会社のニュース [テスト] ASF検査結果に影響を与える主な要因：適切な検体採取と保管

豚熱の予防と管理において、検査は最も重要な要素です。しかし、サンプリングの科学的かつ標準化された性質は、検査結果に影響を与えるだけでなく、養豚場の安全性にも影響を与える可能性があります。

2020年、中国は国家標準「豚熱診断技術」GB/T 18648-2020を発行しました。この標準は、2020年12月14日に国家市場監督管理総局と中国標準化管理委員会によって公布され、施行されました。

この国家標準は、バイオセーフティ対策、臨床診断、実験室診断用サンプルの収集と処理、蛍光定量PCRなどの方法、および総合評価をカバーしています。

完全なASF病原体蛍光定量PCR検出プロセスには、一般的に、サンプルの収集と保管、サンプルの前処理、核酸抽出と溶液調製、リアルタイム蛍光定量PCR増幅反応、および検査結果の出力と分析が含まれます。

実験室の観点から、正確な実験室検査結果を保証するには、適切なサンプルの収集と輸送が最も重要です。

どのようなサンプルを収集すべきか？適切な量は？どのように標準化された方法で収集すべきか？収集後、何をするべきか？サンプルをすぐに検査しない場合、どのように保管すべきか？検査済みのサンプルはどうすればよいか？

ASF診断技術の国家標準と、2010年に発行された「豚熱検疫に関する技術仕様」（SN/T 1559-2010）を解釈することにより、臨床サンプル収集、保管、輸送に関して考慮すべき重要なポイントを紹介します:

#01 抗凝固血液（全血）：

収集：抗凝固剤（EDTA-紫色のキャップ）を含む滅菌チューブ（真空採血管）を使用して、頸静脈、下大静脈、または耳介辺縁静脈から5 mlの全血を採取します。動物が死亡している場合は、心臓から血液を採取できますが、これは直ちに行う必要があります。血液は冷蔵して輸送し、検査室に到着したら-70℃で保管します。

注：ヘパリン（緑色のキャップ）を含む滅菌採血管は使用しないでください。PCR反応を阻害し、偽陰性を引き起こしやすくなります。

#02 血清：

収集：頸静脈、下大静脈、または耳介辺縁静脈から、または剖検中に、抗凝固剤を含まない真空採血管を使用して5mlの血液サンプルを採取します。最初にサンプルを4℃で14〜18時間インキュベートして凝血塊を分離することをお勧めします。凝血塊を廃棄し、10〜15分間遠心分離します。透明な上清（血清）を採取します。血清サンプルは、分離後すぐに検査するか、冷蔵して発送できます。検査室に到着したら、-70℃で冷凍保管できます。

注：血清が赤い場合、溶血を示しており、ELISA検査には使用できません。

#03 臓器および組織サンプル

収集：標的臓器には、脾臓、リンパ節、扁桃腺、腎臓が含まれます。脾臓とリンパ節は通常、最も高いウイルス負荷を持っています。サンプルは冷蔵して輸送し、できるだけ早く検査室に提出してください。タイムリーな配送が不可能な場合は、サンプルを冷凍庫または液体窒素に保管できます。PCR検査の前に、10％緩衝ホルマリンに30分以上浸すことで、ウイルスを不活化できます。

#04 マダニ

収集：マダニを収集し、それらの中のウイルスの保存を確保し、DNA分解を防ぐために、できるだけ生きたままにしておきます。収集したマダニは、ガーゼを裏打ちした少量の土壌を入れたネジ付きバイアル/チューブに入れ、室温で輸送できます。検査室に到着したら、-70℃で冷凍するか、液体窒素に入れます。形態学的観察のみを行う場合は、サンプルを100％アルコールに保管できます。

注：蚊やハエなどの他の昆虫にも同じ手順が適用されます。検査のためにできるだけ生きたままにしておくか、液体窒素に直接保管してください。

#05 環境サンプル

収集：糞便、残飯、飼料などの複数の環境スワブを収集し、4℃で保管します。

#06 唾液およびスワブサンプル

収集：綿ロープまたはガーゼを柵に固定します。豚が自然に噛んだ後、ロープまたはガーゼから抽出された液体を採取します。サンプルを清潔な試験管またはジップロックバッグに保管します。密閉し、冷蔵容器に入れて輸送します。

鼻腔スワブの場合は、滅菌綿棒を使用します。豚の鼻腔に45°の角度で3〜5 cm挿入します。豚のくしゃみ反射を刺激するために、綿棒を3〜5回優しく回転させます。綿棒が湿るまで待ちます。綿棒サンプルを別の清潔な試験管または密閉バッグに保管します。密閉し、冷蔵容器に入れて輸送します。

肛門スワブの場合は、生理食塩水に浸した滅菌綿棒を使用します。サンプルを豚の肛門に2〜3 cm挿入します。綿棒を優しく回転させてこすります。次に、サンプルを清潔な試験管または密閉バッグに保管します。冷蔵容器に入れて輸送します。

高品質のサンプルは、実験室検査結果の精度を確保するための重要な基盤です。標準化されたサンプル収集、保存、前処理の品質管理を通じて、生体分子の完全性を効果的に維持し、その後の正確な核酸検出と信頼性の高い診断に十分な実験的サポートを提供できます。

サンプルの保管と輸送

検査結果の精度を確保するために、サンプルは収集後できるだけ早く指定された検査室に送って検査することをお勧めします。翌日配達方法を使用し、サンプル劣化と有効性の損失を防ぐためにコールドチェーン輸送を利用してください。