Domuzlarda üreme ve solunum sendromu (PRRS), küresel domuz endüstrisini etkileyen en önemli bulaşıcı hastalıklardan biri olmaya devam etmektedir. İspanya'nın kuzeydoğusunda (ilk olarak 2020'de tespit edildi) yüksek patojeniteli bir PRRSV-1 suşunun son zamanlarda ortaya çıkması, hastalık kontrolü için yeni zorluklar ortaya çıkarmıştır. Bu virülanslı suşlar sahada yıkıcı olsa da, kapsamlı deneysel karakterizasyonları henüz tam olarak araştırılmamıştır. Bu nedenle, bu çalışma, yeni ortaya çıkan, yüksek patojeniteli İspanyol PRRSV-1 suşu Lleida 029_22'nin genetik kökenlerini, in vitro replikasyon özelliklerini ve patojenite mekanizmalarını, çift enfeksiyon yoluyla (kas içi ve burun içi) sistematik olarak araştırmıştır.
Wiley Online Library'de yayınlanan yakın tarihli bir çalışma, yüksek patojeniteli PRRSV-1 suşu Lleida 029_22'nin domuzlardaki genetik özelliklerini ve patojenitesini analiz etmiştir. Filogenetik analiz, Lleida 029_22 suşunun, PRRSV-1 Rosalia salgını ile ilişkili yeni bir klada ait olduğunu ve yüksek patojeniteli İtalyan suşu PR40 ile homolog olduğunu ortaya koymuştur. Bu suş, in vitro olarak domuz alveoler makrofajlarında ve PAM-KNU hücrelerinde verimli bir şekilde replike olurken, MARC-145 hücrelerinde replike olmamaktadır.
Patojenitesini değerlendirmek için, sekiz haftalık domuz yavruları, kas içi (IM) ve burun içi (IN) enjeksiyonlar yoluyla aynı dozda 2×10⁵ TCID⁵ Lleida 029_22 ile aşılanmıştır. IM aşılama, yüksek viremi, yüksek viral dökülme, önemli ölçüde yükselmiş proinflamatuar sitokin seviyeleri (özellikle IL-6) ve şiddetli akciğer lezyonları eşliğinde, 14 gün içinde %100 ölümle sonuçlanmıştır. Buna karşılık, IN aşısı ile aşılanan domuzlarda daha düşük bir ölüm oranı (%30) ve orta derecede klinik belirtiler görülmüştür. Hayatta kalanlar 63 gün sonra iyileşmiş, ancak uzun süreli viremi ve dökülme, düşük seviyelerde proinflamatuar sitokinler ve 28. günden itibaren nötralize edici antikorlar sergilemiştir.
İlginç bir şekilde, IN enfeksiyonu, İspanyol çiftliklerinde yüksek virülanslı Rosalia suşunun neden olduğu bir salgının klinik semptomlarını sadakatle tekrarlarken, IM enfeksiyonu nozokomiyal bulaşma riskini vurgulamıştır.
Arka Plan: Domuzlarda üreme ve solunum sendromu virüsü (PRRSV), küresel domuz endüstrisini tehdit eden önemli bir patojendir. Yüksek değişkenliği ve çeşitliliği, mevcut aşıları tutarsız bir şekilde etkili hale getirmektedir. 2020'de, "Rosalia" adı verilen yüksek virülanslı bir PRRSV-1 suşu İspanya'da ortaya çıkmış ve hızla yayılmış, ciddi kayıplara neden olmuştur (örneğin, büyüme mevsiminde artan ölüm oranı). Genetik analiz, muhtemelen yüksek virülanslı bir İtalyan suşu olan PR40'tan rekombinasyon yoluyla ortaya çıktığını göstermektedir. Bu suş, sahada yüksek abortus ve ölüm oranlarına (%20'den fazla) neden olmakta, ancak sistematik deneysel veriler eksiktir.
