ข่าว บริษัท เกี่ยวกับ ไวรัสสินโดมทางเดินหายใจและการสืบพันธุ์หมู แบบ 1 เป็นไวรัสที่รุนแรงมากในหมู

โรคพันธุ์และทางเดินหายใจของหมู (PRRS) ยังคงเป็นโรคติดต่อที่สําคัญที่สุดที่กระทบอุตสาหกรรมหมูโลกการปรากฏตัวล่าสุดของสายพันธุ์ PRRSV-1 ที่มีเชื้อราสูงในภาคตะวันออกเฉียงเหนือของสเปน (ตรวจพบครั้งแรกในปี 2020) ได้นําเสนอโจทย์ใหม่ในการควบคุมโรคถึงแม้ว่าสายพันธุ์อันร้ายแรงเหล่านี้จะทําลายในสนาม แต่การวิจัยเชิงทดลองที่ครบถ้วนของพวกเขา ยังไม่ได้ถูกวิจัยอย่างเต็มที่การศึกษานี้ได้วิจัยอย่างเป็นระบบถึงต้นกําเนิดพันธุกรรม, ลักษณะการจําลอง in vitro และกลไกการสร้างโรคของสายพันธุ์ PRRSV-1 สเปนที่มีเชื้อโรคสูงที่เพิ่งปรากฏขึ้น, Lleida 029_22,ผ่านเส้นทางการติดเชื้อสองทาง (ทางกล้ามเนื้อและทางจมูก).

การศึกษาล่าสุดที่ตีพิมพ์ใน Wiley Online Library ได้วิเคราะห์ลักษณะพันธุกรรมและการเกิดโรคของสายพันธุ์ PRRSV-1 ที่มีเชื้อโรคสูง Lleida 029_22 ในหมูการวิเคราะห์ทางพันธุกรรมแสดงให้เห็นว่าสายพันธุ์ Lleida 029_22 เป็นสายพันธุ์ใหม่ที่เกี่ยวข้องกับการระบาดของ PRRSV-1 Rosalia และเป็นแบบเดียวกันกับสายพันธุ์อิตาลีที่มีเชื้อโรคสูง PR40สายพันธุ์นี้ขยายตัวได้อย่างมีประสิทธิภาพในเซลล์แมคโรฟาจและเซลล์ PAM-KNU ของหมูใน vitro แต่ไม่ในเซลล์ MARC-145

เพื่อการประเมินความเป็นเชื้อโรคของมัน หมูอายุแปดสัปดาห์ถูกฉีดยาด้วยยา 2×105 TCID5 ของ Lleida 029_22 ในปริมาณเท่ากัน ผ่านการฉีดในกล้ามเนื้อ (IM) และในจมูก (IN)การฉีดฉีดในช่องทางจุลินทรีย์ ส่งผลให้เกิดการตาย 100% ภายใน 14 วันโดยตรงแล้ว, ไวรัสที่เกิดขึ้นในเส้นเลือดขอดมีอัตราการระบาดสูงหมูที่ได้รับวัคซีน IN มีอัตราการตายต่ํากว่า (30%) และมีอาการทางคลินิกปานกลางคนที่รอดชีวิตได้ฟื้นตัวหลังจาก 63 วัน แต่แสดงให้เห็นว่ามีโรคไวรัสและการหลั่งเลือดยาวนาน และมีระดับไซโตคีนที่ช่วยต่อการอักเสบและแอนติบอดีที่ทําให้ไม่เป็นอันตรายต่ําตั้งแต่วันที่ 28 เป็นต้นไป

ที่น่าสนใจคือ IN Infection ได้สรุปถึงอาการทางคลินิก ของการแพร่ระบาดที่เกิดจากสายพันธุ์โรซาเลีย ที่มีเชื้อไวรัสสูงขณะที่โรคติดต่อทางทางเดินทางเดินน้ําได้ชี้ให้เห็นถึงความเสี่ยงของการติดต่อทางโรงพยาบาล.

