কোম্পানির খবর শূকর প্রজনন ও শ্বাসতন্ত্রীয় রোগ সিন্ড্রোম ভাইরাস টাইপ ১ শূকরদের মধ্যে অত্যন্ত মারাত্মক।

পোরকিন প্রজনন ও শ্বাস প্রশ্বাসের সিন্ড্রোম (পিআরআরএস) বিশ্বব্যাপী সোয়াইন শিল্পকে প্রভাবিত করে এমন একটি গুরুত্বপূর্ণ সংক্রামক রোগ হিসাবে রয়ে গেছে। উত্তর-পূর্ব স্পেনের একটি অত্যন্ত প্যাথোজেনিক পিআরআরএসভি -১ স্ট্রেনের সাম্প্রতিক উত্থান (২০২০ সালে প্রথম সনাক্ত করা হয়েছে) রোগ নিয়ন্ত্রণের জন্য নতুন চ্যালেঞ্জ উপস্থাপন করেছে। যদিও এই ভাইরাসজনিত স্ট্রেনগুলি ক্ষেত্রটিতে ধ্বংসাত্মক, তবে তাদের বিস্তৃত পরীক্ষামূলক বৈশিষ্ট্য এখনও পুরোপুরি তদন্ত করা হয়নি। অতএব, এই অধ্যয়নটি নিয়মিতভাবে জেনেটিক উত্স, ভিট্রো প্রতিলিপি বৈশিষ্ট্যগুলিতে এবং নতুন উত্থিত, অত্যন্ত প্যাথোজেনিক স্প্যানিশ পিআরআরএসভি -১ স্ট্রেন, ল্লিডা 029_22 এর সংক্রমণের দ্বৈত রুটের মাধ্যমে (ইন্ট্রামাসকুলার এবং ইন্ট্রানাসাল) এর রোগজীবাণু প্রক্রিয়াগুলি তদন্ত করেছে।

উইলি অনলাইন লাইব্রেরিতে প্রকাশিত সাম্প্রতিক একটি গবেষণায় পিগগুলিতে অত্যন্ত প্যাথোজেনিক পিআরআরএসভি -১ স্ট্রেন ল্লেইদা 029_22 এর জেনেটিক বৈশিষ্ট্য এবং রোগজীবাণু বিশ্লেষণ করা হয়েছে। ফাইলোজেনেটিক বিশ্লেষণে জানা গেছে যে ল্লেইদা 029_22 স্ট্রেনটি পিআরআরএসভি -১ রোজালিয়া প্রাদুর্ভাবের সাথে যুক্ত একটি নতুন ক্লেডের অন্তর্গত এবং এটি অত্যন্ত প্যাথোজেনিক ইতালিয়ান স্ট্রেন পিআর 40 এর সমকামী। এই স্ট্রেনটি ভিট্রোতে কর্কিন অ্যালভোলার ম্যাক্রোফেজ এবং পাম-এনইউ কোষগুলিতে দক্ষতার সাথে প্রতিরূপ তৈরি করে, তবে এমএআরসি -145 কোষে নয়।

এর রোগজীবাণু নির্ধারণের জন্য, আট সপ্তাহের পুরাতন পিগলেটগুলি ইন্ট্রামাসকুলার (আইএম) এবং ইন্ট্রানসাল (ইন) ইনজেকশনগুলির মাধ্যমে ল্লেইডা 029_22 এর 2 × 10⁵ টিসিডির একই ডোজ দিয়ে ইনোকুলেট করা হয়েছিল। আইএম ইনোকুলেশনের ফলে 14 দিনের মধ্যে 100% মৃত্যুর হার হয়েছিল, যার সাথে উচ্চ ভাইরামিয়া, উচ্চ ভাইরাল শেডিং, প্রিনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস (বিশেষত আইএল -6), এবং মারাত্মক ফুসফুসের ক্ষতগুলির উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত স্তর রয়েছে। বিপরীতে, ইন ভ্যাকসিনের সাথে টিকা দেওয়া শূকরগুলির মৃত্যুর হার কম ছিল (30%) এবং মাঝারি ক্লিনিকাল লক্ষণগুলি। বেঁচে থাকা ব্যক্তিরা 63৩ দিনের পরে সুস্থ হয়ে উঠেছে, তবে দীর্ঘায়িত ভাইরেমিয়া এবং শেডিং, এবং নিম্ন স্তরের প্রিনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস এবং ২৮ দিন থেকে অ্যান্টিবডিগুলিকে নিরপেক্ষ করে দেখিয়েছিল।

মজার বিষয় হল, সংক্রমণে বিশ্বস্তভাবে স্প্যানিশ খামারগুলিতে অত্যন্ত ভাইরাসজনিত রোজালিয়া স্ট্রেনের ফলে সৃষ্ট প্রাদুর্ভাবের ক্লিনিকাল লক্ষণগুলি বিশ্বস্ততার সাথে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল, অন্যদিকে আইএম সংক্রমণ নসোকোমিয়াল সংক্রমণের ঝুঁকি তুলে ধরেছে।