Çalışma Amaçları ve Yöntemleri: Bu çalışma, in vitro ve in vivo deneyler kullanarak Rosalia salgınından izole edilen yüksek virülanslı PRRSV-1 suşunu kapsamlı bir şekilde karakterize etmeyi amaçlamıştır. Sekiz haftalık domuz yavruları, hem kas içi (IM) hem de burun içi (IN) enfeksiyon yolları ile aşılanmıştır (IM yaygın olarak kullanılan deneysel yoldur, IN ise doğal enfeksiyonu simüle eder).
Test Amaçları: Klinik belirtilerin ve ölümün ayrıntılı dokümantasyonu; ölen/nekropsi yapılan domuzların brüt, mikroskobik ve immünohistokimyasal patolojik incelemeleri; viral dinamikleri ve bulaşabilirliği anlamak için serum, tükürük, nazal sürüntüler, rektal sürüntüler ve dokulardaki viral yüklerin yanı sıra virüs izolasyonu gerçekleştirilmiştir; ve bağışıklık tepkileri, PRRSV'ye özgü ve nötralize edici antikor seviyelerinin yanı sıra serum sitokin seviyeleri analiz edilerek değerlendirilmiştir.
Temel Önemi: Bu çalışma, mevcut aşıların etkinliğini değerlendirmek, yeni aşılar geliştirmek ve bu yüksek virülanslı suşun patogenezini daha iyi anlamak için önemli bir deneysel model ve veri temeli sağlayacaktır.
Sonuçlar
1. PRRSV-1 Suşlarının Filogenetik Analizi ve Nsp2 Amino Asit Dizisi Karakterizasyonu
Genomik Özellikler ve Filogenetik Konumlandırma:
Derin dizileme (286×), PRRSV-1 Lleida 029_22 suşu genomunun 14.858 nt uzunluğunda olduğunu (Şekil 1A) ve filogenetik olarak PRRSV-1 alt tip 1 soyuna ait olduğunu doğrulamıştır. Bu suş, diğer üç Rosalia salgını ile ilişkili suştan bağımsız bir klad oluşturmakta (Şekil 1A), %96.61-%97.26 nükleotid kimliği paylaşmakta ve yüksek patojeniteli PR40 suşu ile homologdur.
Nsp2 Silinme Karakterizasyonu:
Lleida 029_22 suşunun Nsp2 proteini, 63 amino asitlik bir silinme sergilemektedir (Lelystad suşuna göre 317-379 pozisyonları) (Şekil 1B). Bu silinme, Rosalia kladı içinde korunurken, homolog suşu PR40'taki silinme daha da büyüktür (Şekil 1A), bu genetik varyasyonun kladın evriminde erken ortaya çıktığını düşündürmektedir.
Şekil 1. PRRSV-1 Lleida 029_22 suşunun filogenetik ağacı ve Nsp2 dizisi hizalaması
(A) Tüm genom dizisine dayalı olarak oluşturulan maksimum olabilirlik filogenetik ağacı (GTR modeli, 1000 önyükleme testi).
▲: Bu çalışmada kullanılan Lleida 029_22 suşu; ●: Rosalia salgını ile ilişkili suş.
(B) Kısmi Nsp2 amino asit dizisi hizalaması (CLUSTAL Genomics Workbench 24.0.1).
Karşılaştırılan suşlar: Lleida 029_22, Rosalia salgını ile ilişkili suş, yüksek virülanslı PR40 suşu ve prototip Lelystad suşu.
*Not: Nsp2, yapısal olmayan protein 2; PRRSV-1, domuzlarda üreme ve solunum sendromu virüsü tip 1.