เบื้องหลัง: ไวรัสสินโดมทางเพาะพันธุ์และทางเดินหายใจหมู (PRRSV) เป็นเชื้อโรคใหญ่ที่คุกคามอุตสาหกรรมหมูทั่วโลกความแตกต่างและความหลากหลายที่สูงทําให้วัคซีนที่มีอยู่ไม่ค่อยมีประสิทธิภาพในปี 2020 สายพันธุ์ PRRSV-1 ที่มีเชื้อไวรัสสูงชื่อ "โรซาเลีย" ได้ปรากฏขึ้นในสเปนและแพร่ระบาดอย่างรวดเร็ว ส่งผลให้เกิดการสูญเสียอย่างหนัก (เช่น การเพิ่มการตายในช่วงฤดูกาลปลูก)การวิเคราะห์พันธุกรรมชี้ให้เห็นว่า มันอาจเกิดจากสายพันธุ์อิตาลีที่รุนแรงมาก, PR40, ผ่านการผสมผสานใหม่ สายพันธุ์นี้ทําให้มีอัตราการท้องถอนและการตายที่สูง (> 20%) ในสนาม แต่มีข้อมูลการทดลองที่มีระบบที่ขาด

เป้าหมายและวิธีการศึกษา: การศึกษาครั้งนี้มีเป้าหมายที่จะประกอบลักษณะอย่างครบถ้วนของสายพันธุ์ PRRSV-1 ที่มีเชื้อไวรัสสูง ที่แยกออกจากการระบาดของโรซาเลีย โดยใช้การทดลอง in vitro และ in vivoหมูอายุแปดสัปดาห์ถูกฉีดผ่านเส้นทางติดเชื้อทั้งทางกล้ามเนื้อ (IM) และทางจมูก (IN) (IM คือเส้นทางการทดลองที่ใช้กันทั่วไป), ขณะที่ IN ซิมูเลอร์การติดเชื้อตามธรรมชาติ)

เป้าหมายการทดสอบ: เอกสารรายละเอียดเกี่ยวกับอาการทางคลินิกและความตาย การตรวจโรคโดยเฉพาะอย่างยิ่ง, ภาพจุลินทรีย์, และการตรวจโรคทางภูมิคุ้มกันของหมูที่ตาย/ถูกศพน้ําลาย, สะพายจมูก, สะพายจมูก, และเนื้อเยื่อ, รวมถึงการแยกไวรัส, ได้ถูกทําเพื่อเข้าใจการเคลื่อนไหวของไวรัสและการติดต่อ;และการตอบสนองของภูมิคุ้มกันถูกประเมินโดยการวิเคราะห์ระดับของแอนติบอดีที่เฉพาะ PRRSV และและระดับไซโตคีนในเซรม

ความสําคัญสําคัญ: การศึกษานี้จะให้รุ่นทดลองและฐานข้อมูลสําคัญในการประเมินประสิทธิภาพของวัคซีนที่มีอยู่ การพัฒนาวัคซีนใหม่และการเข้าใจเพิ่มเติมเกี่ยวกับการเกิดโรคของสายพันธุ์ที่ไวรัสสูงนี้.

ผล

1การวิเคราะห์ฟิโลเจนเนติกของสายพันธุ์ PRRSV-1 และ Nsp2 ลักษณะลําดับอะมิโนแอซิด

ลักษณะพันธุกรรมและตําแหน่งพันธุกรรม:

การเรียงลําดับลึก (286 ×) ยืนยันว่าพันธุกรรมของสายพันธุ์ PRRSV-1 Lleida 029_22 มีความยาว 14,858 nt (รูป 1A) ซึ่งเป็นสายพันธุ์ของสายพันธุ์ PRRSV-1 สับไทป์ 1สายพันธุ์นี้เป็นคลาเดสอิสระจากสามสายพันธุ์อื่นที่เกี่ยวข้องกับการระบาดของโรซาเลีย (รูป 1A), มีนิวเคลียโทไดเทนด์ 96. 61% - 97. 26%, และเป็นแบบเดียวกันกับสายพันธุ์ PR40 ที่เป็นโรคสูง

ลักษณะการลบ Nsp2:

โปรตีน Nsp2 ของสายพันธุ์ Lleida 029_22 แสดงการลบกรดอะมิโน 63 (ตําแหน่ง 317-379 เทียบกับสายพันธุ์ Lelystad) (รูป 1B) การลบนี้ถูกอนุรักษ์ภายในสายพันธุ์ Rosaliaขณะที่การลบในสายพันธุ์ homologous, PR40 ใหญ่กว่า (รูป 1A) ซึ่งชี้ให้เห็นว่าความแตกต่างทางพันธุกรรมนี้เกิดขึ้นในช่วงต้นของการวิวัฒนาการของคลาเดส

รูปที่ 1 ต้นไม้พันธุกรรมของ PRRSV-1 Lleida 029_22 และการสอดคล้องลําดับ Nsp2
(A) ไม้พันธุกรรมความน่าจะเป็นสูงสุดที่สร้างขึ้นโดยใช้ลําดับพันธุกรรมทั้งหมด (รุ่น GTR, 1000 การทดสอบ bootstrap)

▲: สายพันธุ์ Lleida 029_22 ที่ใช้ในการศึกษานี้ ● สายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับการระบาดของโรซาเลีย
(B) การจัดลําดับอะมิโนแอซิด Nsp2 ส่วนหนึ่ง (CLUSTAL Genomics Workbench 24.0.1)

สายพันธุ์ที่เปรียบเทียบ: สายพันธุ์ Lleida 029_22, สายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับการระบาดของโรซาเลีย, สายพันธุ์ PR40 ที่มีเชื้อไวรัสสูง และต้นแบบของสายพันธุ์เลลิสตัด
*หมายเหตุ: Nsp2, โปรตีนไม่โครงสร้าง 2; ไวรัส PRRSV-1, ไวรัสสินโดมทางสูตรพันธุ์และทางเดินหายใจหมูชนิด 1

2คุณลักษณะการจําลองใน vitro ของ PRRSV-1 Lleida 029_22

อย่างแรก คุณลักษณะการจําลองของสายพันธุ์ Lleida 029_22 ถูกประเมินใน vitro สายพันธุ์นี้จําลองได้อย่างมีประสิทธิภาพในเซลล์ PAMs และเซลล์ PAM-KNU แต่ไม่ใช่ในเซลล์ MARC-145 (รูป 2A)คอร์ฟการเติบโตของไวรัสในเซลล์สามประเภทแสดงให้เห็นว่า ไทเตอร์ไวรัสในเซลล์ PAMs และ PAM-KNU มีลักษณะคล้ายกันหลัง 72 ชั่วโมง ทั้งสองชนิดเซลล์ได้บรรลุค่าตัวของไวรัสประมาณ 105TCID50/ mlเซลล์ MARC-145 ไม่สามารถรักษาเชื้อไวรัสได้อย่างมีประสิทธิภาพ, โดยการระดับของไวรัสลดลงสู่ระดับที่ไม่สามารถตรวจสอบได้หลังจาก 72 ชั่วโมง

รูปที่ 2 คีเนติกการเติบโตของ PRRSV-1 Lleida 029_22 ในสายเซลล์สามสาย
(A) มิกรอสโกปีแสงสว่าง 72 ชั่วโมงหลังจากติดเชื้อ (MOI = 0.1, การสีด้วยสารต้านทานโปรตีน anti-N; เป้าหมาย 20x)
(B) ไดนามิกของไทเตอร์ไวรัสในเซลล์ PAM-KNU (ค่าเฉลี่ย ± SD จากการทดลองอิสระสามครั้ง)
*หมายเหตุ: MOI ความหลากหลายของโรคติดเชื้อ; PAM, แมคโรฟาจอัลเวโอล่าหลัก; PRRSV-1, ไวรัสสินโดรมการเพาะพันธุ์และทางหายใจหมูชนิดที่ 1

3อาการทางคลินิกและการตายของหมูที่ติดเชื้อ Lleida 029_22

พยาธิของ PRRSV-1 Lleida 029_22 ถูกประเมินด้วยเส้นทางการฉีดเชื้อทางกล้ามเนื้อ (IM) และทางจมูก (IN) หมูในกลุ่ม IM แสดงอัตราการเพิ่มอุณหภูมิร่างกายตั้งแต่ 1 dpiมากกว่า 41 °C ในความร้อน 7 dpiกลุ่มที่ได้รับการฉีดเชื้อทางจมูกแสดงอาการไข้เบากว่า เพียงระยะสั้นเท่านั้นที่เกิน 41°C ใน 5 วันหลังการฉีดเชื้อกลุ่มควบคุมไม่ได้แสดงอุณหภูมิร่างกายที่ผิดปกติตลอดการทดลอง (รูป 3A).