পটভূমি: পোরকিন প্রজনন এবং শ্বাসযন্ত্রের সিন্ড্রোম ভাইরাস (পিআরআরএসভি) হ'ল একটি প্রধান প্যাথোজেন যা বিশ্ব সোয়াইন শিল্পকে হুমকি দেয়। এর উচ্চ পরিবর্তনশীলতা এবং বৈচিত্র্য বিদ্যমান ভ্যাকসিনগুলিকে অসঙ্গতভাবে কার্যকর করে তোলে। ২০২০ সালে, "রোজালিয়া" নামে একটি অত্যন্ত ভাইরাসজনিত PRRSV-1 স্ট্রেন স্পেনে উত্থিত হয়েছিল এবং দ্রুত ছড়িয়ে পড়ে, যার ফলে মারাত্মক ক্ষতির কারণ হয় (যেমন, ক্রমবর্ধমান মৌসুমে মৃত্যুর হার বৃদ্ধি পায়)। জেনেটিক বিশ্লেষণ থেকে বোঝা যায় যে এটি সম্ভবত পুনঃসংযোগের মাধ্যমে একটি অত্যন্ত ভাইরাসজনিত ইতালিয়ান স্ট্রেন, পিআর 40 থেকে উদ্ভূত হয়েছিল। এই স্ট্রেনটি ক্ষেত্রের উচ্চ গর্ভপাত এবং মৃত্যুর হার (> 20%) সৃষ্টি করে তবে পদ্ধতিগত পরীক্ষামূলক ডেটার অভাব রয়েছে।

অধ্যয়নের উদ্দেশ্য এবং পদ্ধতি: এই অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল ভিট্রো এবং ভিভো পরীক্ষাগুলিতে ব্যবহার করে রোজালিয়া প্রাদুর্ভাব থেকে বিচ্ছিন্ন অত্যন্ত ভাইরাসজনিত PRRSV-1 স্ট্রেনকে ব্যাপকভাবে চিহ্নিত করা। আট সপ্তাহের পুরাতন পিগলেটগুলি ইন্ট্রামাসকুলার (আইএম) এবং সংক্রমণের ইন্ট্রানসাল (ইন) উভয় রুটের মাধ্যমে ইনোকুলেটেড করা হয়েছিল (আইএম হ'ল সাধারণভাবে ব্যবহৃত পরীক্ষামূলক রুট, যখন প্রাকৃতিক সংক্রমণের অনুকরণ করে)।

পরীক্ষার উদ্দেশ্য: ক্লিনিকাল লক্ষণ এবং মৃত্যুর বিস্তারিত ডকুমেন্টেশন; মৃত/নেক্রপিড শূকরগুলির স্থূল, মাইক্রোস্কোপিক এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল প্যাথলজিকাল পরীক্ষা; সিরাম, লালা, অনুনাসিক সোয়াবস, রেকটাল সোয়াবস এবং টিস্যুগুলির পাশাপাশি ভাইরাস বিচ্ছিন্নতার ভাইরাল লোডগুলি ভাইরাল গতিশীলতা এবং সংক্রমণযোগ্যতা বোঝার জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল; এবং ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলি পিআরআরএসভি-নির্দিষ্ট এবং অ্যান্টিবডি স্তরগুলি নিরপেক্ষ করে সিরাম সাইটোকাইন স্তরগুলি বিশ্লেষণ করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

মূল তাত্পর্য: এই অধ্যয়নটি বিদ্যমান ভ্যাকসিনগুলির কার্যকারিতা মূল্যায়ন, নতুন ভ্যাকসিনগুলি বিকাশ করা এবং এই অত্যন্ত ভাইরাসজনিত স্ট্রেনের রোগজীবাণু আরও বোঝার জন্য একটি মূল পরীক্ষামূলক মডেল এবং ডেটা ফাউন্ডেশন সরবরাহ করবে।

ফলাফল

1। PRRSV-1 স্ট্রেন এবং এনএসপি 2 অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স বৈশিষ্ট্যটির ফাইলোজেনেটিক বিশ্লেষণ

জিনোমিক বৈশিষ্ট্য এবং ফাইলোজেনেটিক অবস্থান:

ডিপ সিকোয়েন্সিং (286 ×) নিশ্চিত করেছে যে PRRSV-1 LLEIDA 029_22 স্ট্রেন জিনোম 14,858 এনটি দীর্ঘ (চিত্র 1 এ), PRRSV-1 সাব টাইপ 1 বংশের সাথে ফিলোজেনেটিকভাবে অন্তর্ভুক্ত। এই স্ট্রেনটি আরও তিনটি রোজালিয়া প্রাদুর্ভাব সম্পর্কিত স্ট্রেন (চিত্র 1 এ) থেকে একটি স্বাধীন ক্লেড গঠন করে, 96.61%-97.26%এর নিউক্লিওটাইড পরিচয় ভাগ করে নিচ্ছে এবং এটি অত্যন্ত প্যাথোজেনিক পিআর 40 স্ট্রেনের সমকামী।

এনএসপি 2 মুছে ফেলার বৈশিষ্ট্য:

ল্লিডা 029_22 স্ট্রেনের এনএসপি 2 প্রোটিন একটি 63-অ্যামিনো অ্যাসিড মুছে ফেলা (লেলিস্টাড স্ট্রেনের সাথে সম্পর্কিত 317-379 অবস্থান) (চিত্র 1 বি) প্রদর্শন করে। এই মুছে ফেলা রোজালিয়া ক্লেডের মধ্যে সংরক্ষণ করা হয়, যখন এর হোমোলজাস স্ট্রেন, পিআর 40 এ মুছে ফেলা আরও বড় (চিত্র 1 এ), পরামর্শ দেয় যে এই জিনগত প্রকরণটি ক্লেডের বিবর্তনের প্রথম দিকে উত্থিত হয়েছিল।

চিত্র 1। PRRSV-1 LLEIDA 029_22 স্ট্রেন এবং এনএসপি 2 সিকোয়েন্স সারিবদ্ধকরণের ফাইলোজেনেটিক ট্রি
(ক) পুরো জিনোম সিকোয়েন্সের ভিত্তিতে নির্মিত সর্বাধিক সম্ভাবনা ফাইলোজেনেটিক ট্রি (জিটিআর মডেল, 1000 বুটস্ট্র্যাপ পরীক্ষা)।

▲: এই গবেষণায় ব্যবহৃত ল্লিডা 029_22 স্ট্রেন; ●: রোজালিয়া প্রাদুর্ভাব সম্পর্কিত স্ট্রেন।
(খ) আংশিক এনএসপি 2 অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স সারিবদ্ধকরণ (ক্লাস্টাল জিনোমিক্স ওয়ার্কবেঞ্চ 24.0.1)।

তুলনা স্ট্রেন: ল্লেইদা 029_22, রোজালিয়া প্রাদুর্ভাব সম্পর্কিত স্ট্রেন, অত্যন্ত ভাইরাসজনিত পিআর 40 স্ট্রেন এবং প্রোটোটাইপ লেলিস্টাড স্ট্রেন।
*দ্রষ্টব্য: এনএসপি 2, ননস্ট্রাকচারাল প্রোটিন 2; PRRSV-1, কর্কিন প্রজনন এবং শ্বাসযন্ত্রের সিন্ড্রোম ভাইরাস টাইপ 1।

2। PRRSV-1 LLEIDA 029_22 স্ট্রেনের ভিট্রো প্রতিলিপি বৈশিষ্ট্য

প্রথমত, ল্লেইদা 029_22 স্ট্রেনের প্রতিলিপি বৈশিষ্ট্যগুলি ভিট্রোতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। এই স্ট্রেনটি পিএএমএস এবং পিএএম-এনইউইউ কোষগুলিতে দক্ষতার সাথে প্রতিলিপিযুক্ত, তবে এমএআরসি -145 কোষে নয় (চিত্র 2 এ)। তিনটি কোষের ধরণের ভাইরাল বৃদ্ধির বক্ররেখাগুলি পিএএমএস এবং পিএএম-এনইউইউ কোষগুলিতে একই রকম ভাইরাল টাইটার দেখিয়েছিল, যদিও পরবর্তীকালে কিছুটা কম টাইটার ছিল (চিত্র 2 বি)। 72 ঘন্টা, উভয় কোষের ধরণ প্রায় 10⁵tcid₅₀/এমএল এর ভাইরাল টাইটারে পৌঁছেছিল। বিপরীতে, এমএআরসি -145 কোষগুলি দক্ষ ভাইরাল সংক্রমণ বজায় রাখতে অক্ষম ছিল, ভাইরাল টাইটারগুলি 72 ঘন্টা পরে অন্বেষণযোগ্য স্তরে নেমে আসে।

চিত্র 2। তিনটি সেল লাইনে PRRSV-1 LLEIDA 029_22 এর বৃদ্ধির গতিবিদ্যা
(ক) সংক্রমণের 72 ঘন্টা পরে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি (এমওআই = 0.1, অ্যান্টি-এন প্রোটিন অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগ; 20x উদ্দেশ্য)
(খ) পাম-নু কোষগুলিতে ভাইরাল টাইটারগুলির গতিশীলতা (মানে তিনটি স্বতন্ত্র পরীক্ষার এসডি)
*দ্রষ্টব্য: এমওআই, সংক্রমণের বহুগুণ; পাম, প্রাথমিক অ্যালভোলার ম্যাক্রোফেজ; PRRSV-1, কর্কিন প্রজনন এবং শ্বাসযন্ত্রের সিন্ড্রোম ভাইরাস টাইপ 1।