2. PRRSV-1 Lleida 029_22 suşunun in vitro replikasyon özellikleri
İlk olarak, Lleida 029_22 suşunun replikasyon özellikleri in vitro olarak değerlendirilmiştir. Bu suş, PAM'lerde ve PAM-KNU hücrelerinde verimli bir şekilde replike olurken, MARC-145 hücrelerinde replike olmamıştır (Şekil 2A). Üç hücre tipindeki viral büyüme eğrileri, PAM'lerde ve PAM-KNU hücrelerinde benzer viral titreler göstermiş, ancak ikincisi biraz daha düşük titreler göstermiştir (Şekil 2B). 72 saatte, her iki hücre tipi de yaklaşık 10⁵TCID₅₀/mL viral titreye ulaşmıştır. Buna karşılık, MARC-145 hücreleri, 72 saat sonra viral titrelerin tespit edilemez seviyelere düşmesiyle, verimli viral enfeksiyonu sürdürememiştir.
Şekil 2. PRRSV-1 Lleida 029_22'nin Üç Hücre Hattındaki Büyüme Kinetiği
(A) Enfeksiyondan 72 saat sonra floresan mikroskobu (MOI = 0.1, anti-N proteini antikoru ile boyama; 20x objektif)
(B) PAM-KNU hücrelerindeki viral titrelerin dinamikleri (üç bağımsız deneyin ortalaması ± SD)
*Not: MOI, enfeksiyon çokluğu; PAM, birincil alveoler makrofajlar; PRRSV-1, domuzlarda üreme ve solunum sendromu virüsü tip 1.
3. Lleida 029_22 ile Enfekte Domuzlarda Klinik Belirtiler ve Ölüm
PRRSV-1 Lleida 029_22'nin patojenitesi, kas içi (IM) ve burun içi (IN) aşılama yolları ile değerlendirilmiştir. IM grubundaki domuzlar, 1 dpi'den itibaren vücut sıcaklığında artış göstermiş, 7 dpi'de 41°C'yi aşmış ve 13 dpi'ye kadar devam etmiştir. Burun içi aşılama grubu daha hafif bir ateş sergilemiş, sadece 5 gün sonra 41°C'yi aşmış, ardından aralıklı bir ateş modeli izlemiştir. Kontrol grubunda deney boyunca anormal vücut sıcaklığı görülmemiştir (Şekil 3A).
Klinik gözlemler, IM ile enfekte grubun akut solunum sıkıntısı, nörolojik semptomlar, şiddetli dispne ve kulak ve skrotumda siyanoz yaşadığını, IN ile enfekte grubun ise öncelikle orta derecede, kalıcı dispne ile başvurduğunu ortaya koymuştur. Ek klinik belirtiler arasında, her iki grupta da yırtık kürk, ödem (en belirgin olarak uzuvlarda ve boyunda), eklem iltihabı ve genel vücut kondisyonunda bozulma yer almaktadır, ancak bunlar IM grubunda daha şiddetliydi. Bu şiddetli klinik belirtiler, öncelikle 12 ila 14 gün arasında yoğunlaşmış, yüksek ölüm veya refah nedenleriyle ötenazi dönemi ile aynı zamana denk gelmiştir.
Genel olarak, IM ile enfekte gruptaki klinik skorlar, 11, 12 ve 14 gün sonra IN ile enfekte gruptakilerden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p < 0.05), enfeksiyondan 14 gün sonra (Şekil 3B) en yüksek seviyeye ulaşmıştır. IN grubundaki klinik skorlar daha düşüktü ve enfeksiyondan 13 gün sonra (dpi) en yüksek seviyeye ulaşmıştır. Semptomlar daha sonra yavaş yavaş azalmış, ancak skorlar kontrol grubundakilerden önemli ölçüde daha yüksek kalmıştır (p < 0.05). Deney boyunca kontrol grubunda hiçbir klinik semptom gözlenmemiştir (Şekil 3B).