การสังเกตทางคลินิกแสดงให้เห็นว่ากลุ่มที่ติดเชื้อ IM มีอาการหายใจรุนแรง อาการทางประสาท อาการหายใจหายใจรุนแรงในขณะที่กลุ่มที่ติดเชื้อ IN มีอาการป่วยที่ปานกลางอาการคลินิกเพิ่มเติมประกอบด้วย ผิวขนหัก, โรคสะเก็ดเงิน (ที่ชัดเจนที่สุดในขาและคอ), โรคอักเสบข้อ และสภาพร่างกายเสื่อมลงโดยทั่วไปในทั้งสองกลุ่มแต่มันรุนแรงกว่าในกลุ่ม IMอาการคลินิกที่รุนแรงเหล่านี้มักจะเน้นระหว่าง 12 และ 14 วันหลังจากการฉีดวัคซีน ซึ่งตรงกับช่วงที่มีความตายสูงหรือการฆ่าเชื้อเพลิงเพื่อความดี

โดยรวมแล้ว คะแนนทางคลินิกในกลุ่มที่ติดเชื้อ IM มากกว่าที่อยู่ในกลุ่มที่ติดเชื้อ IN ในช่วง 11, 12, และ 14 วันหลังการฉีดวัคซีน (p < 0. 05)สูงสุด 14 วันหลังการฉีดวัคซีน (รูป 3B)สกอร์ทางคลินิกในกลุ่ม IN ต่ํากว่า และสูงสุดเมื่อ 13 วันหลังการติดเชื้อ (dpi) อาการค่อยๆลดลงหลังจากนั้นแต่คะแนนยังคงสูงกว่าในกลุ่มควบคุม (p < 0).05) ไม่มีอาการทางคลินิกที่สังเกตในกลุ่มคอนโทรลตลอดการทดลอง (รูป 3B)

Linear mixed model analysis (accounting for the non-independence of observations from the same animal at different time points) revealed that group- and day-specific variables significantly influenced body temperature and clinical scores during the first 14 days (p < 0.05) พบความแตกต่างที่สําคัญระหว่างกลุ่ม IM และ IN รวมทั้งระหว่างกลุ่มติดเชื้อและกลุ่มควบคุม

การวิเคราะห์การอยู่รอดแสดงให้เห็นว่าสัตว์ทั้งหมดในกลุ่มติดเชื้อ IM ตายก่อน 14 วันหลังจากติดเชื้อ โดยมีอัตราการตาย 100%ความตายตามธรรมชาติหรือผลักดันมามีความมุ่งมั่นระหว่าง 12 และ 14 วันหลังการติดเชื้อในกลุ่มติดเชื้อ IN ความตายอยู่ที่ 30% เมื่อ 63 วันหลังการติดเชื้อ โดยมีผู้เสียชีวิตเกิดขึ้นเมื่อ 12, 21, และ 43 วันหลังการติดเชื้อสัตว์ทั้งหมดในกลุ่มควบคุมได้อยู่รอดจนถึงสิ้นการทดลอง (รูป 3C).

