notícias da empresa sobre [Testando] O principal fator que afeta os resultados do teste de PPA: coleta e armazenamento corretos da amostra

O teste é o componente mais crucial da prevenção e controle da peste suína africana. No entanto, a natureza científica e padronizada da amostragem não apenas impacta os resultados dos testes, mas também pode impactar a segurança das granjas suínas.

Em 2020, a China emitiu o padrão nacional "Tecnologia de diagnóstico da peste suína africana", GB/T 18648-2020. Este padrão foi promulgado e implementado pela Administração Estatal de Regulamentação do Mercado e pela Administração de Padronização da China em 14 de dezembro de 2020.

Este padrão nacional abrange medidas de biossegurança, diagnóstico clínico, coleta e processamento de amostras para diagnóstico laboratorial, métodos como PCR quantitativo por fluorescência e avaliação abrangente.

Um processo completo de detecção de PCR quantitativo por fluorescência de patógenos da PSA geralmente inclui: coleta e armazenamento de amostras; pré-tratamento da amostra; extração de ácido nucleico e preparação da solução; reação de amplificação de PCR quantitativo em tempo real; e saída e análise dos resultados do teste.

De uma perspectiva laboratorial, a coleta e o transporte adequados de amostras são fundamentais para garantir resultados precisos dos testes laboratoriais.

Quais amostras devem ser coletadas? Qual é a quantidade apropriada? Como elas devem ser coletadas de maneira padronizada? O que deve ser feito após a coleta? Se as amostras não forem testadas imediatamente, como devem ser armazenadas? O que deve ser feito com as amostras testadas?

Ao interpretar o padrão nacional para tecnologia de diagnóstico da PSA e as "Especificações Técnicas para Quarentena da Peste Suína Africana" (SN/T 1559-2010) emitidas em 2010, apresentamos os pontos-chave a serem considerados em relação à coleta, armazenamento e transporte de amostras clínicas:

#01 Sangue anticoagulado (sangue total):

Coleta: Retire 5 ml de sangue total da veia jugular, veia cava inferior ou veia auricular marginal usando um tubo estéril (vacutainer) contendo um anticoagulante (tampa roxa EDTA). Se o animal estiver morto, o sangue pode ser coletado do coração, mas isso deve ser feito imediatamente. Transporte o sangue refrigerado e, ao chegar ao laboratório de testes, armazene-o a -70°C.

Observação: Não use tubos estéreis de coleta de sangue com heparina (tampa verde), pois ela inibirá a reação de PCR e causará facilmente falsos negativos.

#02 Soro:

Coleta: Colete uma amostra de sangue de 5 ml usando um vacutainer não anticoagulante da veia jugular, veia cava inferior ou veia auricular marginal, ou durante a necropsia. Recomenda-se incubar primeiro a amostra a 4°C por 14-18 horas para separar o coágulo. Descarte o coágulo e centrifuge por 10-15 minutos. Colete o sobrenadante claro (soro). As amostras de soro podem ser testadas imediatamente após a separação ou enviadas refrigeradas. Ao chegar ao laboratório, podem ser armazenadas congeladas a -70°C.

Observação: Se o soro estiver vermelho, indica hemólise e não pode ser usado para testes ELISA.

#03 Amostras de órgãos e tecidos

Coleta: Os órgãos-alvo incluem o baço, os gânglios linfáticos, as amígdalas e os rins. O baço e os gânglios linfáticos normalmente têm as maiores cargas virais. Transporte as amostras refrigeradas e envie-as ao laboratório o mais rápido possível. Se a entrega oportuna não for possível, as amostras podem ser armazenadas em um freezer ou em nitrogênio líquido. Os vírus podem ser inativados por imersão em formalina tamponada a 10% por pelo menos 30 minutos antes do teste de PCR.

#04 Carrapatos moles

Coleta: Colete carrapatos moles, mantendo-os vivos o máximo possível para garantir a preservação dos vírus dentro deles e para evitar a degradação do DNA. Os carrapatos moles coletados podem ser colocados em um frasco/tubo com tampa de rosca com uma pequena quantidade de solo, forrado com gaze e armazenado em temperatura ambiente para transporte. Ao chegar ao laboratório de testes, congele a -70°C ou coloque em nitrogênio líquido. Se apenas a observação morfológica estiver sendo conduzida, as amostras podem ser armazenadas em álcool a 100%.

Observação: O mesmo procedimento se aplica a outros insetos, como mosquitos e moscas. Mantenha-os vivos o máximo possível para testes ou armazene-os diretamente em nitrogênio líquido.

#05 Amostras ambientais

Coleta: Colete múltiplas amostras ambientais, como fezes, lavagem e ração, e armazene a 4°C.

#06 Amostras de saliva e swab

Coleta: Prenda uma corda de algodão ou gaze ao corrimão. Depois que o porco mastigar naturalmente, colete o líquido extraído da corda ou gaze. Armazene a amostra em um tubo de ensaio limpo ou saco ziplock. Sele e armazene em um recipiente refrigerado para transporte.

Para swabs nasais, use um cotonete estéril. Insira-o 3-5 cm na cavidade nasal do porco em um ângulo de 45°. Gire suavemente o swab 3-5 vezes para estimular o reflexo de espirro do porco. Espere até que o swab esteja umedecido. Armazene a amostra do cotonete em um tubo de ensaio limpo separado ou saco selado. Sele e armazene em um recipiente refrigerado para transporte.

Para swabs anais, use um cotonete estéril embebido em solução salina. Insira a amostra 2-3 cm no ânus do porco. Gire suavemente o swab e esfregue-o. Em seguida, armazene a amostra em um tubo de ensaio limpo ou saco selado. Armazene em um recipiente refrigerado para transporte.

Amostras de alta qualidade são a base fundamental para garantir a precisão dos resultados dos testes laboratoriais. Por meio da coleta, preservação e controle de qualidade do pré-tratamento de amostras padronizadas, a integridade das moléculas biológicas pode ser efetivamente mantida, fornecendo suporte experimental suficiente para a detecção precisa subsequente de ácido nucleico e diagnóstico confiável.

Armazenamento e transporte de amostras

Para garantir a precisão dos resultados dos testes, recomendamos que as amostras sejam enviadas a um laboratório designado para testes o mais rápido possível após a coleta. Use um método de entrega no dia seguinte e utilize o transporte em cadeia de frio para evitar a degradação da amostra e a perda de eficácia.