Doğrudan aynı hayvandan farklı zaman noktalarındaki gözlemlerin bağımsız olmamasını hesaba katan doğrusal karma model analizi, grup ve gün spesifik değişkenlerin ilk 14 gün boyunca vücut sıcaklığını ve klinik skorları önemli ölçüde etkilediğini ortaya koymuştur (p < 0.05). IM ve IN grupları arasında ve her iki enfeksiyon grubu ile kontrol grubu arasında önemli farklılıklar bulunmuştur.
Hayatta kalım analizi, IM enfeksiyon grubundaki tüm hayvanların enfeksiyondan 14 gün önce öldüğünü ve %100 ölüm oranına sahip olduğunu göstermiştir. Doğal veya indüklenmiş ölümler, enfeksiyondan 12 ila 14 gün arasında yoğunlaşmıştır. IN enfeksiyon grubunda, enfeksiyondan 63 gün sonra ölüm oranı %30 olmuş, ölümler enfeksiyondan 12, 21 ve 43 gün sonra meydana gelmiştir. Kontrol grubundaki tüm hayvanlar deneyin sonuna kadar hayatta kalmıştır (Şekil 3C).
Şekil 3. PRRSV-1 Lleida 029_22 ile Enfekte Domuzlarda Klinik Sonuçlar
(A) Enfeksiyondan Sonra Günlük Rektal Sıcaklıklar (Kırmızı Kesikli Çizgi: Ateş Eşiği >41°C; Ortalama ± SD)
(B) Günlük Ortalama Klinik Skor (Ortalama ± SD; Aynı Harfler Gruplar Arasında Önemli Farklılıklar Olmadığını Gösterir, p < 0.05)
(C) Deneysel Gruplar İçin Hayatta Kalım Eğrileri
Not: C, kontrol grubu; IM, kas içi grup; IN, burun içi grup.
4. PRRSV ile Enfekte Hayvanlarda Viremi ve Viral Dökülme
PRRSV-1 Lleida 029_22 enfeksiyonunu takiben viremi seviyeleri RT-qPCR ile değerlendirilmiştir. PRRSV RNA, enfeksiyondan 3 gün sonra tüm enfekte hayvanların serumunda tespit edilmiş, negatif kalan kontrol grubuna kıyasla IM ve IN grupları arasında önemli farklılıklar görülmüştür (p < 0.05; Şekil 4A). IN grubundaki viremi, enfeksiyondan 7 gün sonra en yüksek seviyeye ulaşırken, IM grubundaki viral yükler, hem 7 hem de 14 gün sonra IN ve kontrol gruplarındakilerden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p < 0.05). Daha sonra, IN grubundaki viral yük kademeli olarak azalmış, ancak 28 dpi'de hala kontrol grubundakinden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur.
Şekil 4. Viral dökülme, tükürük ve nazal/rektal sürüntüler ile değerlendirilmiştir. Tüm enfekte hayvanlar, tükürük, nazal ve rektal sürüntülerde 3 dpi'de virüs için pozitif test edilmiştir.
Tükürük dökülmesi, IM grubunda 14 dpi'ye kadar ve IN grubunda deneyin sonuna kadar devam etmiştir (3 dpi'de zirve; Şekil 4B).
Nazal dökülme, her iki grupta da 7 dpi'de en yüksek seviyeye ulaşmış, IM grubunda 7/14 dpi'de IN grubuna göre önemli ölçüde daha yüksek viral yükler görülmüştür (*p<0.05; Şekil 4C).
Rektal dökülme, IM grubunda 14 dpi'ye kadar ve IN grubunda 35 dpi'ye kadar (56 dpi'de hafif bir geri tepme ile) devam etmiş, her ikisi de 7 dpi'de zirve yapmıştır (Şekil 4D).
AUC analizi, enfekte gruplardan alınan tüm örneklerdeki viral yüklerin kontrol grubundakilerden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ve IM grubundaki nazal sürüntü yüklerinin IN grubundakilerden daha yüksek olduğunu doğrulamıştır (*p<0.05). Özetle, PRRSV dökülmesi erken meydana gelir ve enfeksiyondan sonra devam eder.
