hakkında şirket haberleri [Test] ASF test sonuçlarını etkileyen temel faktör: doğru numune toplama ve saklama

Test yapmak, Afrika domuz vebasının önlenmesi ve kontrolünün en önemli bileşenidir. Ancak, numune alımının bilimsel ve standartlaştırılmış doğası sadece test sonuçlarını etkilemekle kalmaz, aynı zamanda domuz çiftliklerinin güvenliğini de etkileyebilir.

2020'de Çin, "Afrika domuz vebası teşhis teknolojisi" GB/T 18648-2020 ulusal standardını yayınladı. Bu standart, 14 Aralık 2020'de Devlet Pazar Düzenleme İdaresi ve Çin Standardizasyon İdaresi tarafından yayınlandı ve uygulandı.

Bu ulusal standart, biyogüvenlik önlemlerini, klinik teşhisi, laboratuvar teşhis numunesi toplama ve işleme, floresan kantitatif PCR gibi yöntemleri ve kapsamlı değerlendirmeyi kapsamaktadır.

Tam bir ASF patojeni floresan kantitatif PCR tespit süreci genellikle şunları içerir: numune toplama ve saklama; numune ön işleme; nükleik asit ekstraksiyonu ve solüsyon hazırlama; gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR amplifikasyon reaksiyonu; ve test sonucu çıktısı ve analizi.

Bir laboratuvar perspektifinden bakıldığında, doğru numune toplama ve nakli, doğru laboratuvar test sonuçlarını sağlamak için çok önemlidir.

Hangi numuneler toplanmalıdır? Uygun miktar nedir? Bunlar nasıl standart bir şekilde toplanmalıdır? Toplandıktan sonra ne yapılmalıdır? Numuneler derhal test edilmezse, nasıl saklanmalıdır? Test edilen numunelere ne yapılmalıdır?

ASF teşhis teknolojisi için ulusal standardı ve 2010'da yayınlanan "Afrika Domuz Vebası Karantinası için Teknik Şartnameler"i (SN/T 1559-2010) yorumlayarak, klinik numune toplama, saklama ve nakli ile ilgili dikkate alınması gereken önemli noktaları sunuyoruz:

#01 Antikoagülan Kan (Tam Kan):

Toplama: Steril bir tüp (vakutainer) kullanarak, antikoagülan (EDTA-mor kapak) içeren juguler ven, vena kava inferior veya marjinal kulak veninden 5 ml tam kan çekin. Hayvan ölmüşse, kan kalpten alınabilir, ancak bu derhal yapılmalıdır. Kanı soğutulmuş olarak taşıyın ve test laboratuvarına ulaştığında -70°C'de saklayın.

Not: PCR reaksiyonunu inhibe edeceği ve yanlış negatiflere kolayca neden olacağı için heparin (yeşil kapak) içeren steril kan toplama tüpleri kullanmayın.

#02 Serum:

Toplama: Juguler ven, vena kava inferior veya marjinal kulak veninden veya nekropsi sırasında antikoagülan içermeyen bir vakutainer kullanarak 5 ml'lik bir kan örneği toplayın. Pıhtıyı ayırmak için numuneyi önce 4°C'de 14-18 saat inkübe etmeniz önerilir. Pıhtıyı atın ve 10-15 dakika santrifüjleyin. Berrak süpernatantı (serum) toplayın. Serum örnekleri ayrıldıktan hemen sonra test edilebilir veya soğutulmuş olarak gönderilebilir. Laboratuvara ulaştığında, -70°C'de dondurulmuş olarak saklanabilir.

Not: Serum kırmızı ise, hemoliz olduğunu gösterir ve ELISA testleri için kullanılamaz.

#03 Organ ve Doku Örnekleri

Toplama: Hedef organlar arasında dalak, lenf düğümleri, bademcikler ve böbrekler bulunur. Dalak ve lenf düğümleri tipik olarak en yüksek viral yüklere sahiptir. Numuneleri soğutulmuş olarak taşıyın ve mümkün olan en kısa sürede laboratuvara gönderin. Zamanında teslimat mümkün değilse, numuneler bir dondurucuda veya sıvı azotta saklanabilir. Virüsler, PCR testinden önce en az 30 dakika boyunca %10 tamponlu formalinde bekletilerek inaktive edilebilir.

#04 Yumuşak Keneler

Toplama: Yumuşak keneleri toplayın, içlerindeki virüslerin korunmasını ve DNA bozulmasını önlemek için mümkün olduğunca canlı tutun. Toplanan yumuşak keneler, az miktarda toprakla kaplı, gazlı bezle kaplı, vidalı kapaklı bir şişeye/tüpe yerleştirilebilir ve nakliye için oda sıcaklığında saklanabilir. Test laboratuvarına ulaştığında, -70°C'de dondurun veya sıvı azot içine yerleştirin. Sadece morfolojik gözlem yapılıyorsa, numuneler %100 alkolde saklanabilir.

Not: Aynı prosedür, sivrisinekler ve sinekler gibi diğer böcekler için de geçerlidir. Test için onları mümkün olduğunca canlı tutun veya doğrudan sıvı azot içinde saklayın.

#05 Çevresel Örnekler

Toplama: Dışkı, çöp ve yem gibi çoklu çevresel bezler toplayın ve 4°C'de saklayın.

#06 Tükürük ve Bez Örnekleri

Toplama: Bir pamuk ipi veya gazlı bezi korkuluğa sabitleyin. Domuz doğal olarak çiğnedikten sonra, ipten veya gazlı bezden çıkarılan sıvıyı toplayın. Numuneyi temiz bir test tüpünde veya kilitli bir torbada saklayın. Nakliye için soğutulmuş bir kapta kapatın ve saklayın.

Burun bezleri için steril bir pamuklu çubuk kullanın. Domuzun burun boşluğuna 45°'lik bir açıyla 3-5 cm sokun. Domuzun hapşırma refleksini uyarmak için çubuğu nazikçe 3-5 kez döndürün. Çubuğun nemlenmesini bekleyin. Pamuklu çubuk örneğini ayrı bir temiz test tüpünde veya kapalı bir torbada saklayın. Nakliye için soğutulmuş bir kapta kapatın ve saklayın.

Anal bezler için, tuzlu solüsyona batırılmış steril bir pamuklu çubuk kullanın. Örneği domuzun anüsüne 2-3 cm sokun. Çubuğu nazikçe döndürün ve ovun. Ardından, örneği temiz bir test tüpünde veya kapalı bir torbada saklayın. Nakliye için soğutulmuş bir kapta saklayın.

Yüksek kaliteli numuneler, laboratuvar test sonuçlarının doğruluğunu sağlamanın temelini oluşturur. Standart numune toplama, koruma ve ön işleme kalite kontrolü yoluyla, biyolojik moleküllerin bütünlüğü etkili bir şekilde korunabilir, bu da sonraki doğru nükleik asit tespiti ve güvenilir teşhis için yeterli deneysel destek sağlar.

Numune Saklama ve Nakli

Test sonuçlarının doğruluğunu sağlamak için, numunelerin toplandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede test için belirlenmiş bir laboratuvara gönderilmesini öneririz. Numune bozulmasını ve etkinliğin kaybını önlemek için ertesi gün teslimat yöntemini kullanın ve soğuk zincir taşımacılığından yararlanın.