3। ক্লিনিকাল প্রকাশ এবং শূকরগুলিতে মৃত্যুর হার ল্লেইডা 029_22 দ্বারা সংক্রামিত

PRRSV-1 LLEIDA 029_22 এর প্যাথোজেনসিটিটি ইন্ট্রামাসকুলার (আইএম) এবং ইন্ট্রানসাল (ইন) ইনোকুলেশন রুট দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। আইএম গ্রুপের শূকরগুলি 1 ডিপিআই থেকে শুরু হওয়া শরীরের তাপমাত্রা বৃদ্ধি দেখিয়েছে, 7 ডিপিআইতে 41 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের বেশি এবং 13 ডিপিআই পর্যন্ত অব্যাহত রয়েছে। ইন্ট্রানসাল ইনোকুলেশন গ্রুপটি একটি হালকা জ্বর প্রদর্শন করেছিল, কেবলমাত্র ইনোকুলেশনের পরে 5 দিনের মধ্যে সংক্ষেপে 41 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের বেশি ছিল, তারপরে একটি বিরতিযুক্ত জ্বরের ধরণ অনুসরণ করে। নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠী পুরো পরীক্ষায় (চিত্র 3 এ) কোনও অস্বাভাবিক শরীরের তাপমাত্রা প্রদর্শন করে না।

ক্লিনিকাল পর্যবেক্ষণগুলি থেকে জানা গেছে যে আইএম-সংক্রামিত গোষ্ঠী তীব্র শ্বাস প্রশ্বাসের ঝামেলা, স্নায়বিক লক্ষণ, গুরুতর ডিস্পনিয়া এবং কান এবং স্ক্রোটামের সায়ানোসিস অনুভব করেছিল, যখন সংক্রামিত গোষ্ঠীটি প্রাথমিকভাবে মাঝারি, অবিরাম ডিস্পেনিয়া উপস্থাপন করে। অতিরিক্ত ক্লিনিকাল লক্ষণগুলির মধ্যে রয়েছে র‌্যাগড ফুর, এডিমা (বেশিরভাগ অঙ্গ এবং ঘাড়ে উচ্চারিত), যৌথ প্রদাহ এবং উভয় গ্রুপে শরীরের অবস্থার সামগ্রিক অবনতি, তবে এগুলি আইএম গ্রুপে আরও তীব্র ছিল। এই গুরুতর ক্লিনিকাল প্রকাশগুলি প্রাথমিকভাবে 12 থেকে 14 দিনের পরে ইনোকুলেশনের মধ্যে কেন্দ্রীভূত ছিল, কল্যাণের কারণে উচ্চ মৃত্যুহার বা ইথানাসিয়ার সময়কালের সাথে মিলে।

সামগ্রিকভাবে, আইএম-সংক্রামিত গোষ্ঠীতে ক্লিনিকাল স্কোরগুলি 11, 12 এ সংক্রামিত গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল এবং 14 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (পি <0.05), 14 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (চিত্র 3 বি) এ পিকিং করে। ইন গ্রুপে ক্লিনিকাল স্কোরগুলি কম ছিল, সংক্রমণের পরে 13 দিনের (ডিপিআই) এ তাদের শীর্ষে পৌঁছেছিল। এর পরে লক্ষণগুলি ধীরে ধীরে হ্রাস পেয়েছে, তবে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় স্কোরগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (পি <0.05)। পুরো পরীক্ষা জুড়ে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপে কোনও ক্লিনিকাল লক্ষণ দেখা যায়নি (চিত্র 3 বি)।

লিনিয়ার মিশ্র মডেল বিশ্লেষণ (বিভিন্ন সময় পয়েন্টে একই প্রাণী থেকে পর্যবেক্ষণের অ-স্বাধীনতার জন্য অ্যাকাউন্টিং) প্রকাশ করেছে যে গ্রুপ- এবং দিন-নির্দিষ্ট ভেরিয়েবলগুলি প্রথম 14 দিনের (পি <0.05) এর মধ্যে শরীরের তাপমাত্রা এবং ক্লিনিকাল স্কোরকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করে। আইএম এবং গ্রুপগুলিতে, পাশাপাশি সংক্রমণ গোষ্ঠী এবং নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর মধ্যেও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া গেছে।

বেঁচে থাকার বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে আইএম সংক্রমণ গোষ্ঠীর সমস্ত প্রাণী 100% মৃত্যুর হার সহ সংক্রমণের পরে 14 দিনের আগে মারা গিয়েছিল। প্রাকৃতিক বা প্ররোচিত মৃত্যু সংক্রমণের পরে 12 থেকে 14 দিনের মধ্যে কেন্দ্রীভূত ছিল। ইন ইনফেকশন গ্রুপে, সংক্রমণের পরে 63 দিনের দ্বারা মৃত্যুর হার 30% ছিল, 12, 21 এবং সংক্রমণের পরে 43 দিনের মধ্যে মৃত্যু হয়েছিল। কন্ট্রোল গ্রুপের সমস্ত প্রাণী পরীক্ষার শেষ অবধি বেঁচে ছিল (চিত্র 3 সি)।

চিত্র 3। পিআরআরএসভি -1 ল্লেইডা 029_22 দ্বারা সংক্রামিত শূকরগুলিতে ক্লিনিকাল ফলাফলগুলি
(ক) প্রতিদিনের রেকটাল তাপমাত্রা পরবর্তী সংক্রমণ (লাল ড্যাশড লাইন: জ্বরের প্রান্তিক> 41 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড; গড় ± এসডি)
(খ) দৈনিক গড় ক্লিনিকাল স্কোর (মানে ± এসডি; অভিন্ন অক্ষরগুলি গ্রুপগুলির মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে না, পি <0.05)
(গ) পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীর জন্য বেঁচে থাকার বক্ররেখা
দ্রষ্টব্য: সি, নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ; আইএম, ইন্ট্রামাসকুলার গ্রুপ; ইন, ইন্ট্রেনাসাল গ্রুপ।