5. RT-qPCR-Pozitif Örneklerden Bulaşıcı PRRSV İzolasyonunun Doğrulanması
RT-qPCR-pozitif örneklerde bulaşıcı virüs varlığını doğrulamak için, PAM-KNU hücreleri kullanılarak virüs izolasyonu (VI) deneyleri yapılmıştır (Şekil 5). Serum örnekleri için, virüs izolasyonunun başarı oranı, IM grubunda enfeksiyondan 3 ila 14 gün sonra (dpi) toplanan örnekler için %100 (10/10) ve IN grubunda enfeksiyondan 3 ila 7 gün sonra (dpi) toplanan örnekler için %100 (10/10) olmuştur. Ancak, başarı oranı enfeksiyondan 14 gün sonra (%70), enfeksiyondan 21 gün sonra (%55.6) ve enfeksiyondan 28 gün sonra (%12.5) kademeli olarak azalmıştır.
Şekil 5. Her iki enfekte hayvandan 3 gün sonra (dpi) toplanan tükürük örneklerinden, iki pasaj kültüründen sonra üç bulaşıcı virüs suşu başarıyla izole edilmiştir. Nazal veya rektal sürüntülerden bulaşıcı virüs izole edilmemiştir.
6. PRRSV-1 Lleida 029_22 Enfeksiyonunun Neden Olduğu Sitokin Yanıtları
Sitokin seviyelerini değerlendirmek için enfeksiyondan sonraki ilk 14 gün boyunca serum örnekleri toplanmış ve üç grup arasında önemli farklılıklar ortaya koymuştur (Şekil 6). IFN-α seviyeleri, enfeksiyondan 3, 7 ve 14 gün sonra (dpi) her iki enfeksiyon grubunda da önemli ölçüde yükselmiş, IM grubundaki IFN-α seviyeleri, enfeksiyondan 14 gün sonra IN grubundakilerden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p<0.05). Proinflamatuar sitokinler IL-1α, IL-12 ve IL-6 benzer eğilimler göstermiştir: IL-1α, enfeksiyondan 3 gün sonra IN grubunda artmış ve sabit kalmış, IL-6 seviyeleri ise IM grubunda 7 ve 14 gün sonra kontrol grubundan önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (Şekil 6B, D-E). Özellikle, IL-6 seviyeleri, enfeksiyondan 14 gün sonra IM grubunda IN grubundakilerden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p<0.05). Enfekte hayvanların her iki grubundaki IL-1β artan bir eğilim göstermiş, IM grubu 3, 7 ve 14 dpi'de kontrol grubundan önemli ölçüde daha yüksek seviyeler gösterirken, IN grubu sadece 14 dpi'de önemli bir farklılık göstermiştir (Şekil 6C).
Şekil 6. IL-12 seviyeleri, 14 dpi'de IM grubunda IN grubundan ve kontrol grubundan önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (Şekil 6F). Genel eğilim, IM grubunda, özellikle 7 ve 14 dpi'deki IL-6 seviyelerinde daha güçlü bir proinflamatuar sitokin yanıtı göstermiş ve bu, IM grubundaki %100 ölüm oranı ile pozitif korelasyon göstermiştir.
7. PRRSV-1 Lleida 029_22 ile Enfekte Hayvanlarda Özgül ve Nötralize Edici Antikor Yanıtları
PRRSV-1 ve PRRSV-2'ye özgü antikorlar, ticari ELISA kitleri kullanılarak değerlendirilmiştir (Şekil 7A). Serokonversiyon, IM grubundaki hayvanların %70'inde ve IN grubundaki hayvanların %90'ında 14 dpi'de meydana gelmiştir. Her iki gruptaki S/P oranı, kontrol grubundakinden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p < 0.05). IN grubundaki antikor seviyeleri 21 dpi'de düşmeye başlamış, 42 dpi'de sabit kalmış, 56 dpi'de tekrar yükselmiş ve daha sonra 63 dpi'de hafifçe azalmıştır. Kontrol grubu deney boyunca seronegatif kalmıştır (S/P < 0.4).