ภาพที่ 3 สถิติทางคลินิกในหมูที่ติดเชื้อ PRRSV-1 Lleida 029_22
(A) อุณหภูมิต่อมลูกต่อวันหลังติดเชื้อ (เส้นสีแดงมีเส้นดัก: ต่ําสุดไข้ > 41 °C; กลาง ± SD)
(B) สกอร์คลินิกเฉลี่ยต่อวัน (เฉลี่ย ± SD; ตัวอักษรเดียวกันไม่แสดงความแตกต่างที่สําคัญระหว่างกลุ่ม, p < 0.05)
(C) โครงการรอดชีวิตสําหรับกลุ่มการทดลอง
หมายเหตุ: C กลุ่มควบคุม IM กลุ่มในกล้ามเนื้อ IN กลุ่มในจมูก

4ไวเรมีและการหลั่งไวรัสในสัตว์ที่ติดเชื้อ PRRSV

ระดับของไวเรมีหลังจากติดเชื้อ PRRSV-1 Lleida 029_22 ถูกประเมินด้วย RT-qPCR RNA ได้ตรวจพบในเซรั่มของสัตว์ที่ติดเชื้อทั้งหมด 3 วันหลังจากติดเชื้อมีความแตกต่างที่สําคัญระหว่างกลุ่ม IM และ IN เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมซึ่งยังคงเป็นลบ (p < 0.05; ภาพ 4A) ไวเรมีในกลุ่ม IN สูงสุด 7 วันหลังการติดเชื้อในขณะที่จํานวนไวรัสในกลุ่ม IM มากกว่าในกลุ่ม IN และกลุ่มคอนโทรลในทั้ง 7 และ 14 วันหลังการติดเชื้อ (p < 0).05) หลังจากนั้น ความจุของไวรัสในกลุ่ม IN ได้ลดลงอย่างช้า ๆ แต่ยังคงสูงกว่าในกลุ่มควบคุมที่ 28 dpi

รูปที่ 4 การระบายไวรัสถูกประเมินด้วยน้ําลายและน้ําลายจากจมูก / จมูกสัตว์ที่ติดเชื้อทั้งหมดตรวจพบไวรัสในระดับ 3 dpi ในน้ําลาย, จมูกและจมูก

การหลั่งน้ําลายยังคงจนถึง 14 dpi ในกลุ่ม IM และจนถึงสิ้นการทดลองในกลุ่ม IN (สูงสุด 3 dpi; ภาพ 4B)

การระบายน้ําจากจมูกสูงสุด 7 dpi ในทั้งสองกลุ่ม โดยมีจํานวนไวรัสที่สูงขึ้นมากในกลุ่ม IM ที่ 7/14 dpi กว่ากลุ่ม IN (* p < 0.05; รูป 4C)

การระบายเลือดในจมูกต่อเนื่องจนถึง 14 dpi ในกลุ่ม IM และจนถึง 35 dpi ในกลุ่ม IN (มีการลดลงเล็กน้อยที่ 56 dpi) โดยทั้งสองจุดสูงสุดอยู่ที่ 7 dpi (รูป 4D)

การวิเคราะห์ AUC ยืนยันว่าจํานวนไวรัสในตัวอย่างทั้งหมดจากกลุ่มที่ติดเชื้อสูงกว่าในกลุ่มควบคุมและว่าภาระ swab จมูกในกลุ่ม IM มากกว่าในกลุ่ม IN (* p < 0).05) สรุปแล้ว การหลั่งของ PRRSV เกิดขึ้นในช่วงต้น และคงอยู่หลังจากติดเชื้อ

5การตรวจสอบการแยกตัวของ PRRSV ที่ติดเชื้อจากตัวอย่าง RT-qPCR-บวก

เพื่อยืนยันการมีไวรัสติดเชื้อในตัวอย่างที่มี RT-qPCR เป็นบวก การทดลองแยกไวรัส (VI) ถูกทําโดยใช้เซลล์ PAM-KNU (รูป 5) สําหรับตัวอย่างเซรม the success rate of virus isolation was 100% (10/10) for samples collected between 3 and 14 days post-inoculation (dpi) in the IM group and 100% (10/10) for samples collected between 3 and 7 days post-inoculation (dpi) in the IN groupอย่างไรก็ตาม อัตราความสําเร็จลดลงอย่างช้าๆ ภายใน 14 วันหลังการฉีดวัคซูล (70%), 21 วันหลังการฉีดวัคซูล (55.6%) และ 28 วันหลังการฉีดวัคซูล (12.5%)

รูปที่ 5 มีการแยกเชื้อไวรัสติดเชื้อ 3 เชื้อพันธุ์ได้สําเร็จจากตัวอย่างน้ําลายที่เก็บจากสัตว์ที่ติดเชื้อทั้งสองตัว 3 วันหลังการติดเชื้อ (dpi) หลังจากการปลูก 2 ครั้งไม่พบไวรัสติดเชื้อจากสับจมูกหรือจมูก.