4। PRRSV- সংক্রামিত প্রাণীদের মধ্যে ভাইরামিয়া এবং ভাইরাল শেডিং

PRRSV-1 ল্লেইডা 029_22 সংক্রমণের পরে ভাইরেমিয়া স্তরগুলি আরটি-কিউপিসিআর দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। আইএম এবং কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় গ্রুপগুলির মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য সহ 3 দিনের সংক্রমণের পরে সমস্ত সংক্রামিত প্রাণীর সিরামে PRRSV আরএনএ সনাক্ত করা হয়েছিল, যা নেতিবাচক থেকে যায় (পি <0.05; চিত্র 4 এ)। ইন গ্রুপে ভাইরেমিয়া ইনফেকশন পরবর্তী 7 দিনের মধ্যে শীর্ষে পৌঁছেছিল, যখন আইএম গ্রুপে ভাইরাল বোঝাগুলি ইন-ইনফেকশন পরবর্তী 7 এবং 14 দিনের উভয় ক্ষেত্রেই ইন এবং কন্ট্রোল গ্রুপগুলির তুলনায় উল্লেখযোগ্য পরিমাণে বেশি ছিল (পি <0.05)। এরপরে, ইন গ্রুপে ভাইরাল লোড ধীরে ধীরে হ্রাস পেয়েছে, তবে 28 ডিপিআইতে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় এখনও উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল।

চিত্র 4। ভাইরাল শেডিং লালা এবং অনুনাসিক/রেকটাল সোয়াব দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সমস্ত সংক্রামিত প্রাণী লালা, অনুনাসিক এবং মলদ্বার সোয়াবগুলিতে 3 ডিপিআইতে ভাইরাসের জন্য ইতিবাচক পরীক্ষা করেছে।

আইএম গ্রুপে লালা শেডিং 14 ডিপিআই অবধি এবং ইন গ্রুপে পরীক্ষার শেষ অবধি অব্যাহত ছিল (3 ডিপিআইতে শীর্ষে; চিত্র 4 বি)।

উভয় গ্রুপে অনুনাসিক শেডিং 7 ডিপিআইতে পৌঁছেছে, আইএম গ্রুপে উল্লেখযোগ্য পরিমাণে উচ্চতর ভাইরাল লোড রয়েছে যেখানে গ্রুপের তুলনায় 7/14 ডিপিআইতে (*পি <0.05; চিত্র 4 সি)।

রেকটাল শেডিং আইএম গ্রুপে 14 ডিপিআই পর্যন্ত এবং ইন গ্রুপে 35 ডিপিআই পর্যন্ত অব্যাহত ছিল (56 ডিপিআইতে সামান্য প্রত্যাবর্তন সহ), উভয় শৃঙ্গ 7 ডিপিআই (চিত্র 4 ডি) সহ।

এউসি বিশ্লেষণ নিশ্চিত করেছে যে সংক্রামিত গোষ্ঠীগুলির সমস্ত নমুনায় ভাইরাল লোডগুলি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্য পরিমাণে বেশি ছিল এবং আইএম গ্রুপে অনুনাসিক সোয়াব লোডগুলি গ্রুপের (*পি <0.05) তুলনায় বেশি ছিল। সংক্ষেপে, PRRSV শেডিং তাড়াতাড়ি ঘটে এবং সংক্রমণের পরে টিকিয়ে রাখা হয়।

5। আরটি-কিউপিসিআর-পজিটিভ নমুনাগুলি থেকে সংক্রামক PRRSV বিচ্ছিন্নকরণের যাচাইকরণ

আরটি-কিউপিসিআর-পজিটিভ নমুনায় সংক্রামক ভাইরাসের উপস্থিতি নিশ্চিত করতে, ভাইরাস বিচ্ছিন্নতা (ষষ্ঠ) পরীক্ষাগুলি পিএএম-এনইউ কোষগুলি ব্যবহার করে (চিত্র 5) ব্যবহার করা হয়েছিল। সিরামের নমুনাগুলির জন্য, ভাইরাস বিচ্ছিন্নতার সাফল্যের হার ছিল আইএম গ্রুপে 3 থেকে 14 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (ডিপিআই) এর মধ্যে সংগৃহীত নমুনাগুলির জন্য 100% (10/10) এবং গ্রুপে 3 থেকে 7 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (ডিপিআই) এর মধ্যে সংগৃহীত নমুনাগুলির জন্য 100% (10/10)। যাইহোক, সাফল্যের হার ধীরে ধীরে 14 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (70%), 21 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (55.6%) এবং 28 দিনের পোস্ট-ইনোকুলেশন (12.5%) এ হ্রাস পেয়েছে।

