijke en gestandaardiseerde aard van monsterneming heeft echter niet alleen invloed op de testresultaten, maar kan ook de veiligheid van varkensbedrijven beïnvloeden.

In 2020 heeft China de nationale norm 'Diagnostische technologie voor Afrikaanse varkenspest' uitgevaardigd, GB/T 18648-2020. Deze norm is op 14 december 2020 afgekondigd en geïmplementeerd door de Staatsadministratie voor Marktregulering en de Standaardisatieadministratie van China.

Deze nationale norm omvat biosafety-maatregelen, klinische diagnose, laboratoriumdiagnostische monsterneming en -verwerking, methoden zoals fluorescentie kwantitatieve PCR en een uitgebreide beoordeling.

Een compleet detectieproces van ASF-pathogeen fluorescentie kwantitatieve PCR omvat over het algemeen: monsterneming en opslag; monstervoorbehandeling; extractie van nucleïnezuren en bereiding van oplossingen; real-time fluorescentie kwantitatieve PCR-amplificatiereactie; en uitvoer en analyse van testresultaten.

Vanuit een laboratoriumperspectief is een correcte monsterneming en transport van cruciaal belang om nauwkeurige laboratoriumtestresultaten te garanderen.

Welke monsters moeten worden verzameld? Wat is de juiste hoeveelheid? Hoe moeten ze op een gestandaardiseerde manier worden verzameld? Wat moet er na de verzameling worden gedaan? Als monsters niet onmiddellijk worden getest, hoe moeten ze dan worden bewaard? Wat moet er met de geteste monsters gebeuren?

Door de nationale norm voor ASF-diagnostische technologie en de 'Technische specificaties voor quarantaine van Afrikaanse varkenspest' (SN/T 1559-2010) uit 2010 te interpreteren, presenteren we de belangrijkste punten om te overwegen met betrekking tot klinische monsterneming, opslag en transport:

#01 Antistollingsbloed (volbloed):

Verzameling: Trek 5 ml volbloed af van de halsader, vena cava inferior of marginale oorader met behulp van een steriele buis (vacutainer) die een antistollingsmiddel (EDTA-paarse dop) bevat. Als het dier overleden is, kan bloed uit het hart worden afgenomen, maar dit moet onmiddellijk gebeuren. Transporteer bloed gekoeld en bewaar het bij aankomst in het testlaboratorium bij -70°C.

Opmerking: Gebruik geen steriele bloedafnamebuizen met heparine (groene dop), omdat dit de PCR-reactie remt en gemakkelijk valse negatieven veroorzaakt.

#02 Serum:

Verzameling: Verzamel een bloedmonster van 5 ml met behulp van een niet-antistollingsvacutainer uit de halsader, vena cava inferior of marginale oorader, of tijdens de autopsie. Het wordt aanbevolen om het monster eerst 14-18 uur bij 4°C te incuberen om het stolsel te scheiden. Gooi het stolsel weg en centrifugeer gedurende 10-15 minuten. Verzamel de heldere supernatant (serum). Serummonsters kunnen direct na scheiding worden getest of gekoeld worden verzonden. Bij aankomst in het laboratorium kunnen ze bevroren worden bewaard bij -70°C.

Opmerking: Als het serum rood is, duidt dit op hemolyse en kan het niet worden gebruikt voor ELISA-testen.

#03 Orgaan- en weefselmonsters

Verzameling: Doelorganen zijn de milt, lymfeknopen, amandelen en nieren. De milt en lymfeknopen hebben doorgaans de hoogste virale lading. Transporteer monsters gekoeld en dien ze zo snel mogelijk in bij het laboratorium. Als tijdige levering niet mogelijk is, kunnen monsters worden bewaard in een vriezer of in vloeibare stikstof. Virussen kunnen worden geïnactiveerd door ze minstens 30 minuten in 10% gebufferde formaline te weken voordat ze op PCR worden getest.

#04 Zachte teken

Verzameling: Verzamel zachte teken en houd ze zo veel mogelijk in leven om het behoud van virussen daarin te garanderen en DNA-degradatie te voorkomen. Verzamelde zachte teken kunnen in een schroefdopbuis/buisje met een kleine hoeveelheid aarde worden geplaatst, bekleed met gaas en op kamertemperatuur worden bewaard voor transport. Bij aankomst in het testlaboratorium invriezen bij -70°C of in vloeibare stikstof plaatsen. Als alleen morfologische observatie wordt uitgevoerd, kunnen monsters worden bewaard in 100% alcohol.

Opmerking: Dezelfde procedure is van toepassing op andere insecten, zoals muggen en vliegen. Houd ze zo veel mogelijk in leven voor testen, of bewaar ze direct in vloeibare stikstof.

#05 Omgevingsmonsters

Verzameling: Verzamel meerdere omgevingsswabs, zoals uitwerpselen, spoelwater en voer, en bewaar ze bij 4°C.

#06 Speeksel- en swabmonsters

Verzameling: Bevestig een katoenen touw of gaas aan de reling. Nadat het varken op natuurlijke wijze heeft gekauwd, verzamel je de vloeistof die uit het touw of gaas is geëxtraheerd. Bewaar het monster in een schone reageerbuis of ziplock-zak. Verzegel en bewaar in een gekoelde container voor transport.

Gebruik voor neusswabs een steriele wattenstaafje. Steek deze 3-5 cm in de neusholte van het varken onder een hoek van 45°. Draai de swab voorzichtig 3-5 keer om de niesreflex van het varken te stimuleren. Wacht tot de swab vochtig is. Bewaar het wattenstaafjesmonster in een aparte schone reageerbuis of verzegelde zak. Verzegel en bewaar in een gekoelde container voor transport.

Gebruik voor anale swabs een steriele wattenstaafje gedrenkt in zoutoplossing. Steek het monster 2-3 cm in de anus van het varken. Draai de swab voorzichtig en wrijf ermee. Bewaar het monster vervolgens in een schone reageerbuis of verzegelde zak. Bewaar in een gekoelde container voor transport.

Hoogwaardige monsters zijn de belangrijkste basis voor het garanderen van de nauwkeurigheid van laboratoriumtestresultaten. Door gestandaardiseerde monsterneming, conservering en voorbehandeling kwaliteitscontrole kan de integriteit van biologische moleculen effectief worden gehandhaafd, wat voldoende experimentele ondersteuning biedt voor daaropvolgende nauwkeurige detectie van nucleïnezuren en betrouwbare diagnose.

Monsteropslag en -transport

Om de nauwkeurigheid van de testresultaten te garanderen, raden we aan om monsters zo snel mogelijk na verzameling naar een aangewezen laboratorium te sturen voor testen. Gebruik een bezorgmethode voor de volgende dag en maak gebruik van transport in de koudeketen om monsterdegradatie en verlies van werkzaamheid te voorkomen.