6การตอบสนองของไซโตคีนที่เกิดจากโรคติดเชื้อ PRRSV-1 Lleida 029_22

ตัวอย่างเซรั่มถูกเก็บในช่วง 14 วันแรกหลังการติดเชื้อเพื่อประเมินระดับไซโตคีน ซึ่งเปิดเผยถึงความแตกต่างที่สําคัญระหว่าง 3 กลุ่ม (รูปที่ 6)ระดับ IFN-α มีการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสําคัญในทั้งสองกลุ่มติดเชื้อ, 7, และ 14 วันหลังการติดเชื้อ (dpi) โดยมีระดับ IFN-α ในกลุ่ม IM สูงกว่าในกลุ่ม IN ใน 14 วันหลังการติดเชื้อ (p< 0.05)และ IL-6 มีแนวโน้มคล้ายกัน: IL- 1α เพิ่มขึ้นในกลุ่ม IN 3 วันหลังจากติดเชื้อและยังคงคงคงขณะที่ระดับ IL-6 ในกลุ่ม IM มีระดับสูงกว่าในกลุ่มคอนโทรลที่ 7 และ 14 วันหลังการติดเชื้อ (รูป 6B)โดยเฉพาะอย่างยิ่งระดับ IL- 6 มากกว่าในกลุ่ม IM มากกว่ากลุ่ม IN เมื่อ 14 วันหลังการติดเชื้อ (p<0. 05)IL-1β ในทั้งสองกลุ่มของสัตว์ที่ติดเชื้อแสดงแนวโน้มการเพิ่มขึ้นโดยกลุ่ม IM แสดงระดับที่สูงกว่ากลุ่มคอนโทรลอย่างมากที่ 3, 7, และ 14 dpi ในขณะที่กลุ่ม IN แสดงความแตกต่างที่สําคัญเพียง 14 dpi (รูป 6C)

ภาพที่ 6 ระดับ IL-12 มากกว่าในกลุ่ม IM มากกว่าในกลุ่ม IN และกลุ่มควบคุมที่ 14 dpi (ภาพ 6F)แนวโน้มทั่วไปแสดงให้เห็นถึงการตอบสนองของไซโตคีนที่สนับสนุนการอักเสบที่แข็งแกร่งขึ้นในกลุ่ม IMโดยเฉพาะอย่างยิ่งในระดับ IL-6 ที่ 7 และ 14 dpi ซึ่งมีความสัมพันธ์เป็นบวกกับอัตราการตาย 100% ในกลุ่ม IM

7การตอบสนองของแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงและเฉลี่ยในสัตว์ที่ติดเชื้อ PRRSV-1 Lleida 029_22

แอนติบอดีเฉพาะของ PRRSV-1 และ PRRSV-2 ถูกประเมินด้วยการใช้ชุด ELISA รายการพาณิชย์ (รูป 7A)การเปลี่ยนเชื้อราเกิดขึ้นใน 70% ของสัตว์ในกลุ่ม IM และใน 90% ของสัตว์ในกลุ่ม IN ที่ 14 dpiสัดส่วน S/P ในทั้งสองกลุ่มสูงกว่าในกลุ่มควบคุม (p < 0.05)กระโดดกลับที่ 56 dpiกลุ่มควบคุมยังคงเป็นเซโรเนกทีฟตลอดการทดลอง (S/P < 0.4).

รูปที่ 7 การทดสอบแอนติบอดีที่เป็นกลางแสดงให้เห็นว่าในกลุ่ม IN มีการตรวจพบแค่ทิตเตอร์ต่ํา 2 log2 ที่ 28 dpi ซึ่งค่อย ๆ เพิ่มขึ้นเป็น 3.71 log2 ที่ 56 dpi (รูปที่ 7B)อัตราแอนติบอดีแตกต่างกันในแต่ละคนในเวลาเดียวกันและการปรากฏของแอนติบอดีที่ก่อให้เกิดความเสื่อมตรงกับการเคลียร์ของไวรัสติดเชื้อจากเซรมหลังจาก 28 dpi (รูป 4B).