চিত্র 5। তিনটি সংক্রামক ভাইরাস স্ট্রেনগুলি সংস্কৃতির দুটি অনুচ্ছেদের পরে সংক্রমণের পরে (ডিপিআই) 3 দিনের পরে সংক্রামিত উভয় প্রাণী থেকে সংগ্রহ করা লালা নমুনাগুলি থেকে সফলভাবে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। কোনও সংক্রামক ভাইরাস অনুনাসিক বা রেকটাল সোয়াব থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল না।

6। PRRSV-1 Lleida 029_22 সংক্রমণ দ্বারা প্ররোচিত সাইটোকাইন প্রতিক্রিয়া

সাইটোকাইন স্তরগুলি নির্ধারণের জন্য প্রথম 14 দিনের সংক্রমণের পরে সিরাম নমুনাগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল, তিনটি গ্রুপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য প্রকাশ করে (চিত্র 6)। আইএফএন- α স্তরগুলি উভয় সংক্রমণ গ্রুপে 3, 7, এবং 14 দিনের পরবর্তী সংক্রমণ (ডিপিআই) এ উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নীত হয়েছিল, আইএমএন- α স্তরটি আইএম গ্রুপে স্তরগুলির তুলনায় 14 দিনের পরে সংক্রমণের পরে (পি <0.05) এর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি। প্রিনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস আইএল -1α, আইএল -12, এবং আইএল -6 অনুরূপ প্রবণতা দেখিয়েছিল: আইএল -1α গ্রুপে ইনফেকশন পরবর্তী 3 দিনের মধ্যে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং স্থিতিশীল রয়েছে, যখন আইএম গ্রুপের আইএল -6 স্তরগুলি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় 7 এবং 14 দিনের পোস্ট-ইনফেকশন (চিত্র 6 বি, ডিই) এর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। বিশেষ নোটের মধ্যে, আইএল -6 স্তরগুলি আইএম গ্রুপে ইন-গ্রুপের তুলনায় 14 দিনের সংক্রমণের পরে (পি <0.05) তুলনায় উল্লেখযোগ্য পরিমাণে বেশি ছিল। সংক্রামিত প্রাণীদের উভয় গ্রুপে আইএল -1β একটি ক্রমবর্ধমান প্রবণতা দেখিয়েছিল, আইএম গ্রুপটি 3, 7 এবং 14 ডিপিআইতে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চতর স্তর দেখায়, যখন আইএন গ্রুপটি কেবল 14 ডিপিআই (চিত্র 6 সি) এ একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখিয়েছে।

চিত্র 6। আইএল -12 স্তরগুলি আইএম গ্রুপে ইন গ্রুপ এবং কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় 14 ডিপিআই (চিত্র 6 এফ) এর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। সামগ্রিক প্রবণতা আইএম গ্রুপে বিশেষত আইএল -6 স্তরে 7 এবং 14 ডিপিআইতে একটি শক্তিশালী প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছিল, যা আইএম গ্রুপে 100% মৃত্যুর হারের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল।

।

PRRSV-1 এবং PRRSV-2-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডিগুলি বাণিজ্যিক ELISA কিট (চিত্র 7 এ) ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। আইএম গ্রুপের 70% প্রাণীর মধ্যে সেরোকনভার্সন ঘটেছিল এবং 14 ডিপিআইতে গ্রুপে 90% প্রাণীর মধ্যে ঘটেছিল। উভয় গ্রুপে এস/পি অনুপাত নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (পি <0.05)। আইএন গ্রুপে অ্যান্টিবডি স্তরগুলি 21 ডিপিআইতে হ্রাস পেতে শুরু করে, 42 ডিপিআইতে স্থিতিশীল থেকে যায়, 56 ডিপিআইতে প্রত্যাবর্তন করে এবং তারপরে 63৩ ডিপিআইতে কিছুটা হ্রাস পায়। নিয়ন্ত্রণ গ্রুপটি পুরো পরীক্ষায় (এস/পি <0.4) সেরোনেগেটিভ থেকে যায়।

চিত্র। অ্যান্টিবডি টাইটারগুলি একই সময়ে ব্যক্তিদের মধ্যে পরিবর্তিত হয় এবং অ্যান্টিবডিগুলি নিরপেক্ষ করার উপস্থিতি 28 ডিপিআই (চিত্র 4 বি) এর পরে সিরাম থেকে সংক্রামক ভাইরাসের ছাড়পত্রের সাথে মিলে যায়। নিয়ন্ত্রণ গ্রুপে কোনও নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি সনাক্ত করা যায়নি।

