회사 소식 [시험] ASF 검사 결과에 영향을 미치는 주요 요인: 올바른 샘플 수집 및 저장

아프리카 돼지 열병(ASF) 예방 및 통제에서 검사는 가장 중요한 요소입니다. 그러나 샘플링의 과학적이고 표준화된 특성은 검사 결과에 영향을 미칠 뿐만 아니라 돼지 농장의 안전에도 영향을 미칠 수 있습니다.

2020년, 중국은 국가 표준 "아프리카 돼지 열병 진단 기술" GB/T 18648-2020을 발표했습니다. 이 표준은 2020년 12월 14일에 시장 규제 및 표준화 관리국에 의해 공포 및 시행되었습니다.

이 국가 표준은 생물 안전 조치, 임상 진단, 실험실 진단 샘플 수집 및 처리, 형광 정량 PCR과 같은 방법 및 종합 평가를 다룹니다.

완전한 ASF 병원체 형광 정량 PCR 검사 과정은 일반적으로 샘플 수집 및 보관, 샘플 전처리, 핵산 추출 및 용액 준비, 실시간 형광 정량 PCR 증폭 반응, 검사 결과 출력 및 분석을 포함합니다.

실험실 관점에서 볼 때, 정확한 실험실 검사 결과를 보장하기 위해서는 적절한 샘플 수집 및 운송이 가장 중요합니다.

어떤 샘플을 수집해야 할까요? 적절한 양은 얼마일까요? 표준화된 방식으로 어떻게 수집해야 할까요? 수집 후에는 어떻게 해야 할까요? 샘플을 즉시 검사하지 않으면 어떻게 보관해야 할까요? 검사된 샘플은 어떻게 해야 할까요?

ASF 진단 기술에 대한 국가 표준과 2010년에 발표된 "아프리카 돼지 열병 검역 기술 사양"(SN/T 1559-2010)을 해석하여 임상 샘플 수집, 보관 및 운송과 관련하여 고려해야 할 주요 사항을 제시합니다:

#01 항응고 혈액 (전혈):

수집: 항응고제(EDTA-보라색 캡)가 들어 있는 멸균 튜브(vacutainer)를 사용하여 목정맥, 하대정맥 또는 귀 가장자리 정맥에서 5ml의 전혈을 채취합니다. 동물이 사망한 경우 심장에서 혈액을 채취할 수 있지만 즉시 수행해야 합니다. 혈액은 냉장 보관하여 운송하고, 검사 실험실에 도착하면 -70°C에서 보관합니다.

참고: PCR 반응을 억제하고 위음성을 유발하기 쉬우므로 헤파린(녹색 캡)이 있는 멸균 혈액 채취 튜브를 사용하지 마십시오.

#02 혈청:

수집: 목정맥, 하대정맥 또는 귀 가장자리 정맥에서, 또는 부검 중에 무항응고제 vacutainer를 사용하여 5ml의 혈액 샘플을 채취합니다. 응고를 분리하기 위해 먼저 4°C에서 14-18시간 동안 샘플을 배양하는 것이 좋습니다. 응고를 버리고 10-15분 동안 원심 분리합니다. 맑은 상층액(혈청)을 수집합니다. 혈청 샘플은 분리 후 즉시 검사하거나 냉장 운송할 수 있습니다. 실험실에 도착하면 -70°C에서 냉동 보관할 수 있습니다.

참고: 혈청이 붉은색이면 용혈을 나타내며 ELISA 검사에 사용할 수 없습니다.

#03 장기 및 조직 샘플

수집: 대상 장기에는 비장, 림프절, 편도 및 신장이 포함됩니다. 비장과 림프절은 일반적으로 가장 높은 바이러스 부하를 갖습니다. 냉장 보관하여 샘플을 운송하고 가능한 한 빨리 실험실에 제출합니다. 적시에 배송할 수 없는 경우 샘플을 냉동고 또는 액체 질소에 보관할 수 있습니다. 바이러스는 PCR 검사 전에 10% 완충 포르말린에 최소 30분 동안 담가 불활성화할 수 있습니다.

#04 연성 진드기

수집: 연성 진드기를 수집하여 바이러스 보존을 보장하고 DNA 분해를 방지하기 위해 가능한 한 생존 상태를 유지합니다. 수집된 연성 진드기는 거즈로 덮인 소량의 토양이 있는 나사 캡 바이알/튜브에 넣고 실온에서 운송할 수 있습니다. 검사 실험실에 도착하면 -70°C에서 냉동하거나 액체 질소에 넣습니다. 형태학적 관찰만 수행하는 경우 샘플을 100% 알코올에 보관할 수 있습니다.

참고: 동일한 절차가 모기 및 파리와 같은 다른 곤충에도 적용됩니다. 검사를 위해 가능한 한 생존 상태를 유지하거나 액체 질소에 직접 보관하십시오.

#05 환경 샘플

수집: 여러 환경 스왑(예: 대변, 음식물 쓰레기, 사료)을 수집하고 4°C에서 보관합니다.

#06 타액 및 스왑 샘플

수집: 면 로프 또는 거즈를 난간에 고정합니다. 돼지가 자연스럽게 씹은 후 로프 또는 거즈에서 추출한 액체를 수집합니다. 샘플을 깨끗한 시험관 또는 지퍼백에 보관합니다. 밀봉하여 냉장 용기에 보관하여 운송합니다.

비강 스왑의 경우 멸균 면봉을 사용합니다. 돼지의 비강에 45° 각도로 3-5cm 삽입합니다. 돼지의 재채기 반사를 자극하기 위해 면봉을 3-5번 부드럽게 회전시킵니다. 면봉이 젖을 때까지 기다립니다. 면봉 샘플을 별도의 깨끗한 시험관 또는 밀봉된 백에 보관합니다. 밀봉하여 냉장 용기에 보관하여 운송합니다.

항문 스왑의 경우 생리 식염수에 적신 멸균 면봉을 사용합니다. 샘플을 돼지의 항문에 2-3cm 삽입합니다. 면봉을 부드럽게 회전시키고 문지릅니다. 그런 다음 샘플을 깨끗한 시험관 또는 밀봉된 백에 보관합니다. 냉장 용기에 보관하여 운송합니다.

고품질 샘플은 실험실 검사 결과의 정확성을 보장하는 핵심 기반입니다. 표준화된 샘플 수집, 보존 및 전처리 품질 관리를 통해 생체 분자의 무결성을 효과적으로 유지하여 후속 정확한 핵산 검출 및 신뢰할 수 있는 진단을 위한 충분한 실험적 지원을 제공할 수 있습니다.

샘플 보관 및 운송

검사 결과의 정확성을 보장하기 위해 샘플을 수집 후 가능한 한 빨리 지정된 실험실로 보내 검사할 것을 권장합니다. 익일 배송 방법을 사용하고 콜드 체인 운송을 활용하여 샘플 분해 및 효능 손실을 방지합니다.