8การตรวจพบและแยก PRRSV-1 Lleida 029_22 ในเนื้อเยื่อ homogenates

RT-qPCR ใช้ในการวัดอัตราการติดเชื้อไวรัสในเนื้อเยื่อต่าง ๆ (รูป 4F) ในกลุ่ม IM อัตราการติดเชื้อไวรัสคงที่ในเนื้อเยื่อต่าง ๆ โดยมีอัตราการติดเชื้อสูงที่สุดในปอดกลีบหลอดเลือดขอดในกลุ่ม IN ความจุของไวรัสแตกต่างกันอย่างมากในเนื้อเยื่อต่างๆ โดยมีความจุสูงที่สุดใน tonsils และเส้นเลือดขอด mediastinalอัตราการติดเชื้อไวรัสทั้งหมดในกลุ่ม IN ต่ํากว่าในกลุ่ม IMซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับเวลาที่แตกต่างกันของการศพความแตกต่างที่สําคัญในภาระเนื้อเยื่อในสัตว์ที่ติดเชื้อในกลุ่ม IN ยังเกี่ยวข้องกับเวลาตายที่แตกต่างกันไม่พบ RNA ไวรัสในตัวอย่างเนื้อเยื่อใด ๆ จากกลุ่มควบคุม

ตารางที่ 1 เนื้อเยื่อที่เก็บจากสัตว์ที่ตายเมื่อ 12, 21, หรือ 43 วันหลังการติดเชื้อตรวจพบว่ามี aVI

(หมายเหตุจากตาราง: ตารางที่ 1 สรุปผลการตรวจ RT-qPCR และการแยกไวรัสจากตัวอย่างเนื้อเยื่อ "MLN" หมายถึงเส้นเลือดขอดเฉลี่ยและ "ILN" หมายถึงเส้นเลือดขอดอาการ)

9การวิเคราะห์ทางโรคและทางภูมิคุ้มกันโรคของเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อ PRRSV

ผลการศพ: สัตว์ที่ตายหลังจากติดเชื้อ PRRSV (โดยเฉพาะอย่างยิ่งสัตว์ที่ตายระหว่าง 12 และ 21 วันหลังจากติดเชื้อ) แสดงให้เห็นว่ามีอาการบาดเจ็บทางระบบที่สําคัญ รวมถึงผิวสีม่วงโรคสะเก็ดเงินทั่วไปโรคสะเก็ดเงินในปอดมีลักษณะที่โดดเด่น แสดงถึงการล่มสลายบางส่วน การปรับตัวหลายจุดและแมกุลสีน้ําตาลแดง, สอดคล้องกับอาการป่วยปอดระยะกลาง, กับการบาดเจ็บที่รุนแรงกว่าในสัตว์ที่ตายเร็ว (รูป 8A)โรคกระเพาะหัวใจไม่มีการบาดเจ็บที่ใหญ่หลวงที่สังเกตในสัตว์ควบคุม

ภาพที่ 8 การวิเคราะห์ทางทางทางโรคกระดูกเลือดแสดงให้เห็นว่าคะแนนของโรคสะเก็ดเงินระหว่างกระดูกเลือดในสัตว์ที่ตายเร็ว (12-21 dpi) ในกลุ่ม IM และ IN อยู่ในช่วง 1.83 ถึง 3.33 แต้มคะแนนเหล่านี้ลดลงอย่างมีนัยสําคัญในสัตว์ที่ฆ่าใน 63 dpi (กลุ่มควบคุม)โดยเฉพาะอย่างยิ่งคะแนนทางกระดูกมะเร็งของกระดูกมะเร็งในกลุ่ม IN มีผลสูงกว่าในกลุ่มควบคุมที่ 63 dpi (p<0.05)แต่ไม่พบความแตกต่างที่สําคัญในเนื้อเยื่ออื่น ๆ (รูป 8C).