8। টিস্যু হোমোজেনেটে PRRSV-1 LLEIDA 029_22 সনাক্তকরণ এবং বিচ্ছিন্নতা

আরটি-কিউপিসিআর বিভিন্ন টিস্যুতে ভাইরাল লোড পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল (চিত্র 4 এফ)। আইএম গ্রুপে, ভাইরাল লোডগুলি টিস্যুগুলিতে তুলনামূলকভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল, ফুসফুসে সর্বাধিক বোঝা, মিডিয়াস্টিনাল লিম্ফ নোড এবং প্লীহা। ইন গ্রুপে, ভাইরাল লোডগুলি টনসিল এবং মিডিয়াস্টিনাল লিম্ফ নোডগুলিতে সর্বাধিক বোঝা সহ টিস্যু জুড়ে উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছিল। যেমনটি প্রত্যাশা করা হয়েছিল, আইএম গ্রুপের তুলনায় আইএন গ্রুপে সামগ্রিক ভাইরাল লোড কম ছিল, যা নেক্রোপসির বিভিন্ন সময়ের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। ইন গ্রুপে সংক্রামিত প্রাণীদের টিস্যু লোডগুলির উল্লেখযোগ্য পরিবর্তনশীলতাও মৃত্যুর বিভিন্ন সময় (12, 21 এ ধূসর-আউট নমুনাগুলি এবং 43 ডিপিআই বনাম 63 ডিপিআই) এর সাথেও যুক্ত ছিল। নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ থেকে কোনও টিস্যু নমুনায় কোনও ভাইরাল আরএনএ সনাক্ত করা যায়নি।

সারণী 1। 12, 21, বা 43 দিনের সংক্রমণের পরে মারা যাওয়া প্রাণীগুলি থেকে সংগ্রহ করা টিস্যুগুলি এভিআইয়ের জন্য ইতিবাচক পরীক্ষিত।

(সারণী দ্রষ্টব্য: সারণী 1 টিস্যু নমুনাগুলি থেকে আরটি-কিউপিসিআর এবং ভাইরাস বিচ্ছিন্নতার ফলাফলগুলির সংক্ষিপ্তসার জানায়।

9। পিআরআরএসভি-সংক্রামিত টিস্যুগুলির প্যাথলজিকাল এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ

নেক্রোপসি অনুসন্ধানগুলি: পিআরআরএসভি সংক্রমণের পরে মারা যাওয়া প্রাণীগুলি (বিশেষত যারা 12 থেকে 21 দিনের সংক্রমণের পরে মারা গিয়েছিল) পার্পরিক ত্বক, সাধারণীকরণের এডিমা, গুরুতর লিম্ফডেনোপ্যাথি, স্প্লেনোমেগালি (কখনও কখনও ফলিকুলার হাইপারপ্লাজিয়া সহ), এবং গ্যাস্ট্রিকের রক্তক্ষরণ সহ উল্লেখযোগ্য পদ্ধতিগত ক্ষত দেখিয়েছিল। পালমোনারি ক্ষতগুলি বিশিষ্ট ছিল, আংশিক পতন, মাল্টিফোকাল একীকরণ এবং লালচে-বাদামী-ম্যাকুলগুলি প্রদর্শন করেছিল, আন্তঃস্থায়ী নিউমোনিয়ার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, খুব তাড়াতাড়ি মারা যাওয়া প্রাণীদের মধ্যে আরও গুরুতর ক্ষত রয়েছে (চিত্র 8 এ)। ইন্ট্রেনাসাল সংক্রমণের সাথে প্রায় 20% প্রাণী গৌণ ব্যাকটিরিয়া সংক্রমণের কারণে ফোড়া, পেরিকার্ডাইটিস এবং বাতও বিকাশ করেছিল। নিয়ন্ত্রণ প্রাণীদের মধ্যে কোনও স্থূল ক্ষত লক্ষ্য করা যায় নি।

চিত্র 8। হিস্টোপ্যাথোলজিকাল বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে আইএম-তে প্রথম দিকে (12-21 ডিপিআই) মারা যাওয়া প্রাণীদের মধ্যে আন্তঃস্থায়ী নিউমোনিয়া স্কোরগুলি এবং গ্রুপগুলিতে 1.83 থেকে 3.33 পয়েন্ট পর্যন্ত ছিল। যাইহোক, এই স্কোরগুলি 63৩ ডিপিআই (কন্ট্রোল গ্রুপ, 0.17-0.83 পয়েন্ট; গ্রুপে, 0.50-1.17 পয়েন্ট) এ উত্সর্গীকৃত প্রাণীদের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছিল। বিশেষ দ্রষ্টব্য, ইন গ্রুপে টনসিল হিস্টোলজিকাল স্কোর 63৩ ডিপিআই (পি <0.05) এ নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, তবে অন্যান্য টিস্যুতে (চিত্র 8 সি) কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য লক্ষ্য করা যায়নি।

(ক্যাপশন: চিত্র 8 বি হিস্টোপ্যাথোলজিকাল স্কোরগুলি দেখায় এবং চিত্র 8 সি 63 ডিপিআইতে বিভিন্ন গোষ্ঠীর হিস্টোলজিকাল স্কোরগুলির সাথে তুলনা করে)

