notizie sull'azienda [Test] Il fattore principale che influenza i risultati dei test ASF: corretta raccolta e conservazione dei campioni

I test sono la componente più cruciale della prevenzione e del controllo della peste suina africana. Tuttavia, la natura scientifica e standardizzata del campionamento non solo influisce sui risultati dei test, ma può anche influire sulla sicurezza degli allevamenti suini.

Nel 2020, la Cina ha emesso lo standard nazionale "Tecnologia diagnostica della peste suina africana", GB/T 18648-2020. Questo standard è stato promulgato e implementato dall'Amministrazione statale per la regolamentazione del mercato e dall'Amministrazione per la standardizzazione della Cina il 14 dicembre 2020.

Questo standard nazionale copre le misure di biosicurezza, la diagnosi clinica, la raccolta e l'elaborazione dei campioni diagnostici di laboratorio, metodi come la PCR quantitativa a fluorescenza e la valutazione completa.

Un processo completo di rilevamento PCR quantitativo a fluorescenza del patogeno PSA include generalmente: raccolta e conservazione dei campioni; pretrattamento dei campioni; estrazione e preparazione di acidi nucleici; reazione di amplificazione PCR quantitativa a fluorescenza in tempo reale; e output e analisi dei risultati dei test.

Da una prospettiva di laboratorio, la corretta raccolta e il trasporto dei campioni sono fondamentali per garantire risultati accurati dei test di laboratorio.

Quali campioni devono essere raccolti? Qual è la quantità appropriata? Come devono essere raccolti in modo standardizzato? Cosa si deve fare dopo la raccolta? Se i campioni non vengono testati prontamente, come devono essere conservati? Cosa si deve fare con i campioni testati?

Interpretando lo standard nazionale per la tecnologia diagnostica della PSA e le "Specifiche tecniche per la quarantena della peste suina africana" (SN/T 1559-2010) emesse nel 2010, presentiamo i punti chiave da considerare per quanto riguarda la raccolta, la conservazione e il trasporto dei campioni clinici:

#01 Sangue anticoagulato (sangue intero):

Raccolta: prelevare 5 ml di sangue intero dalla vena giugulare, dalla vena cava inferiore o dalla vena auricolare marginale utilizzando una provetta sterile (vacutainer) contenente un anticoagulante (EDTA - tappo viola). Se l'animale è deceduto, il sangue può essere prelevato dal cuore, ma questo deve essere fatto immediatamente. Trasportare il sangue refrigerato e, all'arrivo al laboratorio di analisi, conservarlo a -70°C.

Nota: non utilizzare provette sterili per la raccolta del sangue con eparina (tappo verde), poiché inibirà la reazione PCR e causerà facilmente falsi negativi.

#02 Siero:

Raccolta: raccogliere un campione di sangue di 5 ml utilizzando un vacutainer non anticoagulante dalla vena giugulare, dalla vena cava inferiore o dalla vena auricolare marginale, o durante l'autopsia. Si consiglia di incubare prima il campione a 4°C per 14-18 ore per separare il coagulo. Scartare il coagulo e centrifugare per 10-15 minuti. Raccogliere il surnatante limpido (siero). I campioni di siero possono essere testati immediatamente dopo la separazione o spediti refrigerati. All'arrivo in laboratorio, possono essere conservati congelati a -70°C.

Nota: se il siero è rosso, indica emolisi e non può essere utilizzato per i test ELISA.

#03 Campioni di organi e tessuti

Raccolta: gli organi bersaglio includono milza, linfonodi, tonsille e reni. La milza e i linfonodi hanno tipicamente i carichi virali più alti. Trasportare i campioni refrigerati e inviarli al laboratorio il prima possibile. Se la consegna tempestiva non è possibile, i campioni possono essere conservati in un congelatore o in azoto liquido. I virus possono essere inattivati immergendoli in formalina tamponata al 10% per almeno 30 minuti prima del test PCR.

#04 Zecche molli

Raccolta: raccogliere zecche molli, mantenendole vive il più possibile per garantire la conservazione dei virus al loro interno e per prevenire la degradazione del DNA. Le zecche molli raccolte possono essere collocate in una fiala/tubo con tappo a vite con una piccola quantità di terreno, rivestite di garza e conservate a temperatura ambiente per il trasporto. All'arrivo al laboratorio di analisi, congelare a -70°C o collocare in azoto liquido. Se si sta conducendo solo l'osservazione morfologica, i campioni possono essere conservati in alcol al 100%.

Nota: la stessa procedura si applica ad altri insetti, come zanzare e mosche. Mantenerli vivi il più possibile per i test o conservarli direttamente in azoto liquido.

#05 Campioni ambientali

Raccolta: raccogliere tamponi ambientali multipli, come feci, lavanda e mangime, e conservare a 4°C.

#06 Campioni di saliva e tampone

Raccolta: fissare una corda di cotone o una garza alla ringhiera. Dopo che il maiale mastica naturalmente, raccogliere il liquido estratto dalla corda o dalla garza. Conservare il campione in una provetta pulita o in un sacchetto con chiusura a zip. Sigillare e conservare in un contenitore refrigerato per il trasporto.

Per i tamponi nasali, utilizzare un tampone di cotone sterile. Inserirlo per 3-5 cm nella cavità nasale del maiale con un angolo di 45°. Ruotare delicatamente il tampone per 3-5 volte per stimolare il riflesso dello starnuto del maiale. Attendere fino a quando il tampone non è inumidito. Conservare il campione del tampone di cotone in una provetta pulita separata o in un sacchetto sigillato. Sigillare e conservare in un contenitore refrigerato per il trasporto.

Per i tamponi anali, utilizzare un tampone di cotone sterile imbevuto di soluzione salina. Inserire il campione per 2-3 cm nell'ano del maiale. Ruotare delicatamente il tampone e strofinarlo. Quindi, conservare il campione in una provetta pulita o in un sacchetto sigillato. Conservare in un contenitore refrigerato per il trasporto.

Campioni di alta qualità sono la base fondamentale per garantire l'accuratezza dei risultati dei test di laboratorio. Attraverso la raccolta, la conservazione e il pretrattamento dei campioni standardizzati, è possibile mantenere efficacemente l'integrità delle molecole biologiche, fornendo un supporto sperimentale sufficiente per il successivo rilevamento accurato degli acidi nucleici e una diagnosi affidabile.

Conservazione e trasporto dei campioni

Per garantire l'accuratezza dei risultati dei test, si consiglia di inviare i campioni a un laboratorio designato per i test il prima possibile dopo la raccolta. Utilizzare un metodo di consegna il giorno successivo e utilizzare il trasporto a catena del freddo per prevenire la degradazione dei campioni e la perdita di efficacia.