(คําบรรยาย: ภาพ 8B แสดงผลการตรวจโรคทางกระเพาะเลือด และภาพ 8C เปรียบเทียบผลการตรวจโรคทางกระเพาะเลือดของกลุ่มต่างๆ ที่ 63 dpi)

โรคจุลินทรีย์พบว่ามีโรคปอดระยะกลาง (ผนังกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดุมกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดูกกระดมีสารออกและเนื้อเยื่อที่เสียหายอยู่ในอัลเวโอลเนื้อเยื่อลมฟอยด์ (มะเร็งลมฟ่าและกลาก) แสดงให้เห็นว่ามีโรคลมฟอเพเนียและเนคโรซิสที่รุนแรง พร้อมด้วยการบาดเจ็บของหลอดเลือด (เช่น เส้นเลือดขอดและเส้นเลือดขอด)การเจาะเข้าไปของเซลล์อักเสบในเส้นเลือดรอบมีอาการอุดตัน และการเกิดกลีโอซิสในสารขาวในสมอง (รูป 9A)

การวิเคราะห์ทางระบบภูมิคุ้มกัน (IHC) ได้ตรวจพบแอนติเจนของ PRRSV ในมะขาม และบางครั้งในเซลล์ปอดประเภท II จากปอด, เส้นเลือดขอด, มะเขือเทศ และกลากของสัตว์ที่ติดเชื้อ (รูป 9B)ไวรัสแอนติเจนยังถูกตรวจพบในเซลล์อักเสบในสมอง.

รูปที่ 9 การติดเชื้อ PRRSV ส่งผลให้เกิดความเสียหายทางโรคที่กว้างขวางในปอด, เนื้อเยื่อลมฟอยด์ และสมอง, โดยหลักแล้วถูกตั้งอยู่ในตัวแมคโรฟาจ, แสดงถึงลักษณะทางโรคทางระบบ

การหารือ

PRRSV มีการจํากัดการติดเชื้อสําหรับสายเซลล์โมโนไซต และได้รับการแยกและปลูกโดยประเพณีโดยใช้เซลล์ MAcrophages (PAMs) และเซลล์ MARC-145PAMs มีความยากที่จะได้รับและมีความแตกต่างจากชุดต่อชุดมาก, และสายพันธุ์ที่เป็นเชื้อโรคสูงยากที่จะปรับตัวให้กับ MARC-145 ในการศึกษานี้ เราใช้สายเซลล์ PAM-KNU ที่ไม่ตายไป ซึ่งมีความรู้สึกต่อสายพันธุ์สนามบางชนิด แทน PAMsเราแยกเชื้อสาย Lleida 029_22 ได้สําเร็จปัจจุบันไม่มีสายเซลล์ทั่วไปที่เหมาะสําหรับทุกสายพันธุ์ของ PRRSVและความพยายามในอนาคตที่จําเป็นในการระบุเส้นเลือดเซลล์ที่เหมาะสมกว่าสําหรับการแยกพันธุ์ที่แตกต่างกัน.

สรุป

การศึกษาครั้งนี้ได้พัฒนาแบบจําลองของโรคติดเชื้อทางจมูกด้วยสายพันธุ์ PRRSV-1 ที่มีเชื้อไวรัสสูงและไวเรมี) คล้ายคลึงกับที่สังเกตในการระบาดในสนามการค้นพบที่สําคัญคือเส้นทางการติดเชื้อส่งผลต่อผลการรักษาอย่างสําคัญ: การติดเชื้อทางกล้ามเนื้อ (IM) ส่งผลให้เกิดการตายอย่างเร่งด่วน 100%ในขณะที่โรคติดเชื้อทางจมูก (IN) มีอัตราการตายเพียง 30%และหมูที่ติดเชื้อในที่สุดก็หายตัวไปหมดความแตกต่างที่สําคัญนี้ทําให้เห็นถึงความเสี่ยงที่การฉีดฉีด IM ในฟาร์มอาจทําให้รุนแรงของโรคระบาดมากขึ้น.