মাইক্রোস্কোপিক প্যাথলজিটি সমস্ত সংক্রামিত প্রাণীর ফুসফুসে আন্তঃস্থায়ী নিউমোনিয়া (অ্যালভোলার প্রাচীর ঘন হওয়া, সেলুলার প্রসারণ এবং প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশ) প্রকাশ করে। এক্সিউডেটস এবং নেক্রোটিক টিস্যু ভাস্কুলার ক্ষতির লক্ষণ সহ আলভোলির মধ্যে উপস্থিত ছিল। লিম্ফয়েড টিস্যু (লিম্ফ নোডস এবং প্লীহা) তীব্র লিম্ফোপেনিয়া এবং নেক্রোসিস দেখিয়েছিল, যার সাথে ভাস্কুলার ক্ষতি (যেমন, থ্রোম্বোসিস এবং ভাস্কুলাইটিস) রয়েছে। পেরিভাসকুলার প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশ, এডিমা এবং গ্লিওসিস মস্তিষ্কের সাদা পদার্থে (চিত্র 9 এ) পরিলক্ষিত হয়েছিল।

ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল (আইএইচসি) বিশ্লেষণ ম্যাক্রোফেজগুলিতে পিআরআরএসভি অ্যান্টিজেনগুলি সনাক্ত করেছে এবং মাঝে মাঝে ফুসফুস, লিম্ফ নোডস, টনসিল এবং সংক্রামিত প্রাণীদের প্লীহগুলি (চিত্র 9 বি) থেকে টাইপ II নিউমোসাইটে। মস্তিষ্কে পেরিভাসকুলার প্রদাহজনক কোষগুলিতে ভাইরাল অ্যান্টিজেনগুলিও সনাক্ত করা হয়েছিল।

চিত্র 9। PRRSV সংক্রমণের ফলে ফুসফুস, লিম্ফয়েড টিস্যু এবং মস্তিষ্কে বিস্তৃত প্যাথলজিকাল ক্ষতির কারণ হয়, মূলত ম্যাক্রোফেজগুলির মধ্যে স্থানীয়করণ করা হয়, সিস্টেমিক প্যাথলজিকাল বৈশিষ্ট্যগুলি প্রদর্শন করে।

আলোচনা

PRRSV এর মনোকাইটিক সেল লাইনের জন্য একটি সীমাবদ্ধ ট্রপিজম রয়েছে এবং এটি অ্যালভোলার ম্যাক্রোফেজ (পিএএমএস) এবং এমএআরসি -145 কোষ ব্যবহার করে tradition তিহ্যগতভাবে বিচ্ছিন্ন এবং সংস্কৃত হয়েছে। তবে, পিএএমএসগুলি বড় ব্যাচ-টু-ব্যাচের পরিবর্তনশীলতা অর্জন এবং থাকা কঠিন এবং অত্যন্ত প্যাথোজেনিক স্ট্রেনগুলি এমএআরসি -145 এর সাথে খাপ খাইয়ে নেওয়া কঠিন। এই সমীক্ষায়, আমরা অমর কোষ লাইন পাম-এনইউ ব্যবহার করেছি, যা পিএএমএসের পরিবর্তে নির্দিষ্ট ক্ষেত্রের স্ট্রেনের প্রতি সংবেদনশীল। আমরা সাফল্যের সাথে ল্লিডা 029_22 স্ট্রেনকে বিচ্ছিন্ন করে দিয়েছি, যার বৃদ্ধির বক্ররেখা পিএএমএসে পর্যবেক্ষণের মতো ছিল। বর্তমানে, সমস্ত পিআরআরএসভি স্ট্রেনের জন্য উপযুক্ত কোনও সার্বজনীন সেল লাইন নেই এবং বিভিন্ন স্ট্রেনের বিচ্ছিন্নতার জন্য আরও উপযুক্ত সেল লাইনগুলি সনাক্ত করার জন্য ভবিষ্যতের প্রচেষ্টা প্রয়োজন।

উপসংহার

এই অধ্যয়নটি সফলভাবে একটি অত্যন্ত ভাইরাসজনিত PRRSV-1 স্ট্রেনের সাথে ইন্ট্রানসাল সংক্রমণের একটি মডেল প্রতিষ্ঠা করেছে। ক্লিনিকাল প্রকাশগুলি (উচ্চ মৃত্যুর হার, গুরুতর লক্ষণগুলি, অবিরাম উচ্চ জ্বর এবং ভাইরেমিয়া) ক্ষেত্রের প্রাদুর্ভাবগুলিতে পর্যবেক্ষণ করা লোকদের সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ। মূল সন্ধানটি ছিল যে সংক্রমণের রুটটি ফলাফলটিকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করে: ইন্ট্রামাসকুলার (আইএম) সংক্রমণের ফলে 100% তীব্র মৃত্যুহার হয়, যখন ইন্ট্রানাসাল (ইন) সংক্রমণের মৃত্যুর হার কেবল 30% ছিল এবং সংক্রামিত শূকরগুলি শেষ পর্যন্ত পুরোপুরি সুস্থ হয়ে উঠল। এই উল্লেখযোগ্য পার্থক্যটি ঝুঁকিকে হাইলাইট করে যে অন-ফার্ম আইএম ইনজেকশন অনুশীলনগুলি নোসোকোমিয়াল সংক্রমণের মাধ্যমে মহামারীটির তীব্রতা উল্লেখযোগ্যভাবে আরও বাড়িয়ে তুলতে পারে।