Şekil 7. Nötralize edici antikor testi, IN grubunda, 28 dpi'de sadece düşük bir titre olan 2 log₂'nin tespit edildiğini, bunun daha sonra 56 dpi'de 3.71 log₂'ye kademeli olarak arttığını göstermiştir (Şekil 7B). Antikor titreleri, aynı zaman noktasında bireyler arasında farklılık göstermiş ve nötralize edici antikorların ortaya çıkışı, 28 dpi'den sonra serumdan bulaşıcı virüsün temizlenmesiyle aynı zamana denk gelmiştir (Şekil 4B). Kontrol grubunda nötralize edici antikor tespit edilmemiştir.
8. PRRSV-1 Lleida 029_22'nin Doku Homojenatlarında Tespiti ve İzolasyonu
Çeşitli dokulardaki viral yükleri ölçmek için RT-qPCR kullanılmıştır (Şekil 4F). IM grubunda, viral yükler dokular arasında nispeten tutarlı olup, en yüksek yükler akciğerlerde, mediastinal lenf düğümlerinde ve dalakta görülmüştür. IN grubunda, viral yükler dokular arasında önemli ölçüde farklılık göstermiş, en yüksek yükler bademciklerde ve mediastinal lenf düğümlerinde görülmüştür. Beklendiği gibi, IN grubundaki genel viral yük, farklı nekropsi zamanları ile ilişkili olabilen IM grubundakinden daha düşüktü. IN grubundaki enfekte hayvanlardaki doku yüklerindeki önemli değişkenlik, farklı ölüm zamanları ile de ilişkilendirilmiştir (12, 21 ve 43 dpi'de grileşmiş örnekler ve 63 dpi). Kontrol grubundan alınan hiçbir doku örneğinde viral RNA tespit edilmemiştir.
Tablo 1. Enfeksiyondan 12, 21 veya 43 gün sonra ölen hayvanlardan toplanan dokular aVI için pozitif test edilmiştir.
(Tablo Notu: Tablo 1, doku örneklerinden elde edilen RT-qPCR ve virüs izolasyonu sonuçlarını özetlemektedir. "MLN" mediastinal lenf düğümlerini ve "ILN" inguinal lenf düğümlerini belirtmektedir.)
9. PRRSV ile Enfekte Dokuların Patolojik ve İmmünohistokimyasal Analizi
Nekropsi bulguları: PRRSV enfeksiyonundan sonra ölen hayvanlar (özellikle enfeksiyondan 12 ila 21 gün sonra ölenler), purpurik cilt, genel ödem, şiddetli lenfadenopati, splenomegali (bazen foliküler hiperplazi ile) ve gastrik hemoraji dahil olmak üzere önemli sistemik lezyonlar göstermiştir. Akciğer lezyonları belirgindi, interstisyel pnömoni ile uyumlu, kısmi çökme, multifokal konsolidasyon ve kırmızımsı-kahverengi maküller göstermiş, erken ölen hayvanlarda daha şiddetli lezyonlar görülmüştür (Şekil 8A). Burun içi enfeksiyonlu hayvanların yaklaşık %20'sinde ikincil bakteriyel enfeksiyondan kaynaklanan apseler, perikardit ve artrit de gelişmiştir. Kontrol hayvanlarında brüt lezyon gözlenmemiştir.
Şekil 8. Histopatolojik analiz, IM ve IN gruplarında erken ölen (12-21 dpi) hayvanlarda interstisyel pnömoni skorlarının 1.83 ila 3.33 puan arasında değiştiğini göstermiştir. Ancak, bu skorlar 63 dpi'de (kontrol grubu, 0.17-0.83 puan; IN grubu, 0.50-1.17 puan) kurban edilen hayvanlarda önemli ölçüde azalmıştır. Özellikle, IN grubundaki bademcik histolojik skoru, 63 dpi'de kontrol grubundakinden önemli ölçüde daha yüksek olmuştur (p<0.05), ancak diğer dokularda önemli farklılıklar gözlenmemiştir (Şekil 8C).
(Altyazı: Şekil 8B histopatolojik skorları göstermekte ve Şekil 8C, 63 dpi'de çeşitli grupların histolojik skorlarını karşılaştırmaktadır)
Mikroskobik patoloji, tüm enfekte hayvanların akciğerlerinde interstisyel pnömoni (alveol duvarı kalınlaşması, hücresel proliferasyon ve inflamatuar hücre infiltrasyonu) ortaya koymuştur. Alveollerde eksüda ve nekrotik doku, vasküler hasar belirtileri ile birlikte mevcuttu. Lenfoid doku (lenf düğümleri ve dalak), vasküler hasar (örneğin, tromboz ve vaskülit) eşliğinde şiddetli lenfopeni ve nekroz göstermiştir. Beyaz madde (Şekil 9A) perivasküler inflamatuar hücre infiltrasyonu, ödem ve gliosis gözlenmiştir.
İmmünohistokimyasal (IHC) analiz, enfekte hayvanların akciğerlerinden, lenf düğümlerinden, bademciklerinden ve dalaklarından makrofajlarda ve bazen tip II pnömositlerde PRRSV antijenlerini tespit etmiştir (Şekil 9B). Viral antijenler ayrıca beyindeki perivasküler inflamatuar hücrelerde de tespit edilmiştir.
Şekil 9. PRRSV enfeksiyonu, öncelikle makrofajlarda lokalize olan, akciğerlerde, lenfoid dokularda ve beyinde yaygın patolojik hasara neden olmakta, sistemik patolojik özellikler sergilemektedir.
Tartışma
PRRSV, monositer hücre hatları için kısıtlı bir tropizme sahiptir ve geleneksel olarak alveoler makrofajlar (PAM'ler) ve MARC-145 hücreleri kullanılarak izole edilmiş ve kültürlenmiştir. Ancak, PAM'lerin elde edilmesi zordur ve büyük partiden partiye değişkenliğe sahiptir ve yüksek patojeniteli suşların MARC-145'e uyarlanması zordur. Bu çalışmada, PAM'ler yerine, bazı saha suşlarına duyarlı olan ölümsüzleştirilmiş hücre hattı PAM-KNU'yu kullandık. Büyüme eğrisi PAM'lerde gözlemlenene benzer olan Lleida 029_22 suşunu başarıyla izole ettik. Şu anda, tüm PRRSV suşları için uygun evrensel bir hücre hattı yoktur ve çeşitli suşların izolasyonu için daha uygun hücre hatlarını belirlemek için gelecekte çalışmalar yapılması gerekmektedir.
Sonuç
Bu çalışma, yüksek virülanslı bir PRRSV-1 suşu ile burun içi enfeksiyon modelini başarıyla oluşturmuştur. Klinik belirtiler (yüksek ölüm oranı, şiddetli semptomlar, kalıcı yüksek ateş ve viremi), saha salgınlarında gözlemlenenlere yakından benzemektedir. Temel bulgu, enfeksiyon yolunun sonucu önemli ölçüde etkilediğidir: kas içi (IM) enfeksiyon %100 akut ölümle sonuçlanırken, burun içi (IN) enfeksiyon sadece %30 ölüm oranına sahipti ve enfekte domuzlar sonunda tamamen iyileşti. Bu önemli farklılık, çiftlik içi IM enjeksiyon uygulamalarının nozokomiyal bulaşma yoluyla salgının şiddetini önemli ölçüde artırabileceği riskini vurgulamaktadır.
Mesajınız 20-3.000 karakter arasında